『壹』 怎麼使用多功能酶標儀檢測雙熒光素酶報告基因
以Promega公司雙熒光素酶檢測試劑盒為例：
1. 試劑准備
按照說明書配製PLB細胞裂解液、LAR II檢測液、Stop&Glo檢測液。
2.儀器准備
准備單管或微孔板發光檢測儀
3. 樣品准備
按照說明書使用PLB細胞裂解液裂解細胞，取20ul細胞裂解液
4. 檢測過程
a) 在1.5ml離心管中加入20ul細胞裂解液，然後加入100ul的LARII溶液，混合後放入發光檢測儀檢測第一次發光值；
b) 然後加入Stop&Glo檢測液，終止第一次發光，同時開始第二次發光，混合後放入發光檢測儀檢測第二次發光值。
『貳』 如何使用多功能酶標儀檢測雙熒光素酶
報告基因檢測被廣泛應用於研究基因表達及外部刺激下原核和真核細胞的反應。Luciferase報告基因系統是以熒光素(luciferin)為底物來檢測螢火蟲熒光素酶(fireflyluciferase)活性的一種報告系統。可以極其靈敏、高效地檢測基因的表達。但是報告基因實驗中往往會受到各種實驗條件的影響，例如培養細胞的數目和活力的差別、細胞轉染和裂解的效率、以及加樣操作過程中引起的變異。Dual-Luciferase雙熒光素酶報告基因檢測系統中含有在同一細胞中同時表達的兩種熒光素酶。共轉染的「對照」報告基因會作為內對照，減小細胞活性和轉染效率對實驗的影響。因此雙報告系統減少了外部干擾，使得實驗數據更可信。Promega提供了一種先進的雙報告基因技術（Dual-reporter assays）,結合了螢火蟲熒光素酶測試和海腎熒光素酶測試，該技術同時使用兩個獨立的報告基因以提高實驗的准確性，Biotek synergy 系列微孔板檢測儀作為雙報告基因的檢測分析平台獲得了Promega DLR 認證。
在雙報告基因系統中，通常一個報告基因用於檢測特定實驗條件下待測物的反應，即「實驗」reporter，另一個報告基因用來檢測實驗條件，類似於內部對照，用於校準「實驗」reporter的數據。通過這種方法，可減少內在的變化因素所削弱的實驗准確性，例如：轉染效率、細胞活性、細胞裂解差異以及加樣操作過程中引起的差異。Promega公司的Dual-Luciferase系統利用螢火蟲和海腎熒光素酶的活性分別檢測實驗組和對照組。螢火蟲熒光素酶是一種分子量為61KD的單體酶，分兩步催化蟲熒光素的氧化反應，產生560nm的光，海腎熒光素酶是一種分子量為36KD的單體酶，催化海腎熒光素的氧化反應，產生中心波長為480nm的藍光。螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶沒有種源同源性，對應不同的反應底物，反應中沒有任何的交叉干擾。
『叄』 怎樣選購熒光酶標儀
熒光酶標儀(Fluorence microplate reader)是用來進行熒光檢測的酶標儀。通過激發光柵分光後的特定波長的光照射到被熒光物質標定的樣品上，會發出波長更長的發射光，通過發射光柵後到達檢測器，熒光的強度與樣品的濃度呈一定的比例。熒光檢測靈敏度高，可實時檢測，使用方便，檢測模式多樣，但是容易受外界干擾，激發光與發射光容易互相影響干擾檢測。
其用途主要是蛋白和核酸定量，酶活測定，熒光免疫分析，代謝物/被分析物定量，胞內鈣離子濃度的變化，熒光蛋白的報道基因分析 (GFP)，細胞存活/毒性/增殖/粘合分析，受體-配基結合，蛋白-DNA相互作用，寡核苷酸多態性，酶活性分析，葯物篩選等方面。
熒光酶標儀最常見的品牌是的是美國寶特(BioTek)。BioTek 有多種熒光檢測儀器，從低成本、高精度的 FLx800�6�4 到模塊化的 Synergy�6�4 2 和 Synergy�6�4 4，可滿足各種熒光檢測需求。
FLx800 系列有五種不同型號的熒光酶標儀。分別是FLX800T，FLX800TB，FLX800TBP，FLX800TBI，FLX800TBID。其差別在於探針的位置頂部/底部，以及是否配有孵育，震盪，注射器，PCR讀板等。
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詳細資料請參考：on
http://www.bio1000.com/news/1/351982.html