日本血吸蟲病原學診斷常用方法

⑴ 關於血吸蟲有關問題

血吸蟲病的診斷包括病原診斷和免疫診斷兩大部分，具體方法詳見附錄。
1．病原診斷 從糞便內檢查蟲卵或孵化毛蚴以及直腸粘膜活體組織檢查蟲卵。
⑴直接塗片法：重感染地區病人糞便或急性血吸蟲病人的粘液血便中常可檢查到血吸蟲蟲卵，方法簡便，使蟲卵檢出率低。
⑵毛蚴孵化法：詳見附錄。可以提高陽性檢出率。在現場進行大規模糞便檢查時，為了提高功效，產生了許多改良方法，如尼龍袋集卵法，可縮短集卵時間，降低損耗，便於流動性普查；為了便於觀察毛蚴，可採用塑料杯頂管孵化法，毛蚴集中，便於觀察，檢出率較高。為了提高糞便檢查效果，常常需要連續送檢糞便3次。
⑶定量透明法：用作血吸蟲蟲卵計數。常用的計算方法為kato厚片法。可測定人群感染情況，並可考核防治效果。
⑷直腸粘膜活體組織檢查：慢性及晚期血吸蟲病人腸壁組織增厚，蟲卵排出受阻，故糞便中不易查獲蟲卵，可應用直腸鏡檢查。血吸蟲病人腸粘膜內沉積的蟲卵，其中有活卵、變性卵和死卵。對未治療病人檢出的蟲卵，不論死活均有參考價值；對有治療史病人，如有活卵或近期變性卵，表明受檢者體內有成蟲寄生。若為遠期變性卵或死卵，則提示受檢者曾經有過血吸蟲感染。目前流行區血吸蟲病人大多已經過一次或多次治療，檢查到活卵的病例很少，並且此方法有一定的危險性，故不適於大規模應用。
2．免疫診斷
⑴皮內試驗（intradermal test，idt）：一般皮內試驗與糞檢蟲卵陽性的符合率為90％左右，但可出現假陽性或假陰性反應，與其他吸蟲病可產生較高的交叉反應；並且病人治癒後多年仍可為陽性反應。此法簡便、快速、通常用於現場篩選可疑病例。
⑵檢測抗體：血吸病人血清中存在特異性抗體，包括igm、igg、ige等，如受檢者未經病原治療，而特異性抗體呈陽性反應，對於確定診斷意義較大；如已經病原治療，特異性抗體陽性，並不能確定受檢者體內仍有成蟲寄生，因治癒後，特異性抗體在體內仍可維持較長時間。目前檢測抗體的血吸蟲病血清學診斷方法很多，常用的有以下幾種（詳見附錄）。
1）環卵沉澱試驗（circunoval precipitin test，copt）：通常檢查100個蟲卵，陽性反應蟲卵數（環沉率）等於或 大於5％時，即為陽性。糞檢血吸蟲卵陽性者，copt陽性率平均為97.3％（94.1%～100%）。健康人假陽性率為3.1％，與肺吸蟲病、華支睾吸蟲病可出現交叉反應。患者有效治療後copt陰轉較慢。若血吸蟲病人距末次治療時間已3～5年，而copt環沉率為3％或3％以上者，可結合臨床表現考慮給予重復治療。目前在基本消滅血吸蟲病地區，已廣泛應用copt作為綜合查病方法之一。為了操作規范化、標准化，並適合於現場應用，對copt方法作了許多改良，如塑料管法，雙面膠紙法等。
2）間接紅細胞凝集試驗（indirect haemagglutination test，iha）：糞檢血吸蟲蟲卵陽性者與iha陽性符合率為92.3%～100%，正常人假陽性率在2％左右，與肺吸蟲、華支睾吸蟲、旋毛蟲感染者可出現假陽性反應。iha操作簡便，用血量少，判讀結果快，目前國內已廣泛應用。
3）酶聯免疫吸附試驗（enzyme-linked immunosorbent assay，elisa）：此試驗具有較高的敏感性和特異性，並且可反應抗體水平，陽性檢出率在95％～100％，假陽性率為2.6％，病人在吡喹酮治療後半年至一年有50％至70％轉為陰性。此試驗已應用於我國一些血吸蟲病流行區的查病工作。近年來，在載體、底物及抗原的純化方面都作了改良，如快速－elisa，硫酸銨沉澱抗原－elisa等。
4）免疫酶染色試驗（immunoenzymic staining test，iest）：見附錄。
在檢測血吸蟲特異抗體的方法中，尚有許多種，如間接熒光抗體試驗（ifat）、膠乳凝集試驗（la）、酶標記抗原對流免疫電泳（elacie）等，這些方法有它們各自的優點。
值得提出，近年來隨著科技的發展，某些高科技和新方法被逐步引用到血吸蟲病的診斷和研究領域。例如免疫印漬技術(immunoblotting）又稱（western blot），是在蛋白質凝膠電泳和固相免疫測定的基礎上建立的一種具有分子水平的免疫學新技術，有力推動了血吸蟲病血清學診斷方法的進展，它不但能對血吸蟲抗原的限定組分蛋白進行分析和鑒定，而且能用以診斷病人和區分血吸蟲病不同病期的新型血清學診斷方法。又如雜交瘤技術制備單克隆抗體（mcab）的應用。採用特異的mcab純化血吸蟲抗原，用於血吸蟲病血清學診斷；也可應用mcab檢測循環抗原，為血吸蟲病診斷提供新的途徑。
⑶檢測循環抗原：由於治療後抗體在宿主體內存留較長時間，其陽性結果往往不能區分現症感染和既往感染，也不易於評價療效。循環抗原是生活蟲體排放至宿體內的大分子微粒，主要是蟲體排泄、分泌或表皮脫落物中具有抗原特性，又可為血清免疫學試驗所檢出。從理論上講，cag的檢測有其自身的優越性，它不僅能反映活動性感染，而且可以評價療效和估計蟲荷。
在感染血吸蟲宿主體內cag的種類較多，目前可檢出比較重要的3類游離循環抗原，即腸相關抗原（gaa）、膜相關抗原（maa）和可溶性蟲卵抗原（sea）。在檢測方法上，採用檢測不同靶cag的探針，包括抗血吸蟲抗原不同表位——單克隆抗體、組合單克隆抗體以及多克隆抗體等。在檢測的具體方法有：斑點elisa（dot-elisa），雙抗體夾心elisa等。近年來，國內、外學者對cag進行了多方面的研究、進展很快，並已取得了不少可供參考的結果。但是，要過渡到臨床實用階段仍有許多問題和影響因素急待探討與解決，如目前檢測的方法有待改進和規范化；免疫復合物的形成和抗獨特型抗體存在對檢測結果的影響；循環抗原在感染宿主體內消長規律及治療後的轉歸等。
⑷綜合查病：上述各種檢查方法各有優缺點，如果將幾種方法合理搭配，由簡到繁，綜合查病，則可收到事半功倍的效果。一般在重流行區，糞檢尚能查出一定比例病人的地方，仍以糞檢為主，輔以其他方法檢查；而在基本消滅血吸蟲病地區，則應以免疫診斷為主，取得多項數據，綜合判斷。 致病

血吸蟲發育的不同階段，尾蚴、童蟲、成蟲和蟲卵均可對宿主引起不同的損害和復雜的免疫病理反應。由於各期致病因子的不同，宿主受累的組織、器官和機體反應性也有所不同，引起的病變和臨床表現亦具有相應的特點和階段性。根據病因的免疫病理學性質，有人主張將血吸蟲病歸入免疫性疾病范疇內。
1．尾蚴及童蟲所致損害 尾蚴穿過皮膚可引起皮炎，局部出現丘疹和瘙癢，是一種速發型和遲發型變態反應。病理變化為毛細血管擴張充血，伴有出血、水腫，周圍有中性粒細胞和單核細胞浸潤。實驗證明，感染小鼠的血清和淋巴細胞被動轉移到正常小鼠，再用尾蚴接種（初次接觸尾蚴），也可產生尾蚴性皮炎。說明這種免疫應答在早期是抗體介導的。
童蟲在宿主體內移行時，所經過的器官（特別是肺）出現血管炎，毛細血管栓塞、破裂，產生局部細胞浸潤和點狀出血。當大量童蟲在人體移行時，患者可出現發熱、咳嗽、痰中帶血、嗜酸性粒細胞增多，這可能是局部炎症及蟲體代謝產物引起的變態反應。
2．成蟲所致損害 成蟲一般無明顯致病作用，少數可引起輕微的機械性損害，如靜脈內膜炎等。可是，它的代謝產物、蟲體分泌物、排泄物、蟲體外皮層更新脫落的表質膜等，在機體內可形成免疫復合物，對宿主產生損害。
3．蟲卵所致的損害 血吸蟲病的病變主要由蟲卵引起。蟲卵主要是沉著在宿主的肝及結腸腸壁等組織，所引起的肉芽腫和纖維化是血吸蟲病的主要病變。
肉芽腫形成和發展的病理過程與蟲卵的發育有密切關系。蟲卵尚未成熟時，其周圍的宿主組織無反應或輕微的反應。當蟲卵內毛蚴成熟後，其分泌的酶、蛋白質及糖等物質稱可溶性蟲卵抗原（soluble egg antigen，sea），可誘發肉芽腫反應。sea透過卵殼微孔緩慢釋放，致敏t細胞，當再次遇到相同抗原後，刺激致敏的t細胞產生各種淋巴因子。研究結果表明：巨噬細胞吞噬sea，然後將處理過的抗原呈遞給輔助性t細胞（th），同時分泌白細胞介素1（il－1），激活th，使產生各種淋巴因子，其中白細胞介素2（il－2）促進t細胞各亞群的增生； γ－干擾素增進巨噬細胞的吞噬功能。除上述釋放的淋巴因子外，還有嗜酸性粒細胞刺激素（esp）、成纖維細胞刺激因子（fsf）、巨噬細胞移動抑制因子（mif）等吸引巨噬細胞、嗜酸性粒細胞及成纖維細胞等匯集到蟲卵周圍，形成肉芽腫，又稱蟲卵結節。
日本血吸蟲產出蟲卵常成簇沉積於組織內，所以蟲卵肉芽腫的體積大，其細胞成分中，嗜酸性粒細胞數量多，並有漿細胞。肉芽腫常出現中心壞死，稱嗜酸性膿腫。在蟲卵周圍常常可見到抗原抗體復合物反應，稱何博禮現象（hoeppli phenomen )。用蘇木素伊紅染色的肝切片標本中，在蟲卵周圍有紅色放射狀物質。日本血吸蟲蟲卵肉芽腫的形成機制在動物研究的結果表明，是t細胞介導的ⅳ型變態反應。
隨著病程發展，卵內毛蚴死亡，其毒素作用逐漸消失，壞死物質被吸收，蟲卵破裂或鈣化，其周圍繞以類上皮細胞、淋巴細胞、異物巨細胞，最後類上皮細胞變為成纖維細胞，並產生膠原纖維，肉芽腫逐漸發生纖維化，形成疤痕組織。
蟲卵肉芽腫的形成是宿主對致病因子的一種免疫應答。一方面通過肉芽腫反應將蟲卵破壞清除，並能隔離和清除蟲卵釋放的抗原，減少血液循環中抗原抗體復合物的形成和對機體的損害；另一方面，肉芽腫反應破壞了宿主正常組織，不斷生成的蟲卵肉芽腫形成相互連接的疤痕，導致干線型肝硬變及腸壁纖維化等一系列病變。
血吸蟲蟲卵肉芽腫在組織血管內形成，堵塞血管，破壞血管結構，導致組織纖維化，這類病變主要見於蟲卵沉積較多的器官，如肝和結腸。在肝內，蟲卵肉芽腫位於門脈分支終端，竇前靜脈，故肝的結構和功能一般不受影響。在重度感染患者，門脈周圍出現廣泛的纖維化，肝切面上，圍繞在門靜脈周圍長而白色的纖維束從不同角度插入肝內，稱干線型纖維化（pipestem fibrosis），是晚期血吸蟲病特徵性病變。由於竇前靜脈的廣泛阻塞，導致門靜脈高壓，出現肝、脾腫大，側支循環，腹壁、食管及胃底靜脈曲張，以及上消化道出血與腹水等症狀，稱為肝脾性血吸蟲病（hepatosplenic schistosomiasis）。所以日本血吸蟲病晚期產生因門脈血流障礙所致的連鎖性病理生理變化。
4．循環抗原及免疫復合物 血吸蟲寄生在宿主靜脈內，童蟲、成蟲和蟲卵的代謝產物、分泌物和排泄物，以及蟲體表皮更新的脫落物排入到血液中，並隨血液循環至各組織，成為循環抗原。在血吸蟲感染宿主血內可檢出主要的循環抗原有：腸相關抗原（associated antigens，gaa）、表膜相關抗原（membrane associated antigens，maa）和可溶性蟲卵抗原（soluble egg antigens，sea）。迄今，研究得最多的是腸相關抗原。血吸蟲gaa的兩個主要成分，即循環陽極抗原（circulating anodie antigens，caa），為腸相關血吸蟲蛋白多糖抗原和循環陰極抗原（circulating anodie antigens，caa ），為不均一的糖蛋白抗原。應用間接熒光抗體技術證明，caa和cca均來源於成蟲腸道襯細胞，隨蟲體吐出物排到宿主血流中。宿主對這些循環抗原產生相應的抗體，抗原抗體結合，形成免疫復合物。通常免疫復合物可被單核細胞或巨噬細胞吞噬、清除。當免疫復合物形成過多，或不能被有效清除時，則可在組織（血管、關節等）內沉積，引起損傷組織的炎症反應。即 ⅲ型變態反應。
免疫復合物沉積血管內可激活補體，補體中的c3a和c5a具有促使肥大細胞和嗜鹼性粒細胞釋放組織胺等血管活性物質的作用，以致血管通誘性增加。另外，c5a的化學趨向性作用，可吸引中性粒細胞集聚於復合物沉積的血管，中性粒細胞吞噬復合物，並釋放蛋白溶解酶，損傷包括血管在內的局部組織。血吸蟲病人合並腎損害時，常出現蛋白尿，水腫及腎功能減退。實驗研究認為血吸蟲病的腎小球病變與免疫復合物的沉積有關。
5．臨床表現 根據患者的感染度、免疫狀態、營養狀況、治療是否及時等因素不同而異。日本血吸蟲病可分為急性、慢性和晚期三期。當尾蚴侵入皮膚後，部分患者局部出現丘疹或蕁麻疹，稱尾蚴性皮炎。當雌蟲開始大量產卵時，少數患者出現以發熱為主的急性變態反應性症狀，常在接觸疫水後1～2月出現，除發熱外，伴有腹痛、腹瀉、肝脾腫大及嗜酸性粒細胞增多，糞便檢查血吸蟲卵或毛蚴孵化結果陽性，稱急性血吸蟲病。然後病情逐步轉向慢性期，在流行區，90％的血吸蟲病人為慢性血吸蟲病，此時，多數患者無明顯症狀和不適，也可能不定期處於亞臨床狀態，表現腹瀉、糞中帶有粘液及膿血、肝脾腫大、貧血和消瘦等。一般在感染後5年左右，部分重感染患者開始發生晚期病變。根據主要臨床表現，晚期血吸蟲病可分為巨脾、腹水及侏儒三型。一個病人可兼有兩種或兩種以上表現。在臨床上常見是以肝脾腫大、腹水、門脈高壓，以及因側支循環形成所致的食管下端及胃底靜脈曲張為主的綜合征。晚期病人可並發上消化道出血，肝性昏迷等嚴重症狀而致死。兒童和青少年如感染嚴重，使垂體前葉功能減退，及其他因素可影響生長發育和生殖而致侏儒症。因肝纖維化病變在晚期常是不可逆的，並且對治療反應甚差，從而導致臨床上難治的晚期血吸蟲病。
6．異位寄生與異位損害 日本血吸蟲成蟲在門脈系統以外的靜脈內寄生稱異位寄生，而見於門脈系統以外的器官或組織的血吸蟲蟲卵肉芽腫則稱異位損害（ectopic lesion）或異位血吸蟲病。人體常見的異位損害在腦和肺。血吸蟲卵進入腦和脊髓產生異位損害，可致嚴重的神經系統並發症；經側支循環進入肺的蟲卵可引起肺動脈炎，甚至肺源性心臟病；罕見的異位損害可見於皮膚、甲狀腺、心包、腎等處。
異位寄生與損害多發生在大量尾蚴感染的急性期，而慢性期及晚期患者也可出現。經動物試驗結果初步分析，急性血吸蟲病患者合並腦或肺的異位損害可能由於感染大量尾蚴，蟲數過多，發生異位寄生和損害。晚期因肝纖維化，發生側支循環，門腔系統吻合支擴大，腸系膜靜脈的蟲卵可被血流帶到肺、腦或其他組織引起病變。

⑵ 血吸蟲病的診斷

血吸蟲病的診斷包括病原診斷和免疫診斷兩大部分。病人的確診需要從糞便中檢獲蟲卵或孵化毛蚴。
1.病原學診斷
從糞便內檢查血吸蟲蟲卵和毛蚴以及直腸黏膜活體組織檢查蟲卵稱病原學檢查，是確診血吸蟲病的依據。常用的病原學檢查方法有改良加藤法、尼龍袋集卵孵化法、塑料杯頂管孵化法等。
2.免疫學診斷
免疫學診斷包括檢測患者血清中循環抗體、循環抗原和循環免疫復合物。常採用的診斷方法有間接紅細胞凝集試驗（IHA）、酶聯免疫吸附試驗（ELISA）、膠體染料試紙條法（DDIA）、斑點金免疫滲濾試驗（DIGFA）。

⑶ 日本血吸蟲病原學診斷為何採用糞便沉澱孵化法

血吸蟲卵的孵化需要一定的溫度，需要水，而且 越是清水越容易孵化，所以在蟲卵具有向清性，向光性，毛蚴也是，把大便收集以後，加上水，稀釋之後，蟲卵會自然與水分離，也增加了單位體積內蟲卵數量，增加檢出率

⑷ 日本血吸蟲病的檢查方式是怎麼樣的

檢查包括以下項目： 1.病原檢查 病原檢查對本病的診斷具有重大意義，主要的檢查方法有以下幾種： (1)直接塗片法 病人糞便或急性血吸蟲病人的粘液血便中常可檢出血吸蟲蟲卵，方法簡便，但蟲卵檢出率低。 (2)沉澱法 水沉澱法或靜置沉澱法可用於急慢性期患者，檢出率較高。 (3)毛蚴孵化法 利用沉澱法收集到的沉澱蟲卵，在無氯的溫水(25~30℃)中培養，蟲卵可在數小時孵化出毛蚴。適用於早期血吸蟲病患者的糞便檢查。 (4)定量透明法 用作血吸蟲蟲卵計數。通常用於療效考核和測定人群感染度。 (5)直腸粘膜活體組織檢查 用直腸鏡或乙狀結腸鏡從直腸或乙狀結腸病變部位鉗取一小塊腸黏膜作壓片檢查。 2.免疫檢查 (1)皮內試驗 陽性率約為90%，但可出現假陽性或假陰性反應，與其他吸蟲病可產生較高的交叉反應，且無療效考核價值。多用於現場確定病例。 (2)環卵沉澱實驗(COPT) 本法在國內被廣泛應用，是診斷血吸蟲病血清學診斷的有效方法之一。 (3)間接熒光抗體試驗(IFAT) 一種抗原抗體結合物反應與形態學相結合的化學方法。本法操作簡單，特異性、敏感性均較高。 (4)間接紅細胞凝集試驗(IHA)用血吸蟲卵抗原致敏綿羊紅細胞，凍干保存，用時加蒸餾水稀釋成2%的紅細胞懸液，與受檢血清進行微量血凝試驗，l：lO血清為陽性反應，即有有診斷意義。此方法簡易，敏感性高，觀察結果快速。 其他的免疫方法還有酶聯免疫吸附試驗、免疫酶染色試驗(IEST)、斑點酶聯免疫吸附試驗、循環免疫復合物檢測等。 3.血象檢查 白細胞總數、嗜酸性粒細胞增加明顯。慢性期嗜酸性粒細胞仍有輕度增多。但極重型急性血吸蟲病患者血中嗜酸性粒細胞常不增多，甚至消失，而中性粒細胞出現增多。晚期則因脾功能亢進，白細胞與血小板減少，並有不同程度的貧血。 4. 肝功能試驗 血清球蛋白顯著增高，血清丙氨酸轉酶(ALT)也輕度增高。慢性血吸蟲尤其無症狀患者肝功能試驗大多正常。晚期患者由於肝纖維化或肝硬化，血清蛋白明顯降低，出現血清蛋白與球蛋白比例倒置現象。 5.輔助檢查 (1).CT掃描 晚期血吸蟲病患者經CT掃描可顯示肝包膜與肝內門靜脈區有鈣化現象;肝包膜增厚鈣化，與肝內鈣化中隔相垂直;在兩者交界處並有切跡形成。重度肝纖維化可表現為龜背樣圖像。 (2).B型超聲波檢查 經B超檢查可見肝脾腫大。 查看原帖>>

⑸ 血吸蟲病的病原學檢查方法有哪些

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(
1
）糞檢：從糞便中檢出血吸蟲蟲卵或孵出毛蜘是確定診斷和考核療效的最可靠的指標。糞檢蟲卵方法簡便易行，但在輕度感染者、晚期患者和經治療未愈者糞便中蟲卵數很少，檢出率不高，故糞檢蟲卵陰性不能排除血吸蟲感染。糞檢蟲卵（毛勤）有定性檢查法和定量檢查法。①
定性檢查：A
．直接塗片鏡檢法：檢出率低，只在感染嚴重的早期患者可檢出蟲卵；B
．集卵鏡檢法：有自然沉澱法、汞醛碘沉澱法和尼龍袋集卵法等。自然沉澱法：較直接塗片鏡檢法檢出率稍高。尼龍袋集卵法：將糞便勻漿濾去粗渣後，置雙層尼龍袋（內層120
目，外層2
印目）內淘洗或在水龍頭下沖洗，然後收集2
印目尼龍袋內的糞渣鏡檢。本法較沉澱法簡便易行，檢出率高，便於流動性普查；C
．孵化法：是根據血吸蟲卵內的毛蜘在適宜條件下能很快孵出，並游動於水表面下的特性。方法是取受檢糞便約309
，先經沉澱法濃集處理，將處理後的沉渣倒人500
血的三角燒瓶中，加清水至瓶口處，置於20
一30
℃
下進行孵化，在4
、12
、24
小時時，用肉眼或放大鏡各觀察一次結果。如見水面下有白色點狀物作直線來往游動，即為毛坳陽性。採用塑料杯頂管改良法，可使蟲卵散失少，毛坳集中便於觀察，檢出率較三角燒瓶法為高。為提高糞檢蟲卵的陽性率，最好選用集卵鏡檢和糞渣孵化兩種方法同時進行檢查；送檢糞量及送檢次數與檢出率密切相關，送檢的次數越多、糞量越大，檢出率越高。在血吸蟲病流行地區，提倡「一送三檢」（留一次全量糞便，分三次檢查）或「三送三檢」（每次檢309
糞便，送檢三次），均可明顯提高蟲卵檢出率。②
定量檢查：患者每日從糞便中排出的蟲卵數與其體內寄生的雌蟲數相關，故蟲卵的定量在一般情況下可反映出宿主的感染度。糞便中的蟲卵定量可採用加藤（Kato
一kats
）集卵透明法，以50mg
糞便中的蟲卵數為計算單位；少於100
為輕度感染，100
一中閱為中度感染，多於叨O
為重度感染。(
2
）直腸粘膜活組織檢查：用乙狀結腸鏡或直腸鏡觀察直腸粘膜的病變；急性期以腸粘膜充血、水腫為主，慢性期時腸粘膜蒼白、肥厚及癱痕形成。各期均可見典型的小斑點或小結節。將夾取疑有蟲卵結節的米粒大小粘膜組織，壓於兩載玻片之間鏡檢。本法檢出血吸蟲卵的陽性率很高。對未經治療的病人，檢出的蟲卵不論死、活卵均有確定診斷價值；對經特效葯物治療過的病人，則只有檢出活卵或近期變性卵才有診斷、治療意義。活檢時要細心操作，以防發生腸大出血或腸穿孔，尤其對晚期血吸蟲病患者更應小心操作。
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