動物遺傳質量檢測常用方法

A. 皮膚移植法應用於近交系實驗動物的遺傳質量檢測中，是因為什麼原理

主要來講近交系是近交程度達20代以上；而封閉群動物則只需4代 我又苦苦整理了一下內容 仔細看：近交系： 基因純合性，在一個近交系內的所有動物的基因位點都應當是純合子，在本品系內任何個體交配的後代也應當是純合子，即基因型一致，遺傳特性相同。從理論上說，這些動物是不應有暗藏的隱性基因的，用近交系動物做實驗時，不會因為隱性基因的暴露而影響實驗結果的一致性。 表現型的一致性，由於上述的特點，近交系動物任何可遺傳的體征都應是一致的，如生理、生化以及組織學、形態學上的特徵（毛色、體重等），甚至行為的類型都趨於一致。如果說，在個體間有時會出現一些差異，也只可能是後天環境不同一而造成的。遺傳穩定性和反應敏感性，近交系是由近親交配 20 代以上育成的，遺傳性是穩定的。近交系被確認後，只要堅持近交，並不斷監測，基因變異的機率是很低的。由於近交系動物的遺傳是高度純合的，對外部各種因素（包括試驗因子）的影響，反應高度敏感。這類動物有如高精密度的天平，外界微小的變化，天平就會擺動。 遺傳特徵的可辯別性，在同一近交系中，不應存在遺傳多態現象。在絕大多數近交系中主要的遺傳位點已有了分型，通過遺傳檢測可以對動物的品系進行辯認，有利於對品系遺傳純合性的維持。意義：由於近交系具有良好的、適合實驗要求的遺傳特性，被用在眾多的實驗領域，而且可減少每批次實驗的動物用量，容易獲得有統計學意義的實驗數據。它們是胚胎學、生理學、遺傳學研究的理想材料，也用於葯效試驗、安全評價等的動物實驗。進行組織或腫瘤移植實驗時，製作某些有遺傳因素的人類疾病的動物模型時，近交系是必不可少的材料。 封閉群動物封閉群動物在遺傳上具有一定的雜合性，因而這類動物繁殖力高，適應能力強，保種及繁殖生產的成本較低，應用范圍廣。與近交系相比，封閉群動物的個體在遺傳上仍存在相當的差異，因此實驗的可重復性，及反應的一致性就不如近交系動物。但是，封閉群動物在實驗中，卻有比近交系更接近自然種群反應的特點。所以在實際中，封閉群動物被廣泛地應用於教學、預實驗、一般的葯物初篩、以及毒性、安全性評價試驗之中。

B. 1、分析小鼠皮膚移植試驗的原理及其意義

原理：皮膚移植是純系動物遺傳質量控制的基本方法之一。意義檢測不同體系進行皮膚移植是否發生變異。小鼠皮膚移植試驗的原理是皮膚移植是純系動物遺傳質量控制的基本方法之一，利用組織相容性系統來檢測實驗動物是否發生變異，移植的在同一近交系中可以被互相接受，移植物在不同近交系中互相排斥。意義是檢測不同體系進行皮膚移植是否發生變異。利用組織相容性系統來檢測實驗動物是否發生變異，移植的在同一近交系中可以被互相接受，移植物在不同近交系中互相排斥。

C. 獲得遺傳工程動物模型的基本技術手段

一、基因工程又稱基因拼接技術和DNA重組技術，是以分子遺傳學為理論基礎，以分子生物學和微生物學的現代方法為手段，將不同來源的基因按預先設計的藍圖，在體外構建雜種DNA分子，然後導入活細胞，以改變生物原：有的遺傳特性、獲得新品種、生產新產品。狹義的基因工程僅指用體外重組DNA技術去獲得新的重組基因；廣義的基因工程則指按人們意願設計，通過改造基因或基因組而改變生物的遺傳特性。
過程1目的基因的獲取:從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增目的基因、人工合成法
2目的基因與運載體結合：將目的基因與運載體結合的過程，實際上是不同來源的DNA重新組合的過程
3將目的基因導入受體細胞：目的基因進入受體細胞內，並且在受體細胞內維持穩定和表達的過程
4目的基因的檢測和表達：DNA分子雜交技術（檢測目的基因、 分子雜交技術（檢測mRNA）、 抗原抗體雜交技術（檢測蛋白質）

D. 如何進行近交系動物遺傳質量控制

第章 總 則
第條 根據家科委第2號令《實驗物管理條例》規定加強醫實驗物科管理保證實驗物質量滿足科研究、教、醫療、產、經濟建設發展需要特製定本細則
第二條 本細則所稱實驗物指源清楚（遺傳背景及微物控制）用於科研究、教、醫療、產、檢定及其科實驗物
第三條 醫實驗物管理應符合家關標准化律、規《醫實驗物管理實施細則》要求並實行實驗物合格證制度
第四條 衛系統醫實驗物業務工作由衛部醫實驗物管理委員負責指導衛部聘請關專家組實驗物專家咨詢委員作衛部咨詢機構協助衛部宏觀面醫實驗物科技術發展、預測、評估、技術政策、組織協調等提供咨詢進行科研課題論證科研審查等
第二章 實驗物管理機構
第五條 衛部醫實驗物管理委員由衛部聘請關員及專家組負責全醫實驗物管理工作制定關條例執行細則協調監督各省、自治區、直轄市醫實驗物工作
第六條 各省、自治區、直轄市衛廳（局）應領導參加主管醫實驗物工作聘請關專家管理員立本省、（區）醫實驗物管理委員衛廳（局）領導負責本省、（區）醫實驗物管理工作按統標准負責核發實驗物合格證專業受衛部醫實驗物管理委員指導監督同接受科委宏觀統領導
遵照家科委意見各區醫實驗物管理委員根據情況加入各區科委組織跨行業實驗物管理委員京、滬兩醫實驗物管理委員衛部試點單位我先立兩實驗物管理機構應繼續做工作
第七條 各單位要立醫實驗物管理委員或組其員由科研員、實驗物管理及其關行政管理員組其領導工作由院（所）級主管科研工作領導負責該管委或組負責本單位關實驗物全面管理工作
第三章 醫實驗物質量檢定標准
第八條 醫實驗物遺傳檢測標准
醫實驗物必須根據遺傳質量控制要求制定科管理制度保證同物遺傳質量標准（雜交系、遠交系、封閉群近交系）
近交系、鼠遺傳質量標准
、管理制度
1．引種源清楚應帶譜系及物特性資料（近交代數、交配式、遺傳組、物特性）應符合際公認遺傳概貌標准
2．按際規定近交系物繁殖系統進行種群維持產
（1）基礎群血緣擴群
應同胞兄妹交配進行基礎群維持定按近交系保種進行並應具譜系及體卡片記錄
（2）產群
隨機交配（或紅綠燈）進行產連續繁殖3—5代其產群種鼠應與基礎群血緣關系保持相平行
二、遺傳質量檢查
1．選擇
（1）同系異體皮膚移植
論鼠鼠異體皮膚移植直鑒定近交系經典由於該既經濟權威列首選
（2）化電泳
近利用同功酶蛋白質態性近交系物進行遺傳監測1種規由於其快速、准確、靈敏檢亞系物比起皮膚移植其獨特處作近交系、鼠遺傳質量檢查重要
2．位點選擇
近交系物遺傳品質變異主要3面素
（1）遺傳污染；
（2）遺傳飄變；
（3）遺傳突變；
3面遺傳污染另兩面定間內發改變頻率低位點選擇根據現用10種近交系鼠選擇位於7條染色體8差異性位點作檢查第線位點任何種品系發遺傳污染8位點某些位點現雜合或者變異考慮位點選擇盡量布染色體再選擇位於5條染色體五比較容易操作耗資較少位點作第二線位點檢查鼠選擇7位點進行檢查作第線位點原則第線位點檢查發現問題再進行第二線位點檢查
第線位點：
Hbb,Car—2Gpd—1Es—3Trf,Gpi,Idh—1
第二線位點：
Pgm—1Es—10Sep—1Got—2

3．物選擇
近交系鼠、鼠每品系至少進行四物異體皮膚移植皮膚移植功者需核群選送四物（2♂2♀）進行化位點檢查皮膚移植失敗者則考慮進行化位點檢查（見附表1、2）
第九條 醫實驗物微物控制標准：
級：普通物即要求排除畜共患病病原體；
二級：清潔物要求排除畜共患病及物主要傳染病病原體；
三級：特殊病原體（SPF）物要求達二級標准外應排除些病原體
四級：菌物排除非植入切命體
、實驗物病原菌檢測等級標准（見附表5）
二、實驗物病毒檢測等級標准（見附表3、4）
三、實驗物寄蟲檢測等級標准（見附表6）
實驗物病理檢查標准：
級：普通物
外觀：毛色光滑清潔貼身；潑行異；臉腫；背穹起；四肢、尾皮膚缺損；喘鼻泌物；肛門清潔
病理解剖：肝、脾、淋巴結腫；肺、肝、脾、腎肉眼見應病灶
二級：清潔物
具級普通物指標顯微鏡檢查沒二級微物病原病變
三級：特殊病原體物
具級普通物指標二三級物微物病原病變
四級：菌物
除具級指標外含二三級物微物病原病變；脾、淋巴結等臟器具菌物組織結構
關遺傳突變免疫缺損等物根據各品系特徵規定檢查
第四章 醫實驗物條件設施檢定標准
第十條 實驗物及物實驗設施標准
確保實驗物遺傳特性微物控制標准相穩定實驗結科水平目
第十條 實驗物設施應結構：
、前區包括：隔離檢疫室、庫房、辦公室、飼料庫、維修室走廊
二、控制區（飼育區）包括：育種室、種群擴室、繁殖室、待發室、清潔物品貯藏室、飼料製作室清潔走廊
三、勤區包括：洗刷消毒間、廢棄物品存放、處理間、污物走廊等
第十二條 實驗物及物實驗設施要求
、普通物（通物）
1．外環境條件
（1）院容整齊、清潔、定期消毒；
（2）定綠化面積；
（3）設專用垃圾、物屍體存放處屍體解剖間物屍體須24內焚燒或按關規定處理；
（4）物室附近飼養非實驗用家禽、家畜
2．物室建築條件：
（1）要達定建築標准；
（2）型物飼養室進口直接外應緩沖間；
（3）防昆蟲紗門紗窗；
（4）花板光潔、能消毒；
（5）面平坦面及牆壁能洗刷；
（6）要自水封閉式水道（防止野鼠竄入）；
（7）要換氣裝置及防野鼠設備
3．飼養室內環境條件：
（1）室溫溫差應18度至29度間（、鼠、豚鼠鼠等）
（2）相溫度60％±20％；
（3）空氣氨含量應低於20ppm：
（4）室內雜訊60貝；
（5）飼養室內要整潔雜物、污物、昆蟲等
4．籠、飼具條件
（1）應使用易於清潔、消毒及操作籠具；
（2）飼具及飲水用具需能進行消毒並需使用銹材料製作
5．管理條件
（1）制度：要物室規章制度操作規程崗位責任制工作定額；
（2）工作記錄：籠卡飼養室記物帳目；
（3）環境記錄：溫度、濕度等要實填寫；
（4）員衛：要穿清潔工作服戴工作帽、口罩、手套穿工作鞋等；
（5）鋪墊物要消毒；
（6）要物室工作員專用洗澡設備
6．衛防疫設施
（1）要洗刷、消毒設備制度；
（2）隔離、檢疫設施及防疫措施
二、清潔物除達普通物要求外必須達列各項要求
1．建築條件
（1）盡能做清潔與污染物；
（2）門、窗要達密封要求；
（3）緩沖間；
（4）淋浴室或更衣室
2．飼育室內環境條件
（1）相濕度60％±5％；
（2）室內雜訊55貝；
（3）換氣裝置：強力通風效濾空調裝置；
（4）換氣數：全新風8／室內壓；
（5）室內昆蟲；
（6）室內照明：明暗各12左右或符合要求自採光；
（7）飼養室內牆壁較低部位及面每周消毒兩；
（8）排污物（包括鋪墊物等）設施應半封閉式能進行消毒防交叉污染
3．管理條件
（1）工作服、帽、飼料、籠、飼具等要消毒；
（2）工作員進入飼育區前要淋浴更衣
三、特殊病原體物與菌物設備要求（見附表9）
四、實驗物實驗室
實驗物實驗室低標准應達相應實驗物級別實驗物飼養室標准具體要求參照述條例
第十三條 實驗物飼料質控標准
、用於實驗物飼料應根據各種物同理特性發育同階段需要制定其營養份所含害物質安全限量（見附表7、8）
二、科設計各種實驗物飼料配
1．各種實驗物飼料配應根據實驗物同需要能量科設計
2．確定飼料配任意更改力求穩定
3．飼料添加抗菌劑、抗蟲劑、防腐防霉及激素等其葯物
4．用非標准飼料飼養實驗物
三、原料要求及保管
1．精選新鮮、雜質、毒、污染、霉變、蟲蛀、鼠咬各種原料
2．應設專門飼料庫房
飼料庫房應保持乾燥、通風、蟲、野鼠經保持清潔衛各種飼料或原料應類堆放整潔
3．維素類原料應存放避光、低溫乾燥處
4．加工品與原料應保管
5．飼料庫房內嚴禁存放雜品及毒性葯品等
6．飼料庫房必須建立嚴格領發、保管制度及完善管理手續
四、加工製作
選擇優質原料按飼料配比准確稱重充混勻植物油、維素及機鹽類先與少量粉料混勻再與量粉料充混勻加工制料塊應適宜硬度及適口性
料塊品裝入毒清潔飼料桶或清潔紙袋內封口貼或掛註明飼料種類、製作期及製作標簽品料塊存放超兩月
第十四條 實驗物檢疫要求
預防實驗物群體發傳染病避免新引進物原物及關員造危害提高實驗物健康水平特規定：
、新引進物必須隔離檢疫確定傳染病移入飼養區
二、畜共患傳染病疫區引進物
三、物發傳染病死亡應及進行處理（病理屍檢實驗室檢查）作診斷提處理意見報關負責或主管部門（各級實驗物管理委員）
四、傳染病應非傳染病物用於物試驗發傳染病原則全部銷毀；房屋、用具、籠架具、墊料、衣服、鞋帽等必須進行徹底消毒；物室消毒封閉定間才能放使用
五、實驗物發烈性傳染病流行應立即報告醫實驗物管理委員同採取嚴格隔離措施防傳染病蔓延；拖延或隱瞞報者所單位要承擔責任並吊銷其合格證
六、野物檢疫應由使用單位進行檢疫確認畜共患病及物傳染病使用
第五章 實驗物保種、引種、供應與應用
第十五條 本細則所稱保種、引種指擴產群提供種基礎種群（種群源清楚包括：遺傳背景微物控制情況及關資料）
第十六條 實驗物保種
、保種單位必須具符合實驗物級別要求設施條件由高、級實驗物科技員直接管理定期進行質量檢測
二、保種單位責任按計劃向產單位提供種所提供種物要保種單位負責簽發標明品系、遺傳背景、微物控制情況（物等級等資料）合格證副本
三、保種單位權根據引種單位情況提引種指導意見引種單位義務反饋關種產使用情況
第十七條 實驗物引種
、引種單位需獲實驗物產、供應合格證引種
二、各引種單位要定期向管委提供所引種產繁育等情況關資料
三、般情況近交系產群每應進行1遺傳質量檢測
第十八條 實驗物供應
、實驗物產、供應單位所提供實驗物必須保證質量要單位負責簽發標明遺傳背景、微物控制情況等關資料及實驗物合格證副本（註明：供應數量、期及使用實驗物課題）作使用實驗物合格根據
二、實驗物產、供應單位科研課題供應尚未取合格證物
三、實驗物產、供應單位權尚未取物實驗條件合格證單位停止供應實驗物
四、實驗物產、供應單位實驗物使用單位都應信守雙簽定供、需計劃合同（合同應按家合同簽定）
第十九條 實驗物應用
、應用實驗物應根據同目選用相應合格實驗物並具相應合格物實驗條件申報課題評審科研要應用合格實驗物作必備條件；應用合格實驗物所做鑒定效所產製品投入使用
二、實驗物運輸器具要安全靠符合微物控制等級要求同品系物混裝運輸程應保證實驗物健康安全
第六章 實驗物工作員
第二十條 實驗物產、供應單位必須適比例高級、級初級科技員各類員都要遵守實驗物飼育管理各項制度
第二十條 實驗物保種、產供應單位所提供種實驗物要認實驗物科技員簽章負責
第二十二條 事實驗物工作各級員都要實行資格認制度由省、市級醫實驗物管理委員負責定期考核並定期進行培訓提高業務水平考核績作評定晉升技術職稱依據
第二十三條 事實驗物工作員應享受必要勞保護福利待遇保證其健康
第二十四條 實驗物工作員應定期進行身體健康檢查發現患傳染病者特別畜共患病者應及調換工作
第七章 獎勵與懲罰
第二十五條 各級醫實驗物管理委員期事實驗物飼育管理、科研工作忠於職守辛勤勞取顯著績單位應給予表彰、獎勵或授予榮譽稱號
第二十六條 違反細則供應應用合格實驗物產供應應用單位由醫實驗物管理委員別同情況給予警告限期改進責令關閉等處理；造損失追究其行政責任民事責任；情節嚴重構犯罪應追究其刑事責任
第八章 附 則
第二十七條 本細則由衛部醫實驗物管理委員負責解釋
第二十八條 本細則自19896月1起執行
表1 用10近交系鼠品系差異性位點
------------------------------------------------------------------------------
Locus(chromosome number)
Strain Hbb(7) Car-2(3) Gpd-1(4) Es-1(8) Es-3(11) Trf(9) Gpi-1(7) Idh-1(1)
----------------------------------------------------------------------
615 s a b b c b a a
TA1 s b b a a b a a
TA2 d a b b c b b a
BALB/c d b b b a b a a
C57BL/6J s a a a a b b a
CBA/N d a b b c a b b
CBA/JOla d b b b c a b b
C3H/He d b b b c b b b
DBA/2N d b b b c b a b
KK s a a b c b b a
表2 用4近交系鼠品系差異性位點
------------------------------------------------------------
Locus
Es-3 Es-4 Es-6 ES-8 ES-9 ES-10
Strain
------------------------------------------------------------
F344/N a b a b a a
LOU/cN a b b b a a
SHR/Ola b a a b a a
WKY/Ola d b a a c b
表3 齒類實驗物病毒檢測等級標准
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
｜ ｜ 物種類
物等級 ｜ 病 毒 ｜－－－－－－－－－－－
｜ ｜鼠｜鼠｜豚鼠｜鼠
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
四｜三｜二｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
級｜級｜級｜普｜淋巴細胞性脈絡叢腦炎病毒Lymphocytic Choriomegitis Virus(LCM)｜ 0 ｜ 0 ｜ ｜ 0
: ｜: ｜: ｜級通物｜流行性血熱病毒Epizootic Hemorrhagic Fever Virus(EHFV) ｜ 0 ｜ 0 ｜ ｜
悉｜｜清｜: ｜鼠脫腳病病毒(鼠痘病毒)Eotromelia Virus(poxvirus of mice) ｜ 0 ｜ ｜ ｜
｜特｜潔｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜殊｜｜－－－｜－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－｜－－｜－－｜－－｜－－－
物｜病｜物 ｜鼠肝炎病毒Mouse Hepatitis Virus(MHV) ｜ 0 ｜ ｜ ｜
（｜原｜－－－－－｜－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－｜－－｜－－｜－－｜－－－
｜體 ｜猴病毒Simian Virus5(SV5) ｜ ｜ ｜ 0 ｜ 0
菌｜ ｜仙台病毒Sendai Virus ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0
｜物 ｜鼠肺炎病毒Pneumonia Virus of Mice(PVM) ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0
物｜ ｜呼腸弧病毒3型Reovirus Type 3(Reo-3) ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0
｜ ｜鼠腦脊髓炎病毒Mouse Encephalomyelitis Virus ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0
已｜ ｜鼠腺病毒Mouse Adenovirus(MAd) ｜ 0 ｜ 0 ｜ ｜
知｜ ｜K病毒KVirus (KV) ｜ 0 ｜ ｜ ｜
菌｜ ｜鼠微病毒Minute Virus of Mice(MVM) ｜ 0 ｜ ｜ ｜
｜ ｜瘤病毒Polyoma Virus ｜ 0 ｜ ｜ ｜
物｜ ｜Toolan's病毒(H-1)Toolan's Virus(H-1) ｜ ｜ 0 ｜ ｜
）｜ ｜鼠潛病毒Kilham's Rat Virus(KRV) ｜ ｜ 0 ｜ ｜
｜ ｜鼠冠狀病毒Rat Corona Virus(RCV) ｜ ｜ 0 ｜ ｜
｜ ｜鼠涎淚腺炎病毒Sialodacryoadenitis Virus(SDAV) ｜ ｜ 0 ｜ ｜
｜ ｜新鼠流行性腹瀉病毒Epizootic Diarrhea of Infant Mice(EDIM｜ 0 ｜ ｜ ｜
｜ ｜乳酸脫氫酶病毒Lactic Dehydrogenase Virus(LDH) ｜ 0 ｜ ｜ ｜
｜ ｜鼠巨細胞病毒Mouse Cytomegalovirus(MCMV) ｜ 0 ｜ ｜ ｜
｜－－－－－－－｜－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－｜－－｜－－｜－－｜－－－
｜能檢病毒 ｜ ｜ ｜ ｜
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
註：0要求沒
表4 實驗兔、貓、狗猴病毒檢測等級標准
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
｜ ｜ 物種類
物等級 ｜ 病 毒 ｜－－－－－－－－－－－
｜ ｜ 兔｜ 貓｜ 狗｜猴
－－－－－－－－｜－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－｜－－｜－－｜－－｜－－
四｜三｜二｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
級｜級｜級｜通｜狂犬病病毒Rabies Virus ｜ ｜ ｜ 0 ｜
：｜：｜：｜級｜B病毒B Virus ｜ ｜ ｜ ｜0
悉｜｜清｜普物｜兔細病毒（兔血症毒）Rabbit Parvovirus ｜ 0 ｜ ｜ ｜
｜特｜潔｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜殊｜｜－－｜－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－｜－－｜－－｜－－｜－－
物｜病｜物 ｜貓白細胞減少症病毒（細病毒）Feline Panleukopenia Virus｜ ｜ 0 ｜ ｜
｜原｜ ｜狗細病毒Canine Parvovirus ｜ ｜ ｜ 0 ｜
｜體｜ ｜猴逆轉D型病毒Simian Immunodeficiency D ｜ ｜ ｜ ｜0
｜｜ ｜猴艾滋病病毒Simian Immunodeficiency Virus ｜ ｜ ｜ ｜0
｜物｜－－－－｜－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－｜－－｜－－｜－－｜－－
｜ ｜猴泡沫病毒Simian Spumavirus ｜ ｜ ｜ ｜0
｜ ｜猴病毒40Simian Virus 40(SV 40) ｜ ｜ ｜ ｜0
｜ ｜狗病毒性肝炎病毒（狗腺病毒）Canine Viral Hepatitis Virus｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜兔痘病毒Rabbit Poxvirus ｜ 0 ｜ ｜ 0 ｜
｜ ｜輪狀病毒Rotavirus ｜ 0 ｜ 0 ｜ ｜0
｜ ｜仙台病毒Sendai Virus ｜ 0 ｜ ｜ 0 ｜
｜ ｜猴巨細胞病毒Simian Cytomegatovirus ｜ ｜ ｜ ｜0
｜ ｜貓嵌杯病毒Feline Calicivirus ｜ ｜ 0 ｜ ｜
｜ ｜貓病毒性氣管炎病毒（痘病毒）Feline Rhinotracheitis Virus｜ ｜ 0 ｜ ｜
｜ ｜狗皰疹病毒Canine Herpesvirus ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜狗瘟熱病毒（付流病毒）Canine Distemper Virus ｜ ｜ ｜ 0 ｜
｜ ｜猴痘病毒Simian Poxvirus ｜ ｜ ｜ 0 ｜0
｜ ｜猴腺病毒Simian Adenovirus ｜ ｜ ｜ ｜0
｜－－－－－－｜－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－｜－－｜－－｜－－｜－－
｜能檢病毒 ｜ ｜ ｜ ｜
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
註：0要求沒
表5 實驗物病原菌檢測等級標准
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
｜ ｜ 物 種 類 ｜檢驗
物等級 ｜ 病 原 菌 ｜－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－｜－－－－－－
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜鼠｜鼠｜豚鼠｜鼠｜ 兔 ｜ 狗 ｜ 猴 ｜離｜免疫
－－－－－－－－｜－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－－
四｜三｜二｜ ｜沙門氏菌Salmonella spp ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ ｜ 0 ｜ √ ｜
級｜級｜級｜級 ｜單核細胞增性李氏桿菌Listeria mono- ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ ｜ ｜ √ ｜
：｜：｜：｜： ｜cytogenes ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
悉｜｜清｜普 ｜假結核耶氏菌Yersinia pesudotuberculosis ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ ｜ ｜ √ ｜√
｜特｜潔｜通 ｜布魯氏菌Brucella ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ 0 ｜ ｜ √ ｜
｜殊｜｜ ｜志賀氏痢疾菌Shigella ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ 0 ｜ √ ｜√
物｜病｜物｜物 ｜結核枝桿菌Mycobacterium tuberculosis ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ 0 ｜ √ ｜√
（｜原｜（｜ ｜皮膚真菌 ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ ｜
已｜體｜｜－－｜－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－
知｜｜物 ｜血敗血性巴氏桿菌Pastcurella mnlto- ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ ｜ ｜ √ ｜
菌｜物｜種 ｜cida ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜（｜ ｜支氣管敗血性包特氏菌Berdetella bron- ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ ｜ ｜ √ ｜
物｜｜應 ｜chiseptica ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜物｜ ｜念珠狀鏈桿菌Streptobacillus moniliformis｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ ｜ ｜ √ ｜
｜種｜源 ｜腸結腸炎耶氏菌Yersinia cnterocoliitica｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ ｜ ｜ √ ｜
菌｜｜於 ｜肺支原體Mycoplasma pulmonis ｜ 0 ｜ 0 ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ √ ｜√
｜應｜剖 ｜溶神經支原體Mycoplasma neurolyticum ｜ 0 ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ √ ｜
物｜｜腹 ｜關節炎支原體Mycoplasma arthrilidis ｜ ｜ 0 ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ √ ｜
）｜源｜產 ｜鼠棒狀桿菌Corynebacterium muris ｜ 0 ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ √ ｜√
｜於｜） ｜泰澤氏菌Bacillus Piliformis ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ ｜ ｜ ｜√
｜剖｜－－－－｜－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－
｜腹 ｜嗜肺巴氏桿菌Pasteurella Pneumotropica ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ ｜ ｜ √ ｜
｜產 ｜肺炎克雷伯氏菌Klebsiella pneumoniac ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ ｜ ｜ √ ｜
｜） ｜金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ ｜ ｜ √ ｜
｜ ｜肺炎鏈球菌Streptococcus pneumoniac ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ ｜ ｜ √ ｜
｜ ｜化膿性鏈球菌Streptococus pyogenes ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ ｜ ｜ √ ｜
｜ ｜綠膿桿菌Pscudomonas aeruginosa ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ ｜ ｜ √ ｜
｜ ｜特定病原菌 ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜ ｜ ｜ √ ｜
｜－－－－－－｜－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－
｜ ｜ 註： √檢驗式 0要求沒
表6 實驗物寄蟲監測等級標准
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
｜ ｜ 物 種 類
物等級 ｜ 寄 蟲 ｜－－－－－－－－－－－－－－－－－－
｜ ｜鼠｜鼠｜豚鼠｜兔｜貓｜狗｜猴
－－－－－－－－－｜－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－｜－－｜－－｜－－｜－｜－｜－｜－－－
四｜三｜二｜級普｜體外寄蟲（節肢物） ｜ 0 ｜ 0 ｜ 0 ｜0

E. 醫學實驗動物管理實施細則(89)

第一章總則第一條根據國家科委第2號令《實驗動物管理條例》的規定，為加強醫學實驗動物科學管理，保證實驗動物質量，滿足科學研究、教學、醫療、生產、經濟建設發展的需要，特製定本細則。第二條本細則所稱實驗動物是指來源清楚（遺傳背景及微生物控制）用於科學研究、教學、醫療、生產、檢定及其它科學實驗的動物。第三條醫學實驗動物的管理應符合國家有關標准化法律、法規和《醫學實驗動物管理實施細則》的要求，並實行實驗動物合格證制度。第四條衛生系統醫學實驗動物業務工作由衛生部醫學實驗動物管理委員會負責指導。衛生部聘請有關專家組成實驗動物專家咨詢委員會，作為衛生部的咨詢機構，協助衛生部在宏觀方面對醫學實驗動物科學技術的發展、預測、評估、技術政策、組織協調等提供咨詢，進行科研課題論證和科研成果的審查等。第二章實驗動物管理機構第五條衛生部醫學實驗動物管理委員會由衛生部聘請有關人員及專家組成，負責全國醫學實驗動物管理工作，制定有關條例執行細則，協調和監督各省、自治區、直轄市的醫學實驗動物工作。第六條各省、自治區、直轄市衛生廳（局）應有領導參加主管醫學實驗動物工作，聘請有關專家和管理人員成立本省、（區）醫學實驗動物管理委員會，在衛生廳（局）的領導下負責本省、（區）醫學實驗動物管理工作，按統一標准負責核發實驗動物合格證，在專業上受衛生部醫學實驗動物管理委員會的指導和監督，同時接受地方科委在宏觀上的統一領導。
遵照國家科委意見，各地區醫學實驗動物管理委員會，可根據情況加入各地區科委組織的跨行業實驗動物管理委員會。京、滬兩地的醫學實驗動物管理委員會是衛生部的試點單位，也是我國最先成立的。兩個實驗動物管理機構應繼續做好工作。第七條各單位要成立醫學實驗動物管理委員會或小組，其人員由科研人員、實驗動物管理及其有關行政管理人員組成，其領導工作由院（所）級主管科研工作的領導負責。該管委會或小組負責本單位有關實驗動物的全面管理工作。第三章醫學實驗動物質量檢定標准第八條醫學實驗動物遺傳檢測標准
醫學實驗動物必須根據遺傳質量控制的要求，制定科學的管理制度，以保證不同動物的遺傳質量標准（雜交系、遠交系、封閉群和近交系）。
近交系大、小鼠遺傳質量標准
一、管理制度
1．引種來源清楚，應帶有譜系及生物學特性資料（如近交代數、交配方式、遺傳組成、生物學特性），應符合國際公認的遺傳概貌標准。
2．按國際規定的近交系動物的繁殖系統，進行種群維持和生產。
（1）基礎群和血緣擴大群
應以同胞兄妹交配方法進行。基礎群的維持一定按近交系的保種方法進行，並應具有譜系及個體卡片記錄。
（2）生產群
以隨機交配方法（或紅綠燈方法）進行生產，可連續繁殖3—5代，其生產群種鼠應與基礎群血緣關系保持相對平行。
二、遺傳質量檢查
1．方法的選擇
（1）同系異體皮膚移植法
無論是大鼠還是小鼠異體皮膚移植的方法，一直是鑒定近交系的經典方法，由於該方法既經濟，又權威，列為首選方法。
（2）生化電泳方法
這是近年來利用同功酶和蛋白質的多態性對近交系動物進行遺傳監測的1種常規方法。由於其快速、准確、靈敏，在檢出亞系動物時，比起皮膚移植法有其獨特之處，可作為近交系大、小鼠遺傳質量檢查的又一重要方法。
2．位點的選擇
近交系動物遺傳品質的變異主要有3方面的因素。
（1）遺傳污染；
（2）遺傳飄變；
（3）遺傳突變；
在這3方面中遺傳污染最大，而另兩方面，在一定時間內發生改變的頻率很低。因此在位點選擇上，根據現有常用的10種近交系小鼠選擇了位於7條染色體上8個差異性位點，作為檢查的第一線位點。如果任何一種品系發生過遺傳污染，這8個位點中某些位點將會出現雜合或者變異。考慮到位點的選擇盡量分布在多個染色體上，再選擇位於5條染色體上的五個比較容易操作，耗資較少的位點作為第二線位點的檢查。大鼠選擇7個位點進行檢查，作為第一線位點。原則上，第一線位點的檢查如果發現了問題，將不再進行第二線位點檢查。
第一線位點：
Hbb，Car－2，Gpd－1，Es－3，Trf，Gpi，Idh－1。
第二線位點：
Pgm－1，Es－10，Sep－1，Got—2。
3．動物的選擇
近交系大鼠、小鼠每個品系至少進行四隻動物異體皮膚移植。皮膚移植成功者還需從核心群中選送四隻動物（2♂，2♀）進行生化位點的檢查。皮膚移植失敗者，則不考慮進行生化位點的檢查。（見附表1、2）。

F. 2. 鑒定轉基因動物的方法有哪些

一、植物的遺傳轉化

20世紀70年代末80年代初，人們用野生型Ri和Ti質粒轉化煙草和馬鈴薯細胞獲得再生植株後，以Ti質粒為載體的植物遺傳轉化技術隨之被建立。近年來植物的遺傳轉化技術得到了迅速發展，建立了多種轉化系統。按照基因引入受體植物細胞的方法，植物遺傳轉化技術大體可分為兩類：以載體為媒介的基因轉移和基因或DNA的直接轉移。所謂以載體為媒介的基因轉移就是將目的基因連於某一載體DNA上，然後通過寄主感染受體植物等途徑將外源基因轉入植物細胞的技術。DNA的直接轉移是指利用植物細胞生物學特性，通過物理、化學和生物學方法將外源基因轉入植物細胞的技術。

（一）載體法轉化 農桿菌介導的轉化是最主要的一種載體轉化方法。利用經過改造的農桿菌Ti質粒為載體可以高效地轉移外源基因。所獲得的轉化植物有兩種基本方法：一種是1979年Marton等以植物原生質為受體的共培養法（ocultivation）；一種是1985年Horsch等人建立的葉盤法（leaf disc cocultivation）。

共培養法是把農桿菌與植物原生質體共同培養以實現轉化的方法。其程序包括農桿菌對初生細胞壁的原生質體的轉化、轉化細胞的篩選和誘導轉化細胞分化並再生植株。

葉盤法實際上是對共培養法加以改進後而創立的一種轉化方法。用農桿菌感染葉片外植體並短期共培養。在培養過程中，農桿菌的vir基因被誘導，它的活化可以啟動T-DNA向植物細胞的轉移。共培養後，也要進行轉化的外植體的篩選、愈傷組織的培養、誘導分化等步驟，以得到再生植株。葉盤法由於不需進行原生質體操作等，方法簡單，獲得轉化植株也更快，是用植物外植體為材料進行轉基因的一個良好途徑。

農桿菌介導的遺傳轉化是大多數雙子葉植物轉化中常採用的方法，但由於農桿菌具有宿主局限性，極少能感染單子葉植物，特別是一些重要的農作物如水稻、小麥、玉米等對農桿菌不敏感，難於應用此法進行遺傳轉化。

除上述以Ti質粒為載體的基因轉化外，還可以用脂質體（liposome）為載體進行遺傳轉化。脂質體是由磷脂組成的膜狀結構，因此可將DNA分子包裝在脂質體內以避免受體細胞DNase的降解，把DNA分子導入到植物的原生質體中去。

（二）基因直接轉移的方法 這是指既不依賴於農桿菌，也不依賴其他載體或媒介的一些基因轉移方法。

1．電激和電注射法 電脈沖能改變細胞膜的透性。通過高壓電脈沖的電激穿孔作用把外源DNA引入植物原生質體的方法就稱為電激法（electroporation）。這種方法現已較廣泛地應用於單子葉和雙子葉植物以及動物的基因轉移，如20世紀80年代末用此法將新黴素磷酸轉移酶（NPT Ⅱ）基因轉入玉米自交系的原生質體，已再生成植株。

通過電激技術把基因直接引入完整的植物細胞或組織的方法，稱作電注射（electroinjection）。這種方法可避免原生質體培養和再生成植株的繁雜操作與困難，因而具有巨大的應用潛力。

2．基因槍法 基因槍法又稱粒子轟擊技術（particle bombardment）。這一方法是用粒子槍把表面吸附有外源DNA的金屬微粒高速地射進植物細胞或組織。由於此法快速簡便，不受宿主范圍限制，而受體植物細胞不需去除細胞壁，轉化率又高，被轉化的細胞或組織容易再生成植株，因而頗受關注。

3．微注射法 微注射法（microinjection）是利用顯微注射儀等，通過機械的方法將外源基因或DNA直接注入細胞核或細胞質。與其他方法相比，這個方法對外源遺傳物質的導入更為直接和有效。

微注射法除用於植物細胞外，近些年還發展到用於直接注射植物子房，這樣更有利於外源遺傳物質對幼胚的轉化。這方面的工作我國於20世紀70年代即已進行了理論與實踐的探索，並已獲得抗枯萎病的棉花轉化植株抗蟲棉等。

二、轉基因動物技術及其應用

（一）轉基因動物的概念 藉助基因工程技術把外源目的基因導入生殖細胞、胚胎幹細胞和早期胚胎，並在受體染色體上穩定整合，使之經過各種發育途徑得到能把外源目的基因傳給子代的個體，即轉基因動物（transgenic animal）。轉入的目的基因稱為轉基因（transgene），這種轉移目的基因的過程稱為轉基因作用（transgenesis）。關於「轉基因」的概念，通常只限於動、植物中經基因工程技術進行的基因轉移，因此品種間不論有性或無性雜交獲得新基因的途徑都不屬此范疇。

（二）轉基因動物技術 轉基因動物技術是20世紀80年代初發展起來的一項生物技術，它克服了物種之間的生殖隔離，實現了動物物種之間遺傳物質的交換和重組。根據外源基因導入的方法和對象的不同，至今主要有3種途徑可以產生轉基因動物，即顯微注射法、反轉錄病毒法和胚胎幹細胞法。反轉錄病毒轉移基因的基本方法在前面已有簡介，這里只介紹顯微注射法和胚胎幹細胞法兩種。

1．受精卵原核顯微注射法 顯微注射技術是從動物胚胎學研究移核實驗的基礎上發展而來。20世紀80年代初期人們利用這一方法向動物生殖細胞轉移外源基因，成功地建立了轉基因小鼠。1985年轉基因綿羊和轉基因豬問世，以後轉基因大鼠、兔、雞、牛、魚等都已陸續取得成功，可見顯微注射法是迄今應用得較為普遍而又最有成效的一種獲得轉基因動物的技術。

本方法是在顯微鏡下，用直徑約為1μm的玻璃管直接插入受精卵的雄原核內，將毛細管內所帶有的外源基因的DNA注入原核，然後將其移植到假孕母體輸卵管或子宮內並發育成子代個體。為了解轉基因的整合情況，可酌情應用斑點雜交、多聚酶鏈式反應或Southern印跡雜交等方法對子代個體DNA進行檢測。

顯微注射法的優點是導入的外源基因片段可長達50 kb，且無需載體，外源基因在宿主染色體上的整合率相對較高。其不足之處是外源基因的整合是隨機的，因而難以控制其整合率；再者，對外源基因能否穩定整合於受體基因組的檢測，必須等到子一代個體出生後經過選擇才能確定，不利於在生育期長、產仔少的大家畜中應用。

2．胚胎幹細胞介導法 胚胎幹細胞（embryonic stem cell，ES）是指從哺乳動物胚胎囊胚期內的細胞團中分離出來的尚未分化的胚胎細胞，這種細胞具有發育的多能性，能夠分化出各種組織。20世紀80年代中期人們開始研究利用ES細胞獲得轉基因動物的方法。這個途徑是將外源基因直接導入ES細胞，經體外培養篩選後再注入到受體囊胚腔中，與其中的囊胚細胞聚集在一起，成為受體胚胎的一部分，參與其分化。由這種胚胎發育而成嵌合體的轉基因動物，即其中有一部分組織來源於整合有外源基因的供體ES細胞。在嵌合過程中，被轉化的ES細胞分化而成的生殖細胞可通過雜交將引入的外源基因傳遞下去。

在以胚胎幹細胞為媒介獲得轉基因動物的技術中，既可以用多種方法將外源基因導入ES細胞，且細胞的鑒定、篩選比較方便，又可預先在細胞水平上測定外源基因的拷貝數、定位和表達的水平以及插入的穩定性等，而且將ES細胞注入囊胚的操作較易進行，整合率相對較高。只是建立ES細胞系本身就是一項難度極高的工作，目前小鼠ES細胞系雖已建立，但在豬、羊中還未能得到真正穩定的ES細胞株。

（三）轉基因動物的應用 轉基因動物的研究內容非常廣泛，20世紀80～90年代以來從基礎理論到應用技術在深度和廣度上都有了很大發展，並已日漸由實驗室走向生產實踐。

1．在基因表達調控研究方面的應用 利用轉基因動物可作為在體內研究外源基因表達調控的「反應器」，下面僅就DNA順式調控元件和基因在發育中的時空調節為例予以介紹。

（1）順式調控元件的研究 異常的脂蛋白水平與動脈粥樣硬化等疾病有關。人類有5種脂蛋白，各自含有不同的載脂蛋白。現已發現約有17種載脂蛋白，它們的編碼基因已測序，是用於研究心血管疾病的候選基因。把載脂蛋白基因轉入小鼠，可用來研究人脂蛋白代謝、調控以及動脈粥樣硬化。在研究載脂蛋白基因組織特異性表達的順式調控元件時，發現有兩簇載脂蛋白基因凋節的組織特異性表達（圖19-15）。一簇包括A－Ⅰ、C-Ⅲ和 A-Ⅳ基因，定位於人11號染色體長臂2區3帶（11q23），是按A－Ⅰ、C－Ⅲ、A－Ⅳ的順序組成。C－Ⅲ的轉錄方向與其他兩個基因相反。 A-Ⅰ和C-Ⅲ主要在肝和小腸中表達，A-Ⅳ主要在小腸表達。在 C-Ⅲ基因的-0.2～-1.4bp之間是調節 A－Ⅰ基因在小腸中表達的區域。這個區域也是 C－Ⅲ和A－Ⅳ基因在小腸表達的凋控元件，表明這一元件可以調節整個載脂蛋白基因簇在小腸的表達。另一基因簇定位於19號染色體長臂1區3帶（19q13），包含有E、C－Ⅰ和C-Ⅱ基因，它們按E、C－Ⅰ、C－Ⅱ順序排列。E基因主要在肝臟和大部分身體組織中表達，但表達水平低。以後發現在C－Ⅰ基因和C－Ⅱ基因之間有一調控區可使E基因在肝臟內高水平表達，該區長約154 bp。此外，還證實這個調控區也調節該座位其他兩個載脂蛋白基因 C－Ⅰ和 C－Ⅱ在肝臟的表達。的表達。

（2）與發育相關基因的表達與調控 用轉基因動物可研究基因在發育中的時空調控。珠蛋白基因是研究發育調控的最好例子。人類珠蛋白基因分為α、β兩簇，分別定位於16號和11號染色體，各長30kb和60kb。據1993年的報道，為分析完整的β-珠蛋白基因中人的珠蛋白基因的開關調控，Peterson等把一個含有248 kb長的人β-珠蛋白基因簇的酵母人工染色體（YAC）轉入小鼠。對轉基因小鼠中此基因簇的表達分析表明，在成年的轉基因動物中只有人β-珠蛋白表達；在子一代和子二代動物中證實YAC β座位有β樣珠蛋白基因的發育開關調控，即在卵黃囊中有ε-和γ-珠蛋白基因表達，在14天的肝臟中有少量γ和大量β表達，而在成年動物中則僅有β珠蛋白基因的mRNA表達。採用先在酵母細胞內通過同源重組的方式使YAC發生突變，然後把這種突變的YAC導入小鼠，就可以詳細研究整個座位上基因的調控機制，如珠蛋白基因在發育與分化中的基因表達、定點誘變的β基因對發育凋節的影響等等。

除前述有關基因表達凋控的研究外，把轉基因動物用於遺傳病動物模型的研製近年來發展也很快，如把pro-αⅠ膠原突變基因導入小鼠基因組，可產生類似人的骨發育不全症的轉基因小鼠，這對了解人類遺傳病的發病機理意義重大。

2．用於基因產品的制備

在轉基因動物中，導入的目的基因表達，人們就可以從該動物的乳汁和血液里獲得目的基因產物，因此，可把轉基因動物看作是一種個體表達系統（whole animal expression system），以制備某種基因產物。這樣的轉基因動物常被稱作動物生物反應器（animal bioreactor）。

1982年Palmiter把大鼠生長激素基因轉入小鼠，成功地獲得高效表達生長激素的小鼠，其體積明顯增加，證實了用轉基因動物生產外源基因產品的可行性。近年來的報道已證實在轉基因家畜（如豬）的乳腺中可高效合成自身不含有的異源蛋白，如乳清蛋白等。目前，英國正在研究通過羊β-乳球蛋白啟動子和乳清蛋白啟動子的控制，在轉基因羊體內表達人α1抗胰蛋白酶和凝血因子Ⅸ；在美國已有在轉基因小鼠、乳羊和乳牛乳汁中分別表達產生tPA和促性腺素的研究報道。我國利用轉基因動物為反應器生產基因製品的工作也在展開，最近有關單位已從轉基因羊乳汁中獲得促紅細胞生成素。

3．動物品種的培育與改良

把具有優良性狀的基因或抗病基因導入畜禽以培育新的品種，這是轉基因動物研究中的一個極重要的方面。如已培育出抗雞白細胞組織增生病毒的轉基因雞新品種。為增強魚類的抗凍性，已有抗凍蛋白基因在轉基因鮭魚中表達的報道。1985年我國學者朱作岩在國際上首次將小鼠MT／hGH融合基因注入金魚受精卵中，獲得轉基因金魚，其F1比轉基因魚的同代大兩倍。以後該類實驗中還陸續獲得其他鯽、鯉等幾種轉入生長激素基因的魚。

三、轉基因技術研究進展

（一）基因分離技術的發展 真核生物基因組非常大，巨遺傳背景常不清楚，要從這樣龐大的DNA中分離目的基因實非易事。但是由於生物化學、酶學、分子生物學等學科的迅速發展，為基因的分離提供了有效手段，如今已發展了一些新的分離目的基因的技術，如PCR、轉座子標簽法與基因組消減技術等。

1．轉座子標簽技術 基因發生轉座最重要的遺傳效應是引起插入突變，也就是使插入位置的基因失活並誘導產生突變型，或在插入位置上出現新基因。因此，可用轉座子作探針克隆出該突變基因，再用突變基因作探針，從野生型個體中分離並克隆出野生型基因。這種用轉座子來分離基因的技術稱為轉座子標簽技術（transposon tagging）（圖19－16）。這種技術的一個顯著特點是可以用來分離預先不清楚表達產物的基因。目前已可利用在分子水平上研究得較為清楚的轉座子系統如玉米的Ac／Ds、金魚草的Tam3等來分離異源植物的基因。

利用轉座子分離植物基因時，首先要構建含轉座子與質粒載體，因為已分離得到的轉座子與選擇標記需整合到適當的質粒基因組中才能用於目標植物的遺傳轉化。當前用於構建轉座子載體的質粒主要是根癌農桿菌的Ti質粒和pBR322等。其次是目標植物的遺傳轉化，現常用帶有載體系統的根癌農桿菌進行轉化。第三是轉座及拷貝數的檢測。最後是轉座子插入突變的檢測及分離。而對分離得到的突變體，還要證明其突變確系轉座子的插入所引起的。

近幾年，一些用傳統生化方法難以分離的基因已用轉座子標簽法分離出來，如金魚草中控制花瓣及雄蕊發育的基因，與花的發生、發育有關的基因，亞麻的抗銹基因等。美國、荷蘭等國也分別利用轉座子分離擬南芥菜種子中脂肪酸合成的基因和研究植物病原體的抗性。

2．基因組消減技術 基因組消減（genomic subtraction）技術是最近幾年在PCR基礎上發展起來的根據表型變異進行目的基因分離和鑒定的又一種方法，已被應用於動、植物中分離遺傳背景不十分清楚的基因，如在醫學研究中已將該技術用於分離和鑒定腫瘤缺失和重排基因、制備多態位點探針、分離遺傳性疾病基因和基因治療等領域。

運用消減雜交技術分離缺失序列的概念最早是由Buatz提出的，他利用T4噬菌體缺失突變株的DNA來分離相應缺失區域的mRNA並獲得成功。以後被許多實驗室引用並加以改進。1989年D．Stuars和L．Wieland分別將PCR技術引入消減雜交方法中，使基因組消減雜交技術得以推廣應用。這一技術的基本原理是先用γ射線等引起機體大片段DNA的缺失突變，然後用此突變體DNA與野生型DNA雜交，用以去除野生型中突變體的DNA。如此反復幾次，在反應體系中突變體DNA所缺失的那段親本DNA序列便被保留下來。採用生物素-親和素-磁珠系統或HAT結合生物素-親和素層析系統富集缺失這種序列並用PCR技術擴增。擴增的序列再用來與野生型基因文庫雜交，從而克隆到對應缺失性狀的基因（圖19-17）。

用基因組消減雜交技術目前已從擬南芥中成功地克隆到包含赤黴素GA1位點的基因。在醫學研究中也有通過基因組消減雜交技術克隆人染色體特異的基因探針的報道，如杜興式肌營養不良（chenne muscular dystrophy，DMD）和脈絡膜缺損（choroideremia）座位的探針。

（二）基因剔除技術 基因剔除（gene knock-out）技術又稱基因打靶技術（gene trageting），是20世紀80年代末發展起來的。這是利用同源重組的方法以建立基因定點滅活細胞系或獲得基因定點滅活動物。這一技術近年來應用於生物學的諸多研究領域，已獲得數百種基因定位缺陷小鼠。

基因剔除技術的原理首先是用基因重組方法在目的基因片段中插入一外源基因作為篩選標記基因並使目的基因失活（定點突變），再將此（滅活）基因轉入胚胎多能幹細胞（ES細胞）中，通過細胞內的基因同源重組使滅活基因取代染色體上原有的目的基因。經篩選和基因型鑒定後，把定點突變後的ES細胞注入宿主囊胚腔內，然後將胚胎植入假孕母體子宮，使其發育成目的基因缺陷（突變）的嵌合體，經子代自交後篩選出目的基因缺陷的純合子即基因剔除動物。

基因剔除的具體實驗步驟是：首先要進行同源重組載體的設計與構建，即選擇具有一定長度（5～7kb以上）與目的基因功能區域同源的序列，並插入選擇性標記基因（如新黴素抗性基因neo等），以便於篩選。在此同源序列的一端或兩端還可以連接上負篩選標志基因（如單純皰疹病毒胸苷激酶基因等）。用電轉染等方法將此同源重組載體轉染靶細胞。通過葯物抗性來篩選重組細胞克隆，並用PCR和Southern雜交等方法對重組細胞進行基因型鑒定，這時得到的就是單個等位基因被剔除的雜合子細胞。為建立等位基因雙剔除的細胞系，則還要將單個等位基因剔除的細胞大量傳代培養，然後在更高濃度的選擇性培養基中多次重復篩選，並對最終得到的陽性克隆進行基因型鑒定。

在應用上，通過探討目的基因突變在基因剔除動物個體發育中的時空效應以及分析體內單基因缺陷所產生的表型異常，可以研究基因功能和調控，建立疾病的動物模型和基因治療等。因此，在細胞水平進行基因剔除研究有非常重要的意義。如近幾年國外已報道建立了用於研究心血管疾病的載脂蛋白E（apoE）、低密度脂蛋白受體的基因剔除動物。

基因剔除細胞系的建立有可能直接發現特定基因剔除後的影響，闡明基因功能，制備基因缺失的細胞模型，用於發病機理或基因治療的研究。體細胞與ES細胞同源重組有所不同，後者一般只需將同源染色體等位基因之一滅活，就能在嵌合體後代中最終獲得純合的基因剔除動物。而在體細胞水平滅活特定基因就必須把一對等位基因都滅活，否則無法研究其功能。目前採用兩種方法都可成功地達到這一目的：一是用兩種帶有不同標記基因的同源重組載體分別對靶細胞進行兩次同源重組；另一是把單個等位基因滅活的細胞系傳代培養，提高標記基因產物抗葯物的濃度，利用標記基因表達的累加效應，篩選出細胞系中自然發生的雙等位基因被剔除的細胞克隆。

G. 遺傳毒性試驗的實驗方法

近十幾年,隨著遺傳毒理學相關領域特別是分子生物學的研究進展,遺傳毒性測試評價方法也在不斷改進。據報道,目前已建立的遺傳毒性短期檢測法已超過200種。根據其檢測的遺傳學終點可分為4種類型:1檢測基因突變;2檢測染色體畸變;3檢測染色體組畸變;4檢測DNA原始損傷。
1現行組合試驗方案由於一種遺傳毒性檢測方法通常只能反映一個或兩個遺傳學終點。沒有一種檢測方法能涵蓋所有的遺傳學終點,故需用一組試驗配套進行試驗。200多種檢測方法中,真正經過驗證有合適靈敏度和特異度的大概不到10種。目前多數國家規定,如體內誘變試驗顯示1個或以上試驗呈陽性結果,則需要進行生殖細胞遺傳毒性測試。
2各類遺傳毒性試驗方法的研究進展
2.1檢測基因突變
遺傳毒性試驗
2.1.1Ames試驗Ames試驗是檢測化學物質基因突變的常用方法。常規的Ames試驗選用四個測試菌株(TA97、TA98、TA100、TA102),最近有人提出增加TA1535測試菌株,該菌株特別適用於檢測混合物的致突變性。目前出現的新生菌株具有更高的敏感性和特異性,如YG7014、TG7108,缺乏編碼O6-甲基鳥嘌呤DNA甲基化轉移酶的ogtST基因,專用於對烷化劑引起的DNA損傷檢測;引入乙醯轉移酶基因的YG1024、YG1029菌株,對硝基芳烴和芳香胺的敏感性比原菌株高100倍以上[4]。測試代謝活化系統一般採用由Aro-clor1254(PCBs)誘導大鼠肝微粒體酶的S9;國外也有用人肝S9的報道,試驗證明其代謝活性明顯高於鼠S9[5,6]。為了克服S9制備上的困難和不穩定性,Josephy等將沙門氏菌的芳香胺N-乙醯轉移酶基因和人類細胞色素P-450基因Cyp1A2引入細胞,構建了在無外源S9時也可檢出芳香胺誘變性的Ames測試菌株如DJ4501A2[7]。
2.1.2TK基因突變試驗TK基因突變試驗是一種哺乳動物體細胞基因正向突變試驗,近年來其應用價值有明顯的提高。TK基因編碼胸苷激酶,該酶催化胸苷的磷酸化反應,生成胸苷單磷酸(TMP)。如果存在三氟苷(TFT)等嘧啶類似物,則產生異常的TMP,摻入DNA中導致細胞死亡。如受檢物能引起TK基因突變,胸苷激酶則不能合成,而在核苷類似物的存在下能夠存活。TK基因突變試驗可檢出包括點突變、大的缺失、重組、染色體異倍性和其他較大范圍基因組改變在內的多種遺傳改變。試驗採用的靶細胞系主要有小鼠淋巴瘤細胞L5178Y以及人類淋巴母細胞TK6和WTK1等。其基因型均為tk+/-。Honma(本間正充)和張立實(1999)指出原用染毒時間3～6h對於充分檢出斷裂劑和錘體來說這個時間太短,獲陰性結果時應延長至24h。據資料顯示對於同一陽性受檢物,WTK1細胞的突變頻率遠高於TK6細胞,認為與WTK1存在p53基因突變有關。Do-brovolsky(1999)建立了tk+/-轉基因小鼠,可用於體內試驗。
2.1.3轉基因小鼠基因突變試驗轉基因小鼠基因突變試驗可在整體狀態下檢測基因突變,比較不同組織(包括生殖腺)的突變率,確定靶器官,對誘發的遺傳改變作精確分析等[8]。1989年Gossen等報道了LacZ轉基因小鼠突變測試系統。近年來,國外已陸續發展了多種用於突變檢測的轉基因動物,其中3種已投入商品化生產,MutaTM小鼠、Big-BlueTM小鼠和Xenomouse小鼠,它們分別採用大腸桿菌乳糖操縱子的LacZ和/或Lacl作為誘變的靶基因。陳建泉等人(1997)已經以穿梭質粒pESnx載體,以xy1E基因因為誘變靶基因建立了攜帶xy1E的轉基因小鼠,並對轉基因小鼠進行了繁殖建系。並已實驗證明xy1E轉基因小鼠是一個研究體內基因突變的有效模型,它可望成為一種新的轉基因小鼠突變檢測系統[9]。Heddle等(2000)建立了1個種gptdelta轉基因小鼠。HiroyukiHayashi等(2003)將載有E.coligpt基因和λ噬菌體的red/gam基因λEG10DNA整合到SD大鼠每個單倍體基因組q24～q31位點。這種轉基因大鼠對乙基亞硝基脲(ENU)和苯並芘(B[a]P)的肝臟毒性顯示了很好的敏感性,它也有助於研究遺傳毒性物質對小鼠和大鼠的種間差異[10]。
2.1.4反向限制性酶切位點突變分析法(,iRSM)由英國威爾士大學分子遺傳和毒理中心建立並完善的[11]。iRSM適用於快速檢測誘變劑所致體內外DNA的突變,但這些突變的特點是使某一酶切位點變為另一酶切位點。該方法建立者Jenkins等首先將iRSM應用於化學誘變劑所致動物體內p53基因的突變檢測,取得了良好的結果:小鼠分別口服N-乙基N-亞硝基脲(ENU)、2-乙醯氨基芴(2-AAF)和二甲基醯肼(DMH)3天後,以iRSM方法相應地檢測小鼠脾、骨髓和肝組織p53基因第6內含子區域的Apa→Ava位點反向突變。結果表明ENU誘發肝組織p53基因突變的發生率為33%,2-AAF使肝組織突變的發生率為25%,這一陽性突變率反映出了不同誘變劑對相應組織的致突變強度,進一步驗證了該方法的高靈敏度和准確性。它具有靈敏度高、快速、操作簡便、以及突變檢測部位明確等優點,應當說是一種較具實用價值和生命力的突變檢測手段。但是,iRSM的不足之處是僅能檢測誘發限制性酶切位點反向的DNA突變。根據文獻資料分析,化合物致突的發生具有一定的規律性,即結構類似的一組化合物常常引起一些特定序列較固定的鹼基改變。例如,烷化劑和芳香胺類雖易使一連串鳥嘌呤(G)3′端G發生突變[12,13],這可能與該部位電荷密集有關,多數活性氧生成物質的DNA致突作用也具有類似規律[14];CpG二核苷常常是DNA加成物致突變作用部位[15],所以CpG突變的檢測在化合物致突檢測中具有重要意義,而CpG突變常引發某些固定酶切位點的變化。很顯然,iRSM可較廣泛地應用於遺傳毒性化合物致突作用的檢測。
2.2檢測染色體和染色體組畸變
2.2.1微核試驗傳統的體內微核試驗仍然是檢測化學物質染色體損傷的基本方法。目前微核試驗方法主要有以下改進:1體外微核試驗常用細胞有中國倉鼠肺細胞(CHL)、中國倉鼠卵巢細胞(CHO)及中國倉鼠成纖維細胞(V79)等,近年開始有用L5178Y小鼠淋巴瘤細胞和人的類成淋巴細胞TK6。也有用敘利亞倉鼠胚胎(SHE)細胞和BALB/c3T3細胞。體外試驗比體內試驗易於操作和控制。缺點是對直接作用的化合物有可能出現假陽性。2周圍血微核試驗優點是可重復采樣,自身對照,減少實驗動物數。李尊愛(1999)報道剛斷乳不久的小鼠(4～6周齡)用於外周血網織紅細胞微核試驗比年齡更大的敏感些[16]。3胞質分裂阻滯法微核試驗(CB-MNT)很好地排除了細胞分裂的影響。該法中,雙核細胞是只分裂了一次的細胞,其結果更加穩定敏感。CB-MNT可觀察到多種遺傳學終點。觀察不同分裂期的細胞比例,計算核分裂指數能檢測誘變物對細胞周期的影響。還可檢測切除修復,次黃嘌呤磷酸核糖轉移酶(HPRT)位點變異,凋亡。認為該試驗可使計數值提高,達到傳統方法的兩倍或以上。但也偶小於兩倍的結果(李來玉,1996)。最近Garriott和Phelps等推薦了關於體外雙核細胞微核試驗的幾個參數條件:細胞鬆弛素B不影響試驗結果;計數2000個雙核細胞;長時間暴露沒有必要;結果用趨勢檢驗分析;根據相應的細胞毒性選擇適當的濃度[17]。
2.2.2染色體畸變試驗染色體畸變試驗是檢測化學物質影響染色體數量和結構的基本方法。在化學物質安全性評價中常選體外CHL細胞染色體畸變、精原細胞染色體畸變試驗等檢測化學物質對染色體的影響。為了准確觀察誘發的畸變頻數,本試驗收獲細胞的時間應盡量提前至大多數細胞處於染毒後第1次有絲分裂時(Tucker,1996)。對於染色估數目改變,原則上只適合超倍體的觀察。因為塗片時可能人為地把染色體推出細胞外(Tucker,1997),Danford曾建議在制備標本時減弱低滲處理能力,以免漲破細胞膜,從而能准確觀察亞二倍體。經研究,認為以0.094mo1/LKC1弱低滲液處理2min～3min是達此目的的最佳條件(樓鐵柱,1997)。
2.2.3熒光原位雜交(FISH)技術熒光原位雜交最早由Bauman(1980)建立,後由Lucas(1989)首先應用於染色體畸變分析。其原理是按檢測目標准備恰當的DNA序列作為探針,並用生物素標記,對載玻片上待測標本中的DNA雜交,最後通過雜交位點的熒光觀察染色體結構或數目的改變。應用特殊染色體和染色體某區域的熒光探針可在體內檢測4種類型的細胞遺傳學終點[18]。1檢測中期細胞染色體畸變。2應用亞染色體區域的探針檢測間期染色體斷裂和非整倍體。3應用中心粒探針和/或抗著絲點抗體檢測微核的形成。Schriever-Schwemmet等利用CREST間接免疫熒光法,以及小鼠次要和主要衛星DNA探針,在小鼠骨髓細胞證明了受試物引起微核的來源[19]。4哺乳動物精子非整倍體檢測。徐德祥(1999)用雙色FISH方法對丙烯腈接觸男工精子性染色體數目畸變進行了檢測,證明FISH技術用於檢測精子染色體數目畸變實驗結果穩定可靠。
2.3檢測DNA原始損傷2.3.1單細胞凝膠電泳技術單細胞凝膠電泳分析(singlecellgeleletrophoresis,SCGE)是Ostling等(1984)首創的,以後經Singh等(1988)進一步完善而逐漸發展起來的一種快速檢測單細胞DNA損傷的實驗方法,因其細胞電泳形狀頗似慧星,又稱慧星試驗(cometassay)。Kizilian(1999)改進了一些試驗條件,能明顯將細胞調亡和細胞壞死的形象與「彗星」區分。MarkS.Rundell等(2003)報道彗星試驗測行的損傷主要是由致突變劑引起的[20]。RichardD.Bowden等(2003)研究出了一種新的分析試驗結果的彗星尾圖譜,可以更加准確的分析彗星的長度及密度[21]。SCGE是評價遺傳毒性損害非常敏感的實驗,可以檢測到每1.657×10-37kg中0.1個DNA的斷裂。與經典的染色體畸變、微核、SCE相比,SCGE可以用於活細胞DNA的檢測,也能用於死亡細胞DNA的分析,使SCGE不僅可以研究低劑量下的生物效應,也可用於研究高劑量下的生物效應;同時SCGE又可提供DNA修復能力的信息,這使得SCGE非常適用於評價受試物的遺傳毒性

H. 如何檢測禽類經濟性狀基因

提高肉蛋奶等畜禽經濟性狀可以從遺傳育種、營養飼料、疾病防治、畜舍環境和經營管理等幾個方面考慮。其中遺傳育種是從遺傳上改良畜種；疾病既有遺傳因素（如易感性）也有環境因素（如病原體）；營養飼料與畜舍、設備等雖然是環境因素，但也存在著遺傳與環境之間的相互作用。因此，經營者通過管理提高畜禽生產水平和經濟效益是一項系統工程，不但要使各個環節都能有效運轉，而且要使其達到最佳的協調與配合。
一、經濟性狀改進的遺傳學基礎

1.數量遺傳學基礎

數量遺傳學是遺傳學原理與統計學方法相結合研究群體數量性狀遺傳規律的一門遺傳學分支學科。半個世紀以來數量遺傳學對肉蛋奶等可度量的經濟性狀即數量性狀的提高起了極為重要的作用。與起始群體或未經改良的地方畜種相比，豬的瘦肉率提高了20—25％；肉雞到達2公斤時的上市日齡提前了40—50天；雞的產蛋數提高了100—120個；奶牛的泌乳期產奶量提高了3000—4000公斤。近50年來，肉蛋奶等主要經濟性狀的世代遺傳改進見表1。

肉蛋奶等經濟性狀的遺傳基礎是多基因，表現為連續變異，它的改進需要有生產性能的記錄和遺傳參數，把表型值轉化為育種值，從而提高了選種的准確性。

2.細胞遺傳學基礎

家畜家禽都是兩性繁殖的高等動物，性狀的遺傳都要通過生殖細胞也就是精子和卵子來實現。人工授精和精液冷凍技術擴大了優秀公畜的遺傳作用；超數排卵和卵細胞體外成熟技術擴大了優秀母畜的遺傳作用；胚胎移植或核移植技術則同時擴大了優秀公畜和母畜的作用，提供了大量遺傳上優秀的後代；胚胎切割則是使遺傳上優秀的個體通過「無性繁殖」進行復制或「克隆」。

細胞遺傳學中的染色體畸變和染色體倍性化在畜禽育種中還不多見。羅伯遜易位在牛和豬中都有報道，但都還沒有達到應用的程度；哺乳動物的多倍體和鳥類的孤雌生殖鮮有報道，但多屬偶見，很少有人進行深入研究；使馬和驢的精卵二倍化有可能產生能育的雙二倍體騾子，但這一在50年代的設想至今也未能成為現實。

3.分子遺傳基礎

目前對遺傳物質的認識已進入分子水平，即去氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）。自從1909年瑞典生物學家H.尼森.埃爾（Nilsson-Ehle）提出多基因假說（Polygene hypothe-sis）以來，數量性狀的多基因一直是作為一個遺傳整體用統計學方法加以研究和分析的，雖然對決定數量性狀的多基因數目可以用統計學的方法作出估計，但不能確定單個基因以及它所在的染色體上的位置。現代分子生物技術的發展，使得從分子水平上研究數量性狀基因（Quantitative Trait Locus， QTL）成為可能，這就要分離和克隆決定數量性狀的基因、研究其結構和功能，最終達到從分子水平上改良數量性狀的目的。

二、育種新技術

這里討論的新技術有三層含義：一是近年來研究出的對從遺傳上改良畜種有明顯效果的技術（如用DNA 多態檢測豬應激綜合症）；二是研究的方法和技術雖然不是最新的，但只是近年來才加以推廣和應用的（如BLUP育種值）；三是從單項技術來看不是什麼新技術，但重新組裝後起到了前所未有的效果的（如「超級豬」、「節糧小型蛋雞」）。本文只是通過一些例子加以說明，並沒有包括所有的育種新技術。

1.生物技術

（1）數量性狀主效基因的檢測與利用

在過去的20年中，陸續發現有些數量性狀不但受微效多基因控制，而且還受一個或少數幾個主效基因（Major gene）的影響。例如綿羊中的布羅拉（booroola）基因，該基因座純合子的母羊，產羔數比不帶該基因的母羊平均多產羔1.1-1.7頭；雜合子母羊也要多產0.9-1.2頭。目前已將該基因定位到綿羊的第六號染色體上。又如豬的氟烷敏感基因，該基因的隱性純合個體易產生應激綜合症，在飢餓、咬斗、運輸、驅趕等情況下容易發生突然死亡，而且肉的品質差。但帶有這種基因的豬在生長速度和瘦肉率方面比不帶該基因的豬有明顯優勢。由於氟烷測定方法對隱性純合子的外顯率並不完全，其范圍在50％—100％，而且外顯率的高低受豬的月齡和性別的影響。這就是說，氟烷測定方法不但無法區別基因型NN和Nn的個體，因為它們的表現都是氟烷不敏感型，而且對基因型nn的個體也有相當一部分沒有表現為敏感型。用PCR-RFLP方法可以清楚地得到三種不同基因型的 DNA圖譜，這給豬育種中檢出攜帶氟烷敏感基因個體（Nn，nn）帶來了極大方便。目前這一基因已被定位到豬的第六號染色體上的一個連鎖群內（Vogeli，1994）。

（2）數量性狀的標記輔助選擇

在數量遺傳學研究中，把要改進的某個數量性狀稱為目標性狀，因此對決定這一性狀的基因或基因組稱為目標基因。目前對決定數量性狀的多基因還不能准確定位，但如果能找到一個可以識別的基因或基因組的DNA多態，或是一個染色體片斷與這一目標性狀有密切的關聯，就可以作為對目標性狀選擇的遺傳標記。遺傳標記還可應用於基因轉移、基因定位和基因作圖等研究。

除上述分子和細胞水平的遺傳標記外，利用已知的主基因或單基因還可以從群體水平上對個體作出標記選擇，如肉牛的雙肌肉基因，綿羊的多羔基因，豬的應激敏感基因，雞的小型化基因、快慢羽基因等。

（3）雜種優勢預測

通過血型因子、血漿蛋白多態、DNA 多態和實驗動物模擬試驗，可以對畜禽的雜種優勢進行預測。例如能過DNA多態性可以識別種間、家系間、家系內個體間的遺傳差異。用Hinf I/ 3』-HVR-α珠蛋白探針可獲得豬、雞、鴨等畜種多態性含量極高的DNA指紋帶。這些多態性為分析系間親緣關系的遠近，雜交親本的選配提供了很好的借鑒。用DNA多態性測定品種或系間的差異，並據此作出的遺傳距離（genetic distance）要比根據其他指標穩定，因此用來預測雜種優勢也更為准確。

2.計算機技術

（1）育種值的BLUP計算方法

BLUP（Best Linear Unbiased Prediction，最佳線性無偏預測）方法最早由美國C.R.漢特遜（Henederson）於1973年在紀念勒什（Lush）的學術討論會上系統介紹，雖然他對線性模型的研究早在50年代初就已經完成。由於受當時計算工具的限制，這一方法在育種上的應用推遲了20年。

BLUP育種值估計方法之所以能夠提高選種的准確性是由於：（1）充分利用了所有親屬的信息；（2）能消除由於環境造成的偏差；（3）能校正由於選配所造成的偏差；（4）能考慮不同群體不同世代的遺傳差異；（5）當利用個體的多次記錄時，可將由於淘汰所造成的偏差降到最低。

近年來由於計算機的普及和生物技術在動物育種中的應用，使BLUP育種值估計方法又有所發展，如從公畜模型發展為動物模型；單性狀育種值估計發展為多性狀育種值估計；常規繁育體系的育種值估計發展為有胚胎移植、胚胎切割等非常規繁育體系的育種值估計。

（2）計算機圖像分析應用於畜禽育種

計算機圖像分析系統和圖文資料庫的建立，使育種數據、種質資源、形態特徵、生態環境等與家畜育種有關的「數」和「形」聯系起來，大到對群體行為，小到對染色體組型特徵都可通過圖像進行充分的觀察和度量，從而可以從宏觀和微觀兩方面提高育種效果。例如在對奶牛外形的線性評定中，15項體型性狀中已有14項可由計算機通過圖像進行識別，僅1項（乳用特徵）還需人機結合進行判斷。利用C語言編寫的計算機程序，從攝錄、數字化、校正、識別、評分及綜合等都由程序控制，基本實現了奶牛體型線性評定的自動化，有利於對產奶性狀的選擇與提高。又如通過計算機圖像可分析超聲波測定肉用家畜（牛、豬）的活體脂肪層和肌肉層的厚度以及眼肌面積，提高了對肉用動物選種的准確性。

（3）地理信息系統（GIS）應用於畜禽遺傳資源的保護和利用

保存畜禽品種的遺傳多樣性對今後肉蛋奶等數量性狀的增產有重要意義。畜禽遺傳資源的保護也是一項系統工程，它是生命科學中的「保護生物學」和地球科學中「地理信息系統」兩個學科的結合。建立畜禽品種資源地理信息系統，可以對現有的遺傳資源有一個整體的、動態的認識，該系統能監視各個畜禽品種在相當長時間內的數量與地理分布、特性特徵等信息的變化，以及建立數量瀕危畜禽的報警系統。最近中國農業大學已完成了按畜禽品種名稱或按省、市、自治區檢索牛、羊、豬、禽等國內主要品種的外形（相片）、數量、分布、生產性能等計算機軟體系統。

3.系統工程技術

系統工程主要研究的是「系統」。系統是有組織的或是組織化了的總體，是由組成這個總體的各個部分（元素）和部分間的有機聯系構成的。下面介紹的雖然是一些成熟技術的重新組裝，但從系統論的思想出發，各類成熟技術間的有機聯系產生了前所未有的新的效益。

（1）優化育種方案

以最大經濟效益為目標的優化育種方案的制定，是現代畜禽育種的重要組成部分。例如在豬的優化育種方案中，結合生物學和經濟學目標考慮，生長、胴體品質、繁殖力、飼料轉化效率等應作為主要改進的目標性狀。通過對性狀邊際效益的計算和各目標性狀經濟重要性的分析，可制定出遺傳改進快、經濟效益高的優化育種方案。對育種核心群的規模、群體結構、種畜利用年限、選種方法、飼養工藝、投入產出分析等在一個優化育種方案中也應予以考慮。

在肉雞優化育種方案的研究中，本文作者曾提出縮短世代間隔的選擇方法，父本品系和母本品系都達到每年13個世代。該育種方案與國內外現行的方案相比，還有以下優點：

1.對母系體重的選擇要有上下限。這一措施直接選擇了增重的均勻度，間接選擇了產蛋性能；

2.對母系產蛋的選擇。廢除現行的自閉產蛋箱記錄制度，改為按公雞家系記錄產蛋性能，再根據育種目標確定是否淘汰整個家系；

3.對產蛋性能用「先留後選」的方法代替現行的「先選後留」方法，提高了選種的准確性。

4.初選時間。改6周齡選種為5周齡選種，降低了選種後由於限制飼喂引起的應激作用。

5.以入孵蛋的健雛率選擇父系，全面提高了受精率、孵化率和雛雞生活力。

（2）MOET育種計劃

MOET（Multiple Ovulation and Embryo Transfer）育種計劃是超數排卵和胚胎移植技術與核心群育種技術相結合的一項系統工程，主要應用於奶牛、肉牛等單胎動物。這一育種計劃的實施不但可以提高母牛的繁殖力和增加優秀個體的數量，而且通過同胞測定可以縮短世代間隔。MOET育種計劃的成功與否很大程度上決定於是否能有一個高產母牛組成的核心群作為胚胎移植的供體，使優良的遺傳種質能迅速擴大。我國在「八五」國家科技攻關項目中已立項開展奶牛MOET育種研究。

（3）「理想豬」和「超級豬」計劃

從商品豬生產的要求來看，作為雜交親本的父系和母系應具有不同的特點。對理想父系豬的要求是：配種能力強，四肢健壯，精液品質良好；生長速度和瘦肉率高，大量瘦肉分布在經濟價值高的部位；顯性白色純合子；可允許為氟烷敏感基因的雜合子（Nn）。對理想母系豬的要求是：繁殖力高，母性強；食慾良好，適度的生長速度和瘦肉率；不攜帶氟烷敏感基因即要求基因型為NN。

英國J.魏柏（Webb）曾提出一個應用胚胎工程生產「超級稻」的計劃。這個計劃的目標是：1.每年每頭母豬提供32頭商品豬；2.100天達到100公斤活重；3.胴體瘦肉率65％。在完成上述三項指標後，每頭母豬年產瘦肉量為1400公斤。他建議的具體做法見圖1。

（4）節糧小型蛋雞的選育

節糧小型蛋雞的選育是一項育種、營養、籠具、雞舍環境、飼養工藝等改革和配套的系統工程。它的育成是利用了雞性染色體上的一個矮性化基因（dw），這是一個生長激素受體基因的缺陷型，造成長骨變短、生長受阻，但產蛋等繁殖性狀基本正常。目前對這一基因較為廣泛應用的是在肉雞中，父母代母本為矮小型，可節省飼料和提高飼養密度。矮小型母雞與普通型雜交的後代，公母都是普通型，可用於正常的商品肉雞生產的。法國伊沙公司的「明星雞」就是採用這一制種方法生產的。中國農業大學動物科技學院自1990年起就開始把「明星雞」中的dw基因引入「農大褐」中型褐殼蛋雞，選育出有90％以上蛋雞血統的節糧小型蛋雞。用這種小型雞作為父系與普通型褐殼雞雜交，後代商品母雞為矮小型褐殼蛋雞；如與普通型白殼蛋雞雜交，後代商品雞為矮小型淺褐殼蛋雞。這兩種商品雞比普通型蛋雞的體重小20—25％，可提高飼養密度25—30％。雖然總蛋重要少1.0—1.2公斤，但可節省飼料8—10公斤。所以總的經濟效益比普通蛋雞高得多。特別是節糧（料蛋比可達2.0—2.2：1）這一點，更加適合我國市場。如我國15億只蛋雞中有1/3改養小型蛋雞，則可節省飼料40—50億公斤。