細胞活性測定的常用方法

❶ 細胞活性和細胞毒性檢測的實驗方法

細胞數量確定

1.將細胞懸浮液（100μL/孔）接種在96洞孔板中。將板在潮濕的培養箱中預孵育（例如，在37℃，5％CO2下）。

2.向板的每個孔中加入10μLCCK8溶液。注意不要在孔洞中引入氣泡，因為它們會干擾O.D.讀數。

3.將培養板在培養箱中孵育1-4小時。

4.使用酶標儀測量450 nm處的吸光度。

細胞增殖和細胞毒性測定

1.將種子細胞以103-104個細胞/孔的密度在96孔板中在100μL培養基中培養。將細胞在CO2培養箱中於37℃培養24小時。

2.將不同濃度的待測物質加入板中。

3.將培養板在培養箱中孵育適當的時間（例如，6,12,24或48小時）。

4.使用重復移液器向板的每個孔中加入10μLCCK8溶液。注意不要在孔洞中引入氣泡，因為它們會干擾O.D.讀數。

5.將培養板在培養箱中孵育1-4小時。

6.在讀取孔板之前，重要的是在軌道振動器上輕輕混合1分鍾，以確保顏色均勻分布。

7.使用酶標儀測量450 nm處的吸光度。

數據分析

統計分析有幾種方法，您可以選擇使用O.D.值或細胞數量，我們提供其中一種方法。

細胞存活率（％）= [（As-Ab）/（Ac-Ab）]×100

抑制率（％）= [（Ac-As）/（Ac-Ab）]×100

As =實驗孔吸光度（含有細胞，培養基，CCK-8和待測化合物的孔的吸光度）。

Ab =空白孔吸光度（含有培養基和CCK-8的孔的吸光度）。

Ac =對照孔吸光度（含有細胞，培養基和CCK-8的孔的吸光度）。

製作標准曲線

1. 細胞計數板計數細胞懸液中的細胞數。

2. 使用培養基，等比稀釋細胞懸液為一個濃度梯度，通常需要5-7個濃度梯度，每組幾個復孔。然後接種細胞。（注意每孔的細胞數量。如果您將細胞懸液稀釋在管中，在加入培養板的孔之前，請小心再次混勻細胞。每孔中細胞懸液的體積應該是一致的。）

3. 培養直至細胞貼壁（通常2-4小時），然後每100 μl培養基加入10 μl CCK-8。繼續孵育1-4小時，用酶標儀測量450nm處的吸光度。製作出一條以細胞數為X軸坐標，O.D.值為Y軸坐標的標准曲線。

可以基於該曲線確定待測樣品的細胞數。使用此標准曲線的先決條件是培養檢測條件相同。

注意事項

1. 確保葯物和CCK8均勻分布在培養基中。

2. 細胞增殖越多, 顏色越深; 細胞毒性越強，顏色越淺。

3. 對於貼壁細胞，每孔至少需要1000個細胞（100 μl培養基）。對於白細胞，由於靈敏度較低，每孔至少需要2500個細胞（100 μl培養基）。推薦的96孔板每孔最大細胞數為25000。如果使用24孔或6孔板進行該檢測，請計算相應的每孔的細胞數，並調整CCK-8的體積，使其為每孔總液體體積的10％。

4. 因為CCK8測定是基於活細胞中的脫氫酶活性，影響脫氫酶活性的條件或化學物質可能導致實際活細胞數與使用CCK-8測定活細胞數之間有差異。

5. WST-8可能與還原劑反應生成WST-8 formazan。如果使用還原劑 (例如一些抗氧化劑)會干擾檢測。如果待檢測體系中存在較多的還原劑，需設法去除。

6. 孵育2小時後，背景O.D.值一般為0.1-0.2單位。

7. 注意不要在孔中引入氣泡，因為它們會干擾O.D.值。

8. 如果您想對CCK8溶液進行滅菌，請使用0.2 μm的膜過濾溶液。

9. 孵育時間因孔中細胞的類型和數量而異。通常，白細胞著色較弱，因此可能需要較長的孵育時間（長達4小時）或大量細胞（~105細胞/孔）。

10. 如果細胞懸液中存在高濁度, 測量並減去樣品在600nm或更高波長的O.D值。

11. CCK8不能用於細胞染色。

12. 培養基中的酚紅不會影響實驗結果，酚紅的吸光度可以在計算時，通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會對檢測造成影響。

13. CCK8的毒性非常低，在CCK8測定完成後，相同的細胞可用於其他細胞增殖測定，例如結晶紫測定，中性紅測定或DNA熒光測定。（除非細胞極為稀少，不推薦。）

14. 該試劑盒可用於大腸桿菌，但不能用於酵母細胞。

15. 在讀取平板之前，您可以在搖床上輕柔混勻。

16. 我們建議將細胞接種在靠近培養板中央的孔中，最外圍一圈孔中的培養基容易蒸發，可以用PBS，水或培養基填充這些孔。

17. 如果您沒有450nm濾光片。您也可以使用吸光度在430和490nm之間的濾光片, 450nm濾光片具有最佳靈敏度。

18. 測量450nm處的吸光度，如果您需要進行雙波長測定，作為參考波長可以測定650nm處的吸光度。

19. 葯物中金屬離子的存在可能會影響CCK8的靈敏度。終濃度為1mM的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會抑制 5%、15%、 90% 的顯色反應，使靈敏度降低。如果終濃度是10mM的話，將會100%抑制。

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推薦測試劑 Cell Counting Kit-8 (CCK-8)

❷ 細胞活性檢測的方法有多少種 每種的原理是什麼

在目前的細胞活性檢測方法中，MTT法是較早且較為經典的方法。但是，由於MTT法形成的甲物是非水溶性的，需要加有機溶劑溶解，這不僅增加了研究人員的工作量，也給實驗帶來了一定的誤差。在這里我們向大家介紹一種國外最新檢測方法—CCK-8法，它具有方便、靈敏、快速、無放射性、重復性好的特點。現在已廣泛用於細胞增殖檢測、細胞毒性檢測、葯物篩選、葯敏試驗等。

另外還將向大家介紹幾種氧化應激和蛋白質抗體標記的新方法。
內容：
1、新型細胞活性檢測方法介紹
2、國外氧化應激測定方法介紹
3、蛋白質抗體標記的新方法介紹

原理恕在下不知

❸ 測定微生物細胞活性的方法都有哪些

根據每個細胞有一定的重量而設計的。它可以用於單細胞、多細胞以及絲狀體微生物生長的測定。將一定體積的樣品通過離心或過濾將菌體分離出來，經洗滌，再離心後直接稱重，求出濕重，如果是絲狀體微生物，過濾後用濾紙吸去菌絲之間的自由水，再稱重求出濕重。不論是細菌樣品還是絲狀菌樣品，可以將它們放在已知重量的平皿或燒杯內，於105℃烘乾至恆重，取出放入乾燥器內冷卻，再稱量，求出微生物乾重。
如果要測定固體培養基上生長的放線菌或絲狀真菌，可先加熱至50℃，使瓊脂熔化，過濾得菌絲體，再用50℃的生理鹽水洗滌菌絲，然後按上述方法求出菌絲體的濕重或乾重。
除了乾重、濕重反映細胞物質重量外，還可以通過測定細胞中蛋白質或DNA的含量反映細胞物質的量。蛋白質是細胞的主要成分，含量也比較穩定，其中氮是蛋白質的重要組成元素。從一定體積的樣品中分離出細胞，洗滌後，按凱氏定氮法測出總氮量。蛋白質含氮量為16％，細菌中蛋白質含量占細菌固形物的50％一80％，一般以65％為代表，有些細菌則只佔13％一14％，這種變化是由菌齡和培養條件不同所產生的。因此總含氮量與蛋白質總量之間的關系可按下列公式計算：
蛋白質總量＝含氮量×6.25
核酸DNA是微生物的重要遺傳物質，每個細菌的DNA含量相當恆定，平均為8.4×`10^(-5)`NG。因此從一定體積的細菌懸液中所含的細菌中提取DNA，求得DNA含量，再計算出這一定體積的細菌懸液所含的細菌總數。

❹ 細胞活性檢測的方法有多少種 每種的原理是什麼

簡單說幾個把

1. 染色體法 主要在培養基中利用死活細胞對燃料親和力不同 來判斷

2. 克隆形成實驗 原理是單個細胞在體外增至六代後，後代形成的細胞群體 ，通過計算其克隆形成率 來判斷

3. 比色法 也是比較經典的 M,RR 活體細胞中的線粒體中的琥珀酸脫氫酶可以將M，rr還原成藍紫色的結晶甲醋 死細胞無此功能
   

❺ 鑒定培養細胞活力有多種方法，fda是主要方法之一，其原理是什麼

細胞活力鑒定的方法：
1、相差顯微鏡觀察法 2、FDA染色法 3、伊凡藍染色法

FDA染色法：是測定原生質體活性的一種方法，即熒光素雙醋酸酯染色，FDA本身無熒光，
進入原生質體後便產生熒光素，它不能自由進入原生質體膜，因此有活力的細胞便產生熒光。

原生質分離，酶，纖維素酶，離析酶。
步驟：葉片表面消毒→去除表皮→葉碎片漂浮在含有酶和滲透壓穩定劑的溶液中→培育→原
生質體沉到培養皿底部→除去酶溶液→將原生質體移入CPW清洗→離心→清洗基質兩次
→重懸浮於培養基→除去小的個體，用血球計計數→調整到合適的密度重懸浮於培養基。
原生質體的培養：
培養基，MS+NAA 2.0ppm+BA 0.5ppm+3%蔗糖+9%甘露醇
注意：
1、原生質體分離後，非常脆弱，需要滲透壓保護劑的保護直到細胞壁形成。
2、針對不同的研究對象，培養基中生長素和細胞分裂素的水平要做適當調整。
影響原生質體培養的因素，營養需求（NH4+不能過多）滲壓劑，培養密度（105/mL）
貯藏條件（通常在黑暗處）。
培養方法:液體基質培養法,半液體基質培養法,固體基質培養法,看護培養。
固體培養的步驟,原生質體移入培養基→1體積含原生質體的培養基與1體積含瓊脂糖
(40℃)的培養基混和→倒轉培養皿在25℃下培養→原生質體重新產生細胞壁並分裂成細
胞團→細胞團於瓊脂糖基質中傳代培養,培養基中應減少滲壓劑以利於愈傷組織的形成→誘
導分化成植物的根莖。
原生質體分離培養的意義：
1、除去了細胞壁為植物細胞之間的融合掃平了障礙，同時葉為製造新雜種開辟了道路。
2、原生質體可攝入外源DNA,細胞器、細菌或病毒顆粒，這些特性與植物全能性相結合為高等植物的遺傳飾變打下基礎。
3、獲得細胞無性系和選育突變體的優良起始材料。
取洗滌過的原生質體懸浮液 0.5ml置於10×100mm的小試管中，加入 FDA溶液使其最終濃度為 0.01混勻、置於室溫5min後用熒光顯微鏡觀察。激發光濾光片用QB24壓制濾光片用JB8。發綠色熒光的原生質體為有活力的，不產生榮光的為無活力的。由於葉綠素的關系，葉肉原生質發黃綠色熒光的為有活力的，發紅色熒光的為無活力的。

❻ 請問現在測細胞活性，除了MTT，還有其他好方法嗎

MTT是最常用的檢測細胞活性的方法，但目前也有很多其他選擇。像CCK-8和WST-1，還有一些其他方法不是很常用。
CCK-8比前面的MTT更加靈敏，也越來越受到大家的認可，CCK-8的原理跟MTT其實是相同的，不同之處在於CCK-8法生成的formazan是水溶性的，不需要再吸出培養液加入有機溶劑溶解這個步驟，因此可以減少一定的誤差。對細胞毒性小；為1瓶溶液，毋需預制，即開即用。但是CCK-8價格要比MTT貴，我們選了一個知名度比較好的國產CCK-8試劑盒，炎熙的CCK-8試劑盒，已經用了一年多了，質量穩定，價格比sigma的便宜很多。沒辦法，預算有限。
還有一些檢測增殖，毒性的試劑，像BrdU 等等，沒有親自用過。

❼ 細胞活力測定常用的簡便方法是

MTT法又稱MTT比色法，是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚（Formazan）並沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二甲基亞碸（DMSO）能溶解細胞中的甲瓚，用酶聯免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數量。在一定細胞數范圍內，MTT結晶形成的量與細胞數成正比。該方法已廣泛用於一些生物活性因子的活性檢測、大規模的抗腫瘤葯物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經濟。
缺點：由於MTT經還原所產生的甲瓚產物不溶於水，需被溶解後才能檢測。這不僅使工作量增加，也會對實驗結果的准確性產生影響，而且溶解甲瓚的有機溶劑對實驗者也有損害。
細胞活力常用百分比表示，活力的大小對試驗結果有很大影響。細胞活力的測定有許多方法，最簡便常用的方法是台盼藍（trypanblue）染色法。台盼藍又稱錐藍，是一種陰離子型染料，這種染料不能透過活細胞正常完整的細胞膜，故活細胞不著色，但死亡細胞的細胞膜通透性增加，可使染料通過細胞膜進入細胞內，使死細胞著色呈藍色。

❽ 檢測細胞生物學活性有哪些方法

根據每細胞定重量設計用於單細胞、細胞及絲狀體微物測定定體積品通離或濾菌體離經洗滌再離直接稱重求濕重絲狀體微物濾用濾紙吸菌絲間自由水再稱重求濕重論細菌品絲狀菌品放已知重量平皿或燒杯內於一05℃烘乾至恆重取放入乾燥器內冷卻再稱量求微物乾重 要測定固體培養基放線菌或絲狀真菌先加熱至50℃使瓊脂熔化濾菌絲體再用50℃理鹽水洗滌菌絲按述求菌絲體濕重或乾重 除乾重、濕重反映細胞物質重量外通測定細胞蛋白質或DNA含量反映細胞物質量蛋白質細胞主要含量比較穩定其氮蛋白質重要組元素定體積品離細胞洗滌按凱氏定氮測總氮量蛋白質含氮量一陸％細菌蛋白質含量占細菌固形物50％吧0％般陸5％代表些細菌則佔一三％一四％種變化由菌齡培養條件同所產總含氮量與蛋白質總量間關系按列公式計算： 蛋白質總量＝含氮量×陸.二5 核酸DNA微物重要遺傳物質每細菌DNA含量相恆定平均吧.四×`一0^(-5)`NG定體積細菌懸液所含細菌提取DNA求DNA含量再計算定體積細菌懸液所含細菌總

❾ 細胞活力的細胞活力鑒定的方法

染色排除法（最常用）
台盼藍法：死細胞染成藍色，活細胞不著色
苯胺黑法：死細胞染成黑色，活細胞不著色
伊紅Y法：
熒光排除法：
生活力強的細胞能發出強烈的黃綠色熒光；生活力弱的細胞發出熒光也較弱；死亡細胞無熒光。
細胞內酶與特定試劑的顯色反應：
MTT比色實驗：琥珀酸脫氫酶可使MTT分解產生蘭色結晶狀甲贊顆粒積於細胞內和細胞周圍，其量與細胞數呈正比，也與細胞活力呈正比
克隆形成試驗

❿ 常用的檢測細胞活力的方法有哪些（除了MTT）

現在應用最多的是CCK-8法。CCK8基本與MTT是一樣的，優點是產物溶於水，所以避免了有機溶劑溶解甲月贊的步驟，既節省了時間，還大幅提高了一致性。
當然最精確的還是同位素標記法。