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常用酵母RNA提取方法

發布時間:2022-12-15 01:57:12

『壹』 RNA提取方法

1.提取
稱取鮮酵母 159或乾酵母粉 2.5g,倒入 100ml三角瓶中,加 NaCl 2.5g,水25ml,攪拌均勻,置於沸水浴中提取lh。
2.分離
將上述提取液用自來水冷卻後,裝入大離心管內,以4000r/min離心10min,使提取液與菌體殘渣等分離。
3.沉澱RNA
將離心得到的上清液傾於50ml燒杯內,並置入放有冰塊的250ml燒杯中冷卻.待冷至10℃以下時,用6mol/L HCI 小心地調節pH值至2.0~2.5(注意嚴格控制pH)。調好後繼續於冰水中靜置10min,使沉澱充分,顆粒變大。
4.洗滌和抽濾
上述懸浮液以 4000r/min離心 10min,得到 RNA沉澱。將沉澱物放在 10ml小燒杯內,用95%的乙醇 5~10ml充分攪拌洗滌,然後在布氏漏鬥上用射水泵抽氣過濾,再用 95%乙醇5~10ml淋洗 3次。
5.乾燥
從布氏漏鬥上取下沉澱物,放在6cm表面皿上,鋪成薄層,置於80℃烘箱內乾燥。將乾燥後的RNA製品稱重,存放於乾燥器內。

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