Ⅰ d生物素溶解方法
d生物素溶解方法:
1.自溶法:
將新鮮的生物材料放於一定的 PH 溶液中和適當的溫度下,細胞在其內所有的各種水解酶(如蛋白酶盒酯酶)的作用下發生溶解,使細胞內含物釋放出來。使用時要特別小心操作,因為水解酶不僅可以使細胞壁和膜破壞,同時也可能會分解某些要提取的有效成分。
2.酶解法:
用各種水解酶(如溶解酶,纖維素酶,蝸牛酶盒酯酶)於37度PH8的緩沖液中處理細胞15min,可以專一性地將細菌或植物細胞壁分解,釋放出細胞內含物。細菌細胞壁較厚,可採用溶菌酶處理;酵母細胞常採用蝸牛酶(來自蝸牛),將酵母細胞懸於0.1mmol/ L 杞櫞酸﹣磷酸氫二鈉緩沖液(PH5.4)中,加1%蝸牛酶,在30度處理30秒,即可使大部分細胞壁破裂,如同時加入0.2%疏基乙酸,則效果會更好。此法可與研磨法聯合使用。
d生物素也稱維生素H、輔酶R,是水溶性維生素,也屬於維生素B族,B7。它是合成維生素C的必要物質,是脂肪和蛋白質正常代謝不可或缺的物質。是一種維持人體自然生長、發育和正常人體機能健康必要的營養素。
Ⅱ 溶菌酶腸溶片服用方法飯前服還是飯後服
您好, 溶菌酶腸溶片應該在飯前服用的。 有不明白的歡迎繼續提問。
Ⅲ 酶制劑在食品保鮮中的應用有哪些
酶制劑在食品保鮮中的應用2.1溶菌酶
溶菌酶(Lysozme)又稱胞壁質酶或N-乙醯胞壁
質聚糖水解酶,可以水解細菌細胞壁肽聚糖的"-1,4糖苷鍵,導致細菌自溶死亡。溶菌酶的分子量14000左右,等電點10.7~11.0,
其化學性質十分穩定,在pH值1.2~11.3劇烈變化時,其結構幾乎不變,故非常適合於各種食品的防腐[3]
。
對革蘭氏陽性菌、好氣性孢子形成菌、枯草桿菌、地衣型芽孢桿菌等都有抗菌作用,而對沒有細胞壁的人體細胞不會產生不利影響。能殺死腸道腐敗球菌,增加抗感染力,同時還能促進嬰兒腸道雙歧乳酸桿菌增殖,促進乳酪蛋白凝乳利於消化,所以是嬰兒食品、飲料的優良添加劑。對人體完全無毒、無副作用,具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤的功效,是一種安全的天然防腐劑。用溶菌酶處理食品,可有效地防止和消除細菌對食品的污染,起到防腐保鮮作用。因此溶菌酶現已在乾酪、水產品、釀造酒、乳製品、肉製品、新鮮果蔬、豆腐、糕點、面條、及飲料等防腐保鮮中廣泛應用。馬美湖等的研究也證明溶菌酶對於控制細菌總數的增殖,減緩TVB-N的上升具有極其重要的作用[4]。
2.1.1在乳製品的保鮮與強化中的應用。目前,我國液態乳製品發展很快,溶菌酶應用於乳製品中可起到防腐的效果,尤其適用於巴氏殺菌奶,可有效地延長保存期。由於溶菌酶具有一定的耐高溫性能,也可適用於超高溫瞬間殺菌奶。添加劑量為300~600mg/kg,
其方法為包裝前添加,超高溫瞬間殺菌奶也可以在殺菌前添加[5]。
在乾酪的生產中,添加一定量的溶菌酶,可防止微生物污染而引起的酪酸發酵,以保證乾酪的質量。
新鮮的牛乳中含有少量的溶菌酶,每100mi約含13mg,而人乳中含有40mg/mi溶菌酶。若在鮮乳或奶粉中加入一定量的溶菌酶,則不但有防腐保鮮劑的作用,而且可達到強化嬰兒乳品的目的,有利於嬰兒的健康。
2.1.2在低溫肉製品中的保鮮應用。由湖南農業大學研製的~Nsafety-010低溫肉製品保鮮劑,專門適用於低溫肉製品的保鮮。採用純天然、安全、無毒、高效的物質經科學方法配製而成。該保鮮劑在95C以下均保持性質穩定,因此,將其添加到原料肉中進行低溫加熱(80C左右),可保持活力不變。該保鮮劑可以延長低溫肉製品保鮮期1倍以上。使用濃度為肉重的0.01%~0.05%。使用方法為在肉塊進行滾揉或進行斬拌時加入。應注意的是低溫肉製品熱加工溫度
不要超過95C,否則,會影響其活性[6]。
2.1.3低濃度釀造酒的保鮮。釀造酒的酒精含量較低,有些微生物可在其中生長,而引起變質。例如,清酒的酒精含量為15%~17%,大部分微生物不能在其中生長,而有一種稱為火落菌的乳酸菌,則可在清酒中生長,並生成乳酸和產生不愉快的味道。若在清酒中加入15mg/kg的溶菌酶,即可
起到良好的防腐效果[7]
。
2.1.4水產品的保鮮。一些新鮮水產品
(如:蝦、魚等)在含甘氨酸(0.1M)、溶菌酶(0.05%)和食鹽(3%)的混合液中浸漬5min後瀝去水分,保存在5C的冷庫中,9d後無異味、
色澤無變化[6]。
2.1.5其他食品的保鮮。在香腸、奶油、生面條、飲料等食品中加入溶菌酶均可起到良好的保鮮作用。
在應用溶菌酶作為食品保鮮劑時,必需注意到酶的專一性。因為溶菌酶抗菌譜較窄,對於酵母、黴菌和革蘭氏陰性菌等引起的腐敗變質不能起到防腐作用。但將溶菌酶與植酸、聚合磷酸鹽、甘氨酸同用,因發生協同作用,對革蘭氏陰
性菌的溶菌力可顯著加強,可大大提高了防腐效果[8]。
2.2葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶(Glucoseoxidase)對食品
有多種作用,作為在食品保鮮及包裝中最大的作用是除氧,延長其食品的保鮮保質期。很多食品,尤其是生鮮食品,其保藏過程中或加工過程中,氧的存在使其保鮮受到很大影響,除氧是食品保藏中的必要手段。很多除氧方法效果都不佳,從選擇抗氧劑的特性來說,利用葡萄糖氧化酶除氧是一種理想的方法,葡萄糖氧化酶具有對氧非常專一性的理想的抗氧作用。對於已經發生的氧化變質作用,它可阻止進一步
發展,或者在未變質時,它能防止發生[4]
。由於葡萄糖氧化
酶催化過程不僅能使葡萄糖氧化變性,而且在反應中消耗掉一個氧分子,因此,它可作為除葡萄糖劑和脫氧劑廣泛應用於食品保鮮。
2.2.1脫糖保鮮。用葡萄糖氧化酶去除食品中殘留的葡萄糖,目前應用最多的是生產脫水製品(如蛋白粉、蛋白片等)
中。例如蛋的蛋白中含有0.5%~0.6%的葡萄糖,葡萄糖的羰基與蛋白質的氨基發生Maillard反應,而使產品發生褐變、出現小黑點或使全蛋粉的溶解度下降等。因此在蛋液中加入適量的葡萄糖氧化酶(100~200mg/kg),不斷地供給適量的氧氣,在30~32C條件下處理一段時間,使葡萄糖完全氧
化,從而很好地保持蛋類製品的色澤和溶解性[7]
。此外,葡
萄糖氧化酶也可應用於脫水蔬菜、肉類及蝦類食品保鮮中,防止因葡萄糖引起的褐變反應。
2.2.2防止食品氧化。氧化是造成食品色、
香、味變壞的重要因素,含量很低的氧就足以使食品氧化變質。將葡萄糖氧化酶和其作用底物葡萄糖混合在一起,包裝於不透水而可透氣的薄膜袋中,封閉後置於裝有需保鮮食品的密閉容器中,當密閉容器中的氧氣透過薄膜進入袋中,就在葡萄糖氧化酶的催化作用下與葡萄糖發生反應,從而達到除氧保鮮的目的。葡萄糖氧化酶也可直接加入到罐裝果汁、酒、水果及色拉調料中,起到防止食品氧化變質的作用。如在啤酒加工過程中加入適量的葡萄糖氧化酶可以除去啤酒中的溶解氧和瓶頸氧,阻止啤酒的氧化變質。葡萄糖氧化酶又具有酶的專一性,不會對啤酒中的其他物質產生作用。因此葡萄糖氧化酶在防止啤酒老化,保持啤酒風味,延長保質期有顯著的效
果[4]。又例如防止白葡萄酒在多酚氧化酶的作用下而變色、
果汁中的Vc因氧化而破壞、多脂食品中脂類因氧化而酸敗等等。此外,也可有效地防止罐裝容器內壁的氧化腐蝕。
此外,木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、黴菌酸性蛋白酶等都可以降解啤酒渾濁的蛋白質組分,防止啤酒冷渾濁,延長啤酒貯存期。
Ⅳ 用溶菌酶處理細菌菌體之後不用超聲破碎可以么
細菌有堅硬的細胞壁,首先要破碎經胞.方
法有三種:①機械方法:超聲波處理法、研磨法、勻漿法;②化學試劑法:用SDS處理細胞; ③酶解法:加入溶菌酶或蝸牛酶,都可使細胞壁破碎.
由於高等動物DNA 主要存在於細胞核與線粒體中,所以提取時有兩個困難(高等植物與此類似):
①破碎細胞難;從處死動物٠分離組織器宮到破碎細胞費時長.在此時期間DNA 可能會被DN ase降解,而動物組織:特別是肌肉組織很難破碎,即使是較易破碎的肝٠腎等組織也往往使用組織勻漿器,易造成DNA 斷裂.
②分子量大,一般比細菌的大2—3個數量級,比病毒的大4—5個數量.對不同生物材料,要根據具體情況選擇適當的分離提取方法.
Ⅳ 有關天根細菌基因組DNA提取試劑盒中第二步革蘭氏陽性菌的問題
一般DNA提取試劑盒中都是配好的,也可以找替代的緩沖液。如果沒有現成的也可以根據參考的配置:Tris—鹽酸緩沖液,基本的工具書中都有,溶菌酶也該是用液體低溫分裝的,根據說明滴加!
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使用敷爾佳凍乾粉的體會
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Ⅶ 凍乾粉的正確使用方法
將凍乾粉與溶菌酶混合後,用滴定管或注射劑取六分之一量,置於掌心輕拍於面部直至完全吸收,或使用低溫導引器,效果更明顯。
凍乾粉具有美容養顏的作用,因為凍乾粉中含有較多的營養物質,可以提高患者的皮膚代謝,改善臉部微循環。而且凍乾粉還可以促進身體分泌纖維蛋白和促進合成,增加皮膚的彈性。因此可以起到嫩膚、美容養顏的效果。
另外,凍乾粉還可以殺滅細菌,起到消炎的作用,所以可以用於治療面部痤瘡。凍乾粉還可以在一定程度上增強體質,起到預防感冒的作用。但是建議在使用前應先做過敏試驗,防止皮膚過於敏感,出現過敏的症狀。
凍乾粉使用注意事項
使用凍乾粉之前,應先用洗面奶清洗臉部,適當的塗抹些爽膚水,滋養下肌膚,然後再塗抹凍乾粉。
凍乾粉分為兩瓶,不是只使用其中一瓶,更不能直接塗抹凍乾粉,應該將兩瓶混在一起搖均使用,如果直接使用凍乾粉,容易導致臉部滋生痘痘,油脂分泌旺盛,對皮膚極為不利。
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Ⅷ 水煮法提取DNA 的詳細過程
摘要 您好,為您找到更細致的過程文字:水煮法提取DNA
Ⅸ 在溶菌酶的粗提取實驗中,為什麼將蛋清緩沖液PH調到4.7後又調到8.0
因為卵清蛋白的等電點是4.7,為了提純溶菌酶,要將卵清蛋白沉澱,所以要把PH調到4.7,至於8.0,這是溶菌酶的最適PH值。
提取溶菌酶的方法:
樹脂預處理:干樹脂清水浸泡,使其充分膨脹並除去細小顆粒和較大雜質; 1 mol/L 的HCl浸泡2 h,去離子水洗3次至至近中性;抽濾收集樹脂,1 mol/L 的NaOH溶液浸泡2 h,去離子水洗3次至近中性;抽濾收集樹脂,加0.15 mol/L、pH 值為6.5的磷酸緩沖液平衡過夜待用。
蛋清制備:將3個新鮮雞蛋洗凈乾燥,小端敲一個小洞,大端打一個小孔進氣,分離得雞蛋清,用1 mol/L HCl調節PH到7。過濾前稱量燒杯重48.7g,緩慢攪拌用滅菌的兩層紗布過濾除去臍帶塊和碎蛋殼等,蛋清與燒杯總重207.5g,蛋清凈重158.8g。用1 mol/L 的HCl 溶液調pH 值至7.0,量蛋清體積為100 ml。在調節PH時蛋清中出現少量白色沉澱,可能為部分蛋白由於局部過酸而變性。
吸附:蛋清在不斷攪拌下加入抽濾好的724樹脂25g(相當蛋清四分之一體積的樹脂),冰水浴中磁力攪拌器緩慢攪拌(使樹脂全部懸浮在雞蛋清中,攪拌不能起泡)吸附2.5 h,4℃靜置1.5h。然後3000r/min離心15min分層,收集樹脂,回收蛋清(留樣A)。
去除雜蛋白:收集樹脂用去離子水振盪水洗直至洗液澄清(至無白沫為止),吸管輕吸去洗液,以去除雜蛋白。(每洗1次,離心1次,總共3次)冰浴中用等體積的0.15mol/L、pH =6.5的磷酸緩沖液攪拌洗滌15min,抽濾,重復洗三次,注意防止樹脂流失。最後一次抽濾濾除樹脂水分至乾燥。
洗脫溶菌酶:樹脂中加入35ml(等體積)的10%(NH4)2SO4溶液攪拌洗脫30 min,抽濾,使溶菌酶從樹脂上洗脫下來,重復兩次,合並收集洗脫液(留樣),洗脫液過濾後,准確量取體積100ml。(留樣B)
鹽析:每83mL洗脫液加32g磨細的固體(NH4)2SO4,本實驗中總量為38.55g。緩慢加入(NH4)2SO4攪拌待完全溶解後保鮮膜封口,置於4℃冰箱鹽析過夜。
透析:待白色沉澱析出,3000r/min離心15 min,收集沉澱,用去離子水將沉澱洗下並全部溶解(4.5ml去離子水),裝於透析袋中,於去離子水中透析(冰浴),期間2次更換去離子水,直至用BaCl2檢測透析完全。透析裝置中加入磁子,於磁力攪拌器中攪拌加快透析速度。
去雜質蛋白:取出透析袋中的透析液,用0.1mol/L HCl調整pH4.6,產生少量白色沉澱(留樣D),可能為雜蛋白。3000r/min離心10min,收集上清液(留樣C 20ul)。
濃縮:用PEG-20000濃縮上清液至1.5ml(留樣E,20ul,加loading buffer,出現黃色(可能為濃縮時透析袋中滲入了PEG-20000)。[5][6]
Ⅹ 請教用溶菌酶裂解細菌的配方
溶菌酶( lysozyme )主要是由吞噬細胞合成並分泌的一種小分子粘性蛋白,屬乙醯多糖酶。存在於唾液、乳汁、淚液和鼻及氣管等分泌物中,能溶解革蘭氏陽性細菌。由於它的高等電點( pH11.0 ),使它能與細菌牢固結合,並水解細菌細胞壁肽聚糖,使細菌裂解死亡。 本實驗在平板上進行唾液…
溶菌酶( lysozyme )主要是由吞噬細胞合成並分泌的一種小分子粘性蛋白,屬乙醯多糖酶。存在於唾液、乳汁、淚液和鼻及氣管等分泌物中,能溶解革蘭氏陽性細菌。由於它的高等電點( pH11.0 ),使它能與細菌牢固結合,並水解細菌細胞壁肽聚糖,使細菌裂解死亡。
本實驗在平板上進行唾液酶的測定。溶菌酶與枯草芽胞桿菌( Bacillus subtilis )作用後,可使該菌因細胞壁破壞而溶解,致使瓊脂板加樣孔周圍出現溶菌環。溶菌環直徑與樣品中溶菌酶含量的對數呈直線關系。
【材料】
1• 無菌 PBS ( pH6.4 , 1/15mol/L ), 5mol/LKOH , 3%PBS 瓊脂,溶菌酶標准品,受驗者唾液。
2• 枯草芽胞桿菌 12 小時培養物。
3• 10×100 試管,試管架,無菌平皿,打孔器,微量加樣器。
4• 分光光度計,水浴箱,溫箱等。
【方法】
1. 菌液配製:將 PBS 加入枯草芽胞桿菌斜面,置室溫 5-10 分鍾後製成菌懸液;在波長 640nm 處,測定菌懸液的濃度,並將菌液濃度調至透光率 30-40% 。
2. 溶菌酶標准液配製:稱取溶菌酶標准品,用 PBS 配成 1000 m g/ml ,置冰箱凍存,臨用時再稀釋成 100 、 50 、 25 和 10 m g/ml 。
3. 收集唾液標本:待檢測者用清水漱口後,將唾液收集於消毒平皿內待用。
4. 加熱融化 3% 瓊脂,冷至 60 -70℃ ,與預熱好的枯草芽胞桿菌菌懸液等體積混合,到平板。用打孔器在平板上打孔,孔間距約 1.5cm , 每平板可打孔 8-9 個。
5. 各孔內依次加溶菌酶標准品和唾液樣品,每孔 20 m l 。
6. 置於 24 -26 ℃ 12-18 小時後測量溶菌環直徑。
【結果判斷】
記錄溶菌環的直徑( mm )於下表,繪制標准曲線,並從標准曲線上查出所測樣品的溶菌酶含量。