細菌標本片常用製片方法

Ⅰ 光學顯微鏡如何製片 觀察細菌

觀察細菌用塗片，即將細菌培養液均勻塗布在載玻片上製成玻片標本。 塗完片後染色，加蓋玻片固定。

Ⅱ 簡述制備細菌玻片標本的方法

細菌標本片的制備，實際上真沒這必要，我一般碘酒，或者溴酚藍滴上一染，蓋上玻片就看了。
1.抹片
（1）固體培養物：取潔凈的玻片一張，把接種環在酒精燈火焰上灼燒滅菌後，取1-2環無菌生理鹽水，放於載玻片的中央，再將接種環滅菌，冷卻後，從固體培養基上挑取菌落或菌苔少許，與水混勻，作成直徑1cm的塗面。接種環用後需要滅菌。
（2）液體培養物：可直接用滅菌接種環鉤取細菌培養液1-2環，在玻片上作直徑1cm塗面。
（3）液體病料（血液，滲出液，腹水）：取一張邊緣整齊的載玻片，用一端蘸取血液等液體材料少許，在另一張潔凈的玻片上，一45°角均勻推成一薄層的塗面。
（4）組織病料：以無菌剪刀、鑷子剪去被檢組織一小塊，以其新鮮切面在玻片上做3-5個壓印或塗抹成適當大小的一薄層。
無論何種方法，切忌塗抹太厚，否則不利於染色和觀察
2.乾燥
塗片應在室溫下自然乾燥，必要時將塗片塗面向上，置於火焰高處微加熱乾燥。
3.固定
（1）火焰固定。是常用的方法，將乾燥好的抹片塗面向上，在火焰上來回通過數次（4-6次），以手背觸及玻片微燙手為宜。
（2）化學固定。有的血片，組織觸片用姬姆薩染色時，要用甲醇固定3-5min
二、常用的細菌染色法
1.美藍染色法：在經火焰固定的塗片上，滴加適量美蘭染色液覆蓋塗面，染色2-3min，水洗，晾乾或吸水紙輕壓吸干鏡檢，結果，菌體呈藍色
2.革蘭氏染色法。
（1）在固定好的抹片上，滴加草酸銨結晶紫染色液，染1-3min，水洗
（2）加革蘭氏碘液媒染，作用1-2min，水洗
（3）加95%酒精脫色約30s至1min，水洗
（4）加稀釋石碳酸復紅或沙黃水溶液復染30s左右，水洗，吸干後鏡檢
3.瑞氏染色法
細菌抹片自然乾燥後，滴加瑞士染色液於塗片上以固定標本，1-3min後，再滴加與染色液等量的磷酸鹽緩沖液或中性蒸餾水與玻片上，輕輕搖晃使染色液混合均勻，5min左右水洗，干後鏡檢，菌體呈藍色，組織細胞的胞漿呈紅色，細胞核呈藍色
4.姬姆薩染色法。血片或組織觸片自然乾燥後，用甲醇固定3-5min，乾燥後在其上滴加足量染色液或將抹片浸入盛有染色液的缸里，染色30min，或者染色數小時或24h，取出水洗，吸干或烘乾，鏡檢。細菌呈藍青色，組織細胞漿呈紅色，細胞核呈藍色

Ⅲ 怎樣製作細菌標本（放在顯微鏡下觀察的那種）

先挑取一環(接種環)生理鹽水於玻片上. 挑一點菌落(量要少,"."那麼大就夠) 在玻片上生理鹽水附近磨菌落,菌落磨到玻片上,生理鹽水拉進來與菌落混合塗勻.如果直接放到生理鹽水裡,很可能菌落整塊從環上脫落就不容易塗開

Ⅳ 微生物細菌製片時，除了熱固定法，細菌的固定方法還有那些

固定有物理方法和化學方法兩種。用乾燥、高熱和低溫驟冷等方法進行固定稱為物理方法固定，如血液塗片就是乾燥固定；細菌塗片可以用加熱法固定；冰凍切片是利用低溫驟冷。化學方法固定就是用化學試劑配製成固定液使之固定。

Ⅳ 觀察細菌採取的製片方法是塗片還是水浸片法

在菌體形態觀察中，需要進行製片後才能在顯微鏡下觀察，觀察細菌時採取的製片方法是塗片法，觀察放線菌時採取的製片方法是壓片法，觀察真菌採取的製片方法是水浸片。

Ⅵ 物體的微細結構必須製成什麼才能在顯微鏡下觀察清楚

物體的細菌結構必須製成玻片標本在顯微鏡下才能觀察清楚。

顯微玻片標本簡稱玻片標本(preparation)原意是指經過一定處理的生物的整體或局部的標本。但現在則指為顯微鏡觀察所製作的生物和礦物標本。製作生物材料的顯微玻片標本有塗抹法（塗片法）、擠壓法（壓片法）和切片法。

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細菌的製片方法：在鏡檢前必須將被檢物製成玻片標本，才能觀察，用於標本的玻片應非常干凈。

根據被檢物所要檢查的項目和供檢材料的不同，其製片方法有以下三種：

①普通法（壓片法）：用普通法製作活細菌標本，不但便於觀察細菌的運動，而且還能觀察細菌的形狀、大小和芽孢。其方法是：在干凈的載玻片上滴一滴蒸餾水，用接種環挑取一環供檢材料放入水中並混勻，若供檢材料為液體而不太濃時，則不必加水。

然後加放蓋玻片，在蓋片時，應先把蓋片的一端放在載玻片上，再慢慢向下壓蓋，勿使水從該玻片邊緣溢出。同時避免發生氣泡，然後用干凈的玻璃棒等使蓋片緊貼在載玻片上。

為了便於觀察，可用美藍或復紅等染色液代替誰使用，將細菌染成藍色或紅色，然後把蓋玻片蓋上，在進行鏡檢，這樣看的較為清晰。

②懸滴法：懸滴法用於觀察生活狀態的細菌，如細菌的運動、繁殖方式、孢子萌發等。其方法是：取一滴蒸餾水或培養液於干凈的蓋玻片中央，再取一環培養好的菌體，接種於蓋玻片的液滴中。

然後將蓋玻片翻轉過來，蓋於凹玻片的凹窩中，使菌液正好倒垂在載玻片的凹窩中央，不要使水滴碰到凹窩的壁和底。

為防止乾燥，在蓋玻片邊沿上塗上凡士林，使菌液緊緊處在密閉的小室中，即可鏡檢。因為沒有染色的活細菌是透明的，不易看到，必須降低聚光器或縮小光圈，以減少照明強度，認真觀察，才能得到良好效果。

若觀察其繁殖或孢子萌發時，需將帶有懸滴的玻片放在底部鋪有濕紙或濕棉的培養皿中，以便保濕，蓋好皿蓋進行定溫培養，而後鏡檢。

③塗片法：塗片法適用於細菌結構的觀察，其方法是：首先在干凈的載玻片中央加一滴蒸餾水，用滅菌的接種環取少許菌體，放在載玻片上，與水混合塗成直徑約為1cm的均勻薄片，即成塗片。用這種塗片法制的標本在顯微鏡下一般不直接看，經染色後才能看得清晰。

Ⅶ 敘述細菌,放線菌,酵母菌,黴菌的光學顯微鏡製片方法

一、細菌製片及簡單染色：
1、塗片
取潔凈的載玻片1張，將其在火焰上微微加熱，除去上面的油脂，冷卻，在中央部位滴加一滴無菌水，用接種環在火焰旁從培養基上挑取少量菌體與水混合。用接種環將菌體塗成直徑約1cm的均勻薄層。注意，取菌量不宜過大，一面造成軍體重疊。
2、乾燥
放在桌面上，待其自然乾燥。
3、固定
將已乾燥的塗片標本向上，在火焰上通過3-4次固定。其目的是殺死細菌；使菌體蛋白質凝固，菌體牢固粘附於載玻片上，染色時不被染液或水沖掉；增加菌體對染料的結合力，使圖片易著色。
4、染色
在塗片上滴加染料1-2滴，使其布滿塗菌部分，染色1分鍾。
5、沖洗
斜置玻片，傾去染液。用水輕輕沖去染液，至流水變清。注意水流不能直接沖洗塗菌處，以免將塗菌沖洗掉。
6、吸干
用吸水紙輕輕吸去玻片上的水分，乾燥後鏡檢。

二、酵母菌製片及簡單染色。
水—碘液浸片法。將革蘭氏染色用碘液用水稀釋4倍後，滴加一滴於載破片中央，無菌操
作取少許菌體置於染色中混勻，蓋上破片後鏡劍。

三、放線菌製片方法（插片法）
1、在馬鈴薯浸汁瓊脂培養基平板上，劃線接入少量放線菌的孢子，在接種線旁傾斜地插入無菌蓋玻片，於28-30℃培養。
2、培養3～4天後，菌絲沿著蓋玻片向上生長，待菌絲長好後，取出蓋玻片放在干凈的載玻片上，置於顯微鏡下觀察。

四、黴菌製片法
水浸製片法：
1、在載玻片上滴加一滴乳酸石炭酸棉藍染色液或蒸餾水。
2、用解剖針從生長有黴菌的斜面挑取少量帶有孢子的黴菌菌絲，用50%的乙醇浸潤，再用蒸餾水將浸過的菌絲洗一下，然後放入載玻片上的液滴中，仔細地用解剖針將菌絲分散開來。（也可省略酒精和水浸潤，洗滌）
3、注意取菌時，毛霉和根霉用解剖針挑取少量菌絲即可，青黴和黑麴黴和培養基結合緊密，不易挑取，可連培養基一起挑取，再在染液中分離菌絲。青黴和麴黴的培養時間不宜過長，一般為2-2.5天，以免菌絲與培養基不好剝離。
4、蓋上蓋玻片（勿使產生氣泡，且不要再移動蓋玻片）。（黑麴黴不易觀察到足細胞）
5、鏡檢：先用低倍鏡，必要時轉換高倍鏡鏡檢並記錄觀察結果。

Ⅷ 製作細菌標本片是由哪幾個步驟

製作微生物玻片標本通常採用塗片法，微生物包括細菌和真菌（或包括病毒），細菌個體小，通常用塗片法製作玻片標本。塗片法是裝片法製作玻片標本的一種方法。製作方法是，細菌可以用細菌液直接塗布在載玻片上，蓋上蓋片直接觀察或乾燥後染色觀察，染色觀察通常需要洗去染色液後觀察。製作真菌標本可以採用塗片法、撕片法、貼片法和切片法，單細胞或孢子或菌絲採用塗片法，大型真菌有較大的組織塊，可以採用撕片法（如撕取一部分蘑菇絲）、貼片法（將蘑菇的菌褶貼到載片上）和切片法（切片的方式觀察蘑菇的結構）。
製作植物玻片標本方法很多，根據材料不同和觀察目的不同採用不同方法。塗片法（觀察果實營養組織，如西瓜瓤）、撕片法（觀察洋蔥表皮、觀察導管）、切片法（觀察組織、器官結構）、磨片法（堅硬的果核磨成薄片觀察）。
切片法分為徒手切片、冰凍切片和石蠟切片等方法。

Ⅸ 細菌塗片怎麼製作

實驗准備材料：酒精燈、接種環、染液、載玻片、菌種、生理鹽水等

步驟：

1.取一塊干凈無菌的載玻片，在載玻片中央滴一滴生理鹽水。

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實驗注意事項：

1.接種環必須要圓滑平整，使用前後必須在酒精燈上燒灼滅菌。

2.注意做好實驗過程記錄，實驗名稱及日期。

3.塗片不要太厚，要均勻。

4.塗片固定時一定要把握時間和溫度，避免溫度過高引起菌體破壞。