細胞計數器使用方法

A. 如何對活細胞進行計數

去哪裡找最出色的生命科學學術交流論壇？>>> 用台盼藍拒染法計數活細胞: 1. 徹底混合細胞懸液，取100礚樣本至一支試管中. 2. 台盼藍染色有兩種方法。一是首先用細胞培養液稀釋細胞樣本，然後用台盼藍溶液(產品號 #07050) 1/2稀釋樣本（細胞和台盼藍的稀釋比為1:1）。或者直接用台盼藍溶液稀釋樣本。 例如：1/40稀釋樣本 加入50礚 細胞懸液至950礚 IMDM+2% FBS (1/20 稀釋)，混合，然後取100礚稀釋的細胞懸液加入100礚台盼藍溶液中(終稀釋度為1/40)。或取20礚細胞懸液加入780礚台盼藍溶液中(終稀釋度為1/40)。 3. 渦懸振盪，混合稀釋的細胞樣本。 4. 血細胞計數器的准備：首先用酒精清潔其小室和蓋玻片，然後用脫脂綿擦乾。 5. 仔細的將蓋玻片覆蓋兩個小室。 6. 用微量移液器或毛細管吸取稀釋的樣本。 7. 用微量移液器或毛細管將樣本充滿兩個小室。不要過滿或不足。 8. 計數4個大方格中細胞核的總數(1x1x0.1mm)或>100個細胞。分別死細胞和活細胞。死細胞染成藍色的死細胞(因為細胞完整性破壞，細胞吸收台盼藍)，活細胞透明有折光（未染色）。 9. 活細胞計數按以下方法計算： 每個方格中活細胞總數平均值x稀釋倍數x104= 活細胞數/mL 10.活細胞百分比計算方法如下：

B. 血球計數板的使用方法

使用方法如下：

1.視待測菌懸液濃度，加無菌水適當稀釋（斜面一般稀釋100倍），以每小格的菌數可數為度。

2．取潔凈的血球計數板一塊，在計數區上蓋上一塊蓋玻片。

3．將菌懸液搖勻，用滴管吸取少許，從計數板中間平台兩側的溝槽內沿蓋玻片的下邊緣滴入一小滴（不宜過多），讓菌懸液利用液體的表面張力充滿計數區，勿使氣泡產生，並用吸水紙吸去溝槽中流出的多餘菌懸液。也可以將菌懸液直接滴加在計數區上（不要使計數區兩邊平台沾上菌懸液，以免加蓋蓋玻片後，造成計數區深度的升高），然後加蓋蓋玻片（勿使產生氣泡）。

4．靜置片刻，使細胞沉降到計數板上，不再隨液體漂移。將血球計數板放置於顯微鏡的載物台上夾穩，先在低倍鏡下找到計數區後，再轉換高倍鏡觀察並計數。由於生活細胞的折光率和水的折光率相近，觀察時應減弱光照的強度。

5．計數時若計數區是由16個中方格組成，按對角線方位，數左上、左下、右上、右下的4個中方格（即100小格）的菌數。如果是25個中方格組成的計數區，除數上述四個中方格外，還需數中央1個中方格的。

菌數（即80個小格）。為了保證計數的准確性，避免重復計數和漏記，在計數時，對沉降在格線上的細胞的統計應有統一的規定。如菌體位於大方格的雙線上，計數時則數上線不數下線，數左線不數右線，以減少誤差。即位於本格上線和左線上的細胞計入本格，本格的下線和右線上的細胞按規定計入相應的格中。見右圖：即本格中計數細胞為3個。

6．對於出芽的酵母菌，芽體達到母細胞大小一半時，即可作為兩個菌體計算。每個樣品重復計數2-3次（每次數值不應相差過大，否則應重新操作），按公式計算出每mL（g）菌懸液所含細胞數量。

7．測數完畢，取下蓋玻片，用水將血球計數板沖洗干凈，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免損壞網格刻度。洗凈後自行晾乾或用吹風機吹乾，放入盒內保存。

(2)細胞計數器使用方法擴展閱讀:

計數公式

紅細胞數(RBCs)/L=N/5×25×10×106×200

N為：五個中方格的RBC總數

N/5為：5個中方格（粉紅色區域）的平均RBC數量（然後推及至中央大方格中每一個中方格RBC的數量）

N/5×25為：中央大方格RBC總數（即：0.1mm3（ul）的RBC總數）

N/5×25×10為：1mm3（ul）RBC總數

N/5×25×10×106為：1L的RBC總數

200為：血液的稀釋倍數

公式簡化後：紅細胞數/L=N×5×107×稀釋倍數

公式前面部分都是換算成每微升血多少該計數細胞；最後都是由微升換算到升，乘以10的6次方

(1)目鏡測微尺每格長度=兩個重疊刻度間物鏡測微尺格數×10/兩個重疊刻度間目鏡測微尺格數

(2)以同樣方法,分別在不同倍率的物鏡下測定測微尺上每格的實際長度.

(3)如此測定後的目鏡測微尺的尺度,僅適用於測定時所用的顯微鏡的目鏡和物鏡的放大倍數.若更換物鏡,目鏡的放大倍數時,必須再進行校正標定.

參考資料:血球計數板-網路

C. 細胞計數儀如何操作

瑞沃德細胞計數儀，只需要將10μL細胞樣品加入一次性計數板，插入計數儀後儀器會自動對焦，直接點擊計數即出結果。

D. 細胞計數器使用前清洗要注意些什麼

細胞分類計數器是一種常用的細胞計數工具，醫學上常用來計數紅細胞、白細胞等。適用於高校、研究所，醫用中心，臨床輸科、醫院、製品生產單位，醫學實驗室等領域。
細胞分類計數器使用注意事項：
1、 該機為交直流兩用供電方式，將外接穩壓器輸出插頭插到計數器後插孔，電池供電斷開，有外接穩壓器供電；拔掉外接穩壓器輸出插頭，則有電池供電。外接穩壓器器輸出插頭請勿經常隨意拔出，以免接觸不良，常期不用電池供電，請將電池取出。
2、 禁止擠壓、扭曲、碰撞和私自拆卸，如出現故障，請致電本公司，屬使用不當而非產品質量問題造成器件損壞，維修時酌情收費。
3、使用時，應將儀器水平放置，遠離強電磁場的干擾，電源電壓應在規定的范圍內。
4、按鍵時，手指要按在按鍵的中部，用力要適當，過重容易損壞按鍵。
5、儀器不使用時，應該拔下電源插頭，用東西遮蓋防塵並保持乾燥。

E. 血細胞計數器做什麼用的

是血細胞計數板嗎？一般可以用來計算單位體積內細菌的數量或血細胞的數量。可以說一般細胞都能計數。

F. 細胞計數器和菌落計數器的區別是一種產品嗎

傳統的菌落計數器使用時，是將計數筆連接到主機上，打開電源開關，

將培養皿放在白光板上，打開白光燈，用計數筆觸動計數，LED顯示屏顯示所計數量；計數完成可用計數筆在稿紙上暫記總數，重新開關電源，LED顯示屏自動歸零，二次計數與稿紙上一次總數比較，數量相同可得較准確的結果。同時，按照細菌計數檢驗規程規定，一隻培養皿中細菌生長數超過300個時，應將檢驗樣品稀釋重作，以保證計數的准確性，所以，一般的菌落計數器儀器顯示計為三位數。

多功能血細胞計數器是由數字處理晶元、集成電路，以及顯示屏、按鍵組成，與各種顯微鏡配合使用，由

微電腦進行自動分類計數的數字化專用產品，能對骨多功能血細胞計數器髓細胞、外周血細胞、小巨核細胞進行全面的分類計數並自動計算出各項指標，能對細胞化學染色後的積分進行計算，並兼有常用的四則運算。

G. 菌落總數培養皿怎麼數,片上面又有好多小點要數嗎

固體培養基表面及內部的可見菌落（包括小點）均要計數，計數時可用筆在培養皿背面劃線，分若干塊計數
細菌菌落總數（CFU）的測定
一）平板菌落數的選擇
1、進行平皿菌落計數時，記下同一濃度的3個平板（或2個）的菌落總數，計算平均值，再乘以稀釋倍數即為1ml水樣中的細菌總數。
2、計數時應選擇菌落數在30~300/皿之間的稀釋倍數進行計數，若同—個稀釋度中一個平皿有較大片狀菌落生長時，則不宜採用，而應以無片狀菌落生長的平皿計數該稀釋度的平均菌落數。若片狀菌落少於平皿的一半時，而另—半中菌落分布又均勻，則可將其菌落數的2倍作為全皿的數目。在記下各平皿菌落數後，應算出同一稀釋度的平均菌數，供下—步計算時用。
(二)
稀釋度的選擇
l、首先選擇平均菌落數在30～300者進行計算，當只有一個稀釋度的平均菌落數符合此范圍時，即可用它作為平均值乘其稀釋倍數。
2、若有兩個稀釋度的平均菌落數都在30～300之間，則應按兩者的比值來決定。若其比值小於2，應報告兩者的平均數；若大於2則報告其中較小的菌落數。
3、如果所有稀釋度的平均菌落數均大於300，則應按稀釋度最高的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之。
4、若所有稀釋度的平均菌落數均小於30，則應按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之。
5、如果全部稀釋度的平均菌落數均不在30～300之間，則以最接近300或30的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之。
6、菌落計數的報告，菌落在100以內時按實有數報告；大於100時，採用二位有效數字；在二位有效數字後面的數值，以四捨五入方法計算。為了縮短數字後面的零數,也可用10的指數來表示，在所需報告的菌落數多至無法計算時，應註明水樣的稀釋倍數。

H. 活細胞的顯微計數方法及步驟

將細胞樣品與台盼藍染料混合。活細胞排斥染料，而死細胞被染成深藍色。將細胞鋪在血球計數器的玻板上，顯微鏡下進行人工計數。

一、材料

血（球）計數計（改進的Neubauer 型），每次用後洗凈並晾乾。（也可以用其他計數器，只是格子不同。）

血（球）計數計的蓋玻片（可重復使用），每次用後洗凈並晾乾。

含0.4% (W/V) 台盼藍的PBS 。

計數器

懸浮好的細胞（既可以是懸浮生長的細胞，也可以是胰蛋白酶處理的貼壁生長的細胞），確認貼壁生長的細胞已經充分游離成單細胞（見圖1) ，渦旋培養瓶後取代表性樣本。

圖1 a 單層細胞呈扁平狀，對比度較低。

b 當細胞剛剛從基底上剝落時它們仍舊結合在一起。

c 很快當所有的細胞都剝落下來後，大多數細胞都呈單個游離

圖2 使用血球計數計（改進型）進行細胞計數，細胞計數計中央網格的兩側格室都要鋪滿細胞

a 用10 X 的物鏡觀察（總放大倍數為100), 1 mm2 的格子可以完全出現在視野內。每個1 mm2 的格子被分成了25 個小格子。

b. 25 個小格子的每個又被分成了20 個更小的方格，以計數小的或稀少的細胞數。

c. 用1 mm2的小格子的細胞數計算到每毫升細胞數。

移液器、移液頭。

微型離心管。

直立或倒罰的相差顯微鏡，10倍物鏡。

待稀釋無菌培養基。

二、步驟

將蓋玻片平穩地蓋在血球計數計的中間。

取500 μI 細胞培養液到微型離心管中，如果樣品過少就只取100 μI

取50 μI 細胞和50 μI 台盼藍混勻。

用移液管取50 μI 混合液，輕輕地在蓋玻片的兩邊滴上20 μI, 讓液體通過毛細管現象吸到載玻片上面（如果有兩個樣品，可以放置兩個蓋玻片，並小心地分別滴到蓋玻片下，即使只有一個樣品也要把計數器的兩個計數室都填滿） 。

立刻把計數計放到顯微鏡的工作台上，在低倍鏡下固定一個格子計數，只需計數任何一個1 mm2 格子內的細胞數量， 就可以換到高倍鏡下確保視野中有一個完整的方格。低倍鏡下也可以計數，但不容易區分活的和死的細胞。如果使用的是倒置顯微鏡，要降低物鏡以得到足夠的光線。

大致確定格子中的細胞（數2 5 個小格即可），以決定細胞是要稀釋還是濃縮。理想的細胞數量是30~300 個／ mm, 如果過多，就以1:5 或1: 10 稀釋，（例如10 倍稀釋，將步驟2 中50 μI 細胞懸液與450 μI培養基或緩沖液混合，按步驟3 取50 μI 細胞液與50 μI 台盼藍混合） 。

計算1 mm2 格子內的活細胞數量，死細胞會全部被染成藍色，而活細胞不被染色（可能會有藍邊） 。最好是把兩者都數出來，可以計算出活細胞的比例。

計數3 個不同的1 mm2 的格子，得到平均值。

計算出1 ml 中的細胞數目。

平均值X 10 000 X 稀釋倍數＝ 原始樣品中1 ml 的細胞數。

例如

三個格子的細胞數分別為113 、99 和118, 平均為11 0 。

110 X 10 000 = 1.1 X 106

由於細胞和台盼藍是等體積混合，稀釋倍數為2,

2 X 1. 1 X 106 = 2. 2 X 106

所以原液中細胞數目為2.2 X 106 個／ ml 。

計算出原細胞懸液中活細胞的比例

計算方法為： （活細胞總數／細胞總數） X100

三、溫馨提示

1.沒有將懸浮很好的或混合很好的細胞加到計數室內是血球計數氐不能正確計數的主要原因。

2. 如果細胞數小於30, 可以把取出的細胞離心並用小的體積重新懸浮，但是通常不用這樣做。數三個格子求平均值即可。

3. 為了避免同一個細胞數兩次，只計數每個小格子上部和左邊的細胞而不計數右邊和下邊的細胞。每次計數的時候都要遵循同一規則，這樣才能保證每次計數的都一樣。

4.如果每次數的細胞數量差別在20% 以上，說明細胞沒有完全分散，或有成團的現象。

I. 如何對活細胞進行計數

用台盼藍拒染法計數活細胞:
1. 徹底混合細胞懸液,取100礚樣本至一支試管中.
2. 台盼藍染色有兩種方法.一是首先用細胞培養液稀釋細胞樣本,然後用台盼藍溶液(產品號 #07050) 1/2稀釋樣本（細胞和台盼藍的稀釋比為1:1）.或者直接用台盼藍溶液稀釋樣本.
例如：1/40稀釋樣本
加入50礚 細胞懸液至950礚 IMDM+2% FBS (1/20 稀釋),混合,然後取100礚稀釋的細胞懸液加入100礚台盼藍溶液中(終稀釋度為1/40).或取20礚細胞懸液加入780礚台盼藍溶液中(終稀釋度為1/40).
3. 渦懸振盪,混合稀釋的細胞樣本.
4. 血細胞計數器的准備：首先用酒精清潔其小室和蓋玻片,然後用脫脂綿擦乾.
5. 仔細的將蓋玻片覆蓋兩個小室.
6. 用微量移液器或毛細管吸取稀釋的樣本.
7. 用微量移液器或毛細管將樣本充滿兩個小室.不要過滿或不足.
8. 計數4個大方格中細胞核的總數(1x1x0.1mm)或>100個細胞.分別死細胞和活細胞.死細胞染成藍色的死細胞(因為細胞完整性破壞,細胞吸收台盼藍),活細胞透明有折光（未染色）.
9. 活細胞計數按以下方法計算：
每個方格中活細胞總數平均值x稀釋倍數x104= 活細胞數/mL