形態學檢查最常用的染色方法

⑴ he染色的操作步驟是什麼

he染色的操作步驟：

1. 將石蠟切片置於烘箱中60℃烤1～2h；

2. 石蠟切片常規二甲苯，乙醇脫蠟至水，

3. 蘇木素染10分鍾，

4. 流水沖洗，去余色，

5. 0.7%鹽酸乙醇分化數秒鍾，
   

6. 流水沖洗，切片變藍約15分鍾，

7. 7.95%乙醇30秒鍾，

8. 8.酒精性伊紅染30秒，

9. I 95%乙醇30秒鍾，

10. II 95%乙醇30秒鍾，

11. I 100%乙醇30秒鍾，

12. II100%乙醇30秒鍾，

13. 石碳酸二甲苯30秒鍾，（1： 4石碳酸1-二甲苯4）

14. I二甲苯30秒鍾，

15. II二甲苯30秒鍾，

16. 中性樹膠封片。

    

⑵ 體液細胞形態學最常用的染色方法

簡單染色法,常用鹼性染料如美藍等進行簡單染色;

⑶ 細菌學中最常用的染色方法

細菌形態學檢查方法：常用染色方法 1．美藍染色法 在已乾燥、固定好的抹片上，滴加適量的美藍染色液，經1一2分鍾，水洗，干後鏡檢，結果是細菌呈藍色。 2．稀釋石炭酸復紅染色法 染色方法同美藍染色法，結果是細菌呈紅色。 3．革蘭（Gram）氏染色法 （1）在已乾燥、固定好的抹片上，滴加草酸按結晶紫染色液，染色2一3分鍾，水洗。 （2）加革蘭氏碘液於抹片上媒染1一2分鍾，水洗。 （3）加95％酒精於抹片上脫色，約30秒至1分鍾，水洗。 （4）加稀釋石炭酸復紅（或沙黃水溶液）復染50一60秒鍾，水洗。干後鏡檢。結果是細菌染成藍紫色的稱為革蘭氏陽性細菌，染成紅色的稱為革蘭氏陰性細菌。

⑷ 巴氏染色的原理是什麼

巴氏染色液的染色原理：

核酸等電點為PH1.5-2.0,當PH＞2.0時，能結合帶正電荷的蘇木素。染料中的伊紅、亮綠、橙黃等為酸性染料，俾士麥棕為鹽基性染料，能與細胞漿中相反電荷的蛋白質結合，從而染出鮮艷的結構。

細胞學常規染色普遍使用巴氏（Papanicolaou）法，橘黃G與EA36或EA50聯合使用可將胞漿染成顏色鮮明的綠色、藍色和粉色，細胞中的細胞核是由酸性物質組成，它與鹼性染料的親和力較強；而細胞漿則相反，它含有鹼性物質和酸性染料的親和力較大。

巴氏染色液正是利用這一特性對細胞進行多色性染色，細胞經染色後能清晰地顯示細胞的結構，胞質透亮鮮麗，各種顆粒分明，細胞核染色質非常清楚，從而較容易發現異常細胞。

巴氏染色注意事項：

一、細胞核著色不佳

1、細胞核著色過淺：

（1）鹽酸分化時間過長或蘇木素染液時間過長。需要縮短分化時間或延長鹼化時間；每日加入少量新鮮蘇木素染液或重新配製蘇木素液。

（2）在固定之前製片乾燥。所以對巴氏染色的製片需要嚴格遵守濕固定的原則。

（3）自來水的PH值偏酸性。使用鹼性溶液。

2、細胞核著色過深：

（1）鹽酸溶液濃度不夠。適當加入幾滴鹽酸以增加濃度。

（2）製片用高於95%以上濃度的酒精固定後可以出現染色過深。應用95%酒精固定。

二、細胞漿著色不佳

1、如果全片內胞漿都淡染，則需要延長染色時間或更換新液。

2、如果胞漿不分色，均為淺紅色。製片在固定前乾燥或製片被有大量球菌樣細菌影響胞漿染色。此情況可以適當增加染色時間能夠部分糾正不分色狀況。

3、胞漿染成灰色或紫色，是由於蘇木素染色時間過長或鹽酸分化不佳。經過褪色後重新蘇木素可以糾正。

4、由於標本的不同，同樣配方的EA染液可造成偏藍、偏綠和偏紅，對不同的標本應該使用不同的EA染液。一般認為，EA36和EA50用於婦科標本，而EA65或改良EA用於非婦科標本。

5、胞漿不分色的另一重要原因是由於EA染液的PH值不恰當所致。如染色為紅色，可以加少許磷鎢酸溶液糾正；如染色均為藍色或綠色，可以加少許飽和碳酸鋰溶液糾正。對於改良EA染液，每100ml染液加入2ml冰醋酸後染色效果更佳；染液使用更持久。

⑸ HE染色的原理

易於被鹼性或酸性染料著色的性質稱為嗜鹼性和嗜酸性。

對鹼性染料和酸性染料親和力都比較弱的現象稱為中性。

在普通染色法中，染色液的酸鹼度為pH6左右，細胞內的酸性物質如細胞核的染色質、腺細胞和神經細胞內的粗面內質網及透明軟骨基質等均被鹼性染料染色，這些物質稱為嗜鹼性。

細胞質中的其它蛋白質如紅細胞中的血紅蛋白、嗜酸粒細胞的顆粒及膠原纖維和肌纖維等被酸性染料染色，這些物質稱為嗜酸型。

如果改變染色液的酸鹼度，pH值升高時，則原來被酸性染料染色的物質可變為嗜鹼性；pH值降低時，原來被鹼性染料染色的物質則可變為嗜酸性。所以說染色液的pH值可以影響染色的反應。

(5)形態學檢查最常用的染色方法擴展閱讀：

脫氧核糖核酸（DNA）兩條鏈上的磷酸基向外，帶負電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木精鹼性染料以離子鍵結合而被染色。

由於組織或細胞的不同成分對蘇木精的親和力不同及染色性質不一樣。經蘇木精染色後，細胞核及鈣鹽粘液等呈藍色，可用鹽酸酒精分化和弱鹼性溶液顯藍，如處理適宜，可使細胞核著清楚的深藍色，胞漿等其它成分脫色。再利用胞漿染料伊紅染胞漿，使胞漿的各種不同成分又呈現出深淺不同的粉紅色。故各種組織或細胞成分與病變的一般形態結構特點均可顯示出來。

⑹ 醫學上的染色法，除了革蘭氏染色和瑞氏染色外，還有哪些

染色方法

微生物染色方法一般分為單染色法和復染色法兩種。前者用一種染料使微生物染色，但不能鑒別微生物。復染色法是用兩種或兩種以上染料，有協助鑒別微生物的作用。故亦稱鑒別染色法。常用的復染色法有革蘭氏染色法和抗酸性染色法，此外還有鑒別細胞各部分結構的（如芽胞、鞭毛、細胞核等）特殊染色法。食品微生物檢驗中常用的是單染色法和革蘭氏染色法。

1、單染色法

用一種染色劑對塗片進行染色，簡便易行，適於進行微生物的形態觀察。在一般情況下，細菌菌體多帶負電荷，易於和帶正電荷的鹼性染料結合而被染色。因此，常用鹼性染料進行單染色，如美蘭、孔雀綠、鹼性復紅、結晶紫和中性紅等。若使用酸性染料，多用剛果紅、伊紅、藻紅和酸性品紅等。使用酸性染料時，必須降低染液的PH值，使其呈現強酸性（低於細菌菌體等電點），讓菌體帶正電荷，才易於被酸性染料染色。

單染色一般要經過塗片、固定、染色、水洗和乾燥五個步驟。

染色結果依染料不同而不同：

石碳酸復紅染色液：著色快，時間短，菌體呈紅色。
美蘭染色液：著色慢，時間長，效果清晰，菌體呈蘭色。

草酸銨結晶染色液：染色迅速，著色深，菌體呈紫色。

2、革蘭氏染色法

革蘭氏染色法是細菌學中廣泛使用的一種鑒別染色法，1884年由丹麥醫師Gram創立。

細菌先經鹼性染料結晶染色，而經碘液媒染後，用酒精脫色，在一定條件下有的細菌此色不被脫去，有的可被脫去，因此可把細菌分為兩大類，前者叫做革蘭氏陽性菌（G+），後者為革蘭氏陰性菌（G—）。為觀察方便，脫色後再用一種紅色染料如鹼性蕃紅等進行復染。陽性菌仍帶紫色，陰性菌則被染上紅色。有芽胞的桿菌和絕大多數和球菌，以及所有的放線菌和真菌都呈革蘭氏正反應；弧菌，螺旋體和大多數致病性的無芽胞桿菌都呈現負反應。

革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌在化學組成和生理性質上有很多差別，染色反應不一樣。現在一般認為革蘭氏陽性菌體內含有特殊的核蛋白質鎂鹽與多糖的復合物，它與碘和結晶紫的復合物結合很牢，不易脫色，陰性菌復合物結合程度底，吸附染料差，易脫色，這是染色反應的主要依據。

另外，陽性菌菌體等電點較陰性菌為低，在相同PH條件下進行染色，陽性菌吸附鹼性染料很多，因此不易脫去，陰性菌則相反。所以染色時的條件要嚴格控制。例如，在強鹼的條件下進行染色，兩類菌吸附鹼性染料都多，都可呈正反應；PH很低時，則可都呈負反應。此外，兩類菌的細胞壁等對結晶紫—碘復合物的通透性也不一致，陽性菌透性小，故不易被脫色，陰性菌透性大，易脫色。所以脫色時間，脫色方法也應嚴格控制。本文來自檢驗地帶網

革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟，具體操作方法是：

1）塗片固定。

2）草酸銨結晶紫染1分鍾。

3）自來水沖洗。

4）加碘液覆蓋塗面染1分鍾。

5）水洗，用吸水紙吸去水分。

6）加95%酒精數滴，並輕輕搖動進行脫色，30秒後水洗，吸去水分。

7）蕃紅梁色液（稀）染10秒鍾後，自來水沖洗。乾燥，鏡檢。

染色的結果，革蘭氏正反應菌體都呈紫色，負反應菌體都呈紅色。

⑺ 細菌鑒定辦法有哪些，常見細菌的鑒定辦法就可以

細菌的鑒定通過分離培養獲得的病原菌，必須達到不含有其他微生物的純培養程度，才能進行系統鑒定。系統鑒定就是通過病原菌的形態結構、生長特性、抗原性和病原性等檢測，並用已知標准免疫血清確定分離細菌的屬、種和型。微生物鑒定的程序通常是根據其形態，生長、生化特性等定種，最後根據抗原的免疫血清學檢查定型。(一)形態學檢查各種細菌的形態，在適宜的環境下是相對穩定的。但環境的改變，如培養基條件的改變，抗生素和化學葯品的作用等，均可使細菌產生不規則的形態，並可出現細胞壁的缺陷和多樣性。為此，在作細菌形態鑒定時，必須按被檢菌的生長要求，選擇適宜的培養基和培養條件，以及適宜的培養時間和檢查方法，才能作出正確的形態學鑒定。形態學檢查一般包括二方面：肉眼觀察和顯微鏡檢查。1.肉眼觀察肉眼觀察主要觀察細菌在固體、液體、半固體，鑒別培養基上的生長情況。在固體培養基上要觀察菌落形態、大小、顏色是否均勻一致，表面是光滑濕潤，還是乾燥無光或呈皺紋狀，邊緣是整齊還是不規則，菌落是隆起、扁平，還是乳頭樣，是透明、半透明或不透明。在液體培養基中，要觀察培養基是否呈均勻渾濁，管底有無沉澱，液面有無菌膜，是否產氣等。在半固體培養基上應觀察細菌是否沿著接種線生長，是呈毛刷樣生長還是均勻生長，上下生長是否一致。在鑒別培養基上，應觀察其生長情況是否與預期的相一致，在血瓊脂培養基上還要觀察是否溶血及溶血圈的特點，在某些培養基上還要注意是否有臭味等。2.顯微鏡觀察在作細菌個體形態學檢查時，要根據被檢菌的種類和檢查項目，選用相應的染色方法，同時要注意選擇適合的培養基以及細菌培養的時間，才能達到預期的目的。一般以18－24小時（生長時間長的細菌除外）的幼嫩培養菌為宜。例如，作革蘭氏染色檢查時，培養時間長的陳舊細菌，可能由陽性變為陰性。作細菌運動性檢查時，液體培養基的幼嫩培養物（幾小時到十幾小時）最為適宜。作炭疽莢膜染色時，因炭疽桿菌在一般培養基上不形成莢膜，而在動物體內形成明顯的莢膜，因此，應先接種小鼠，取死亡動物的病料作塗片標本鏡檢。作鞭毛染色時，以液體培養基為宜。芽胞的形成，因細菌種類不同，往往對培養條件如培養基、空氣和培養時間等而異，但一般均要求較長時間。鏡檢時除注意其基本形態結構和大小（要用測微計測量）外，還應注意其排列狀態、菌端形狀、有無兩極染色、有無形成芽胞和莢胞等。必要時可用電鏡觀察其微細結構。3.常用的幾種染色方法塗片用的載玻片需用清潔液洗凈、擦乾、不留油質，否則培養物不能均勻地推開。被檢材料如果是肉湯培養物，用鉑金耳環取一滴，均勻塗抹於載玻片上，塗抹的范圍約有手指甲大即可。隨後，在酒精燈火焰上加熱使之固定（即火焰固定）；被檢材料如果是固體培養物，先滴一滴水（常用生理鹽水）於載玻片上，用鉑金耳環取少許培養物，在水滴中混勻，培養物不宜太多，菌體看不清楚。膿汁、淋巴液、乳汁也按同樣方法制備抹片。血液和病變組織，直接塗抹在載玻片上，組織抹片也不能太厚，否則看不見細菌，細菌培養物抹片用火焰固定，組織抹片常用甲醇或甲醛固定。

⑻ 觀察細菌形態時為何要用染色法常用的染色法有幾類

觀察細菌形態時為何要用染色法？因為細菌細胞微小,透明,不易觀察,需染上顏色.利用單一染料對細菌進行染色,使經染色後的菌體與背景形成明顯的色差,從而能更清楚地觀察到其形態和結構.
常用的染色法有：
1．簡單染色法：簡單染色法是利用單一染料對細菌進行染色的一種方法， 一般用於觀察個體形態與細菌排列。
由於細菌在中性、鹼性或弱酸性環境中帶負電荷，所以通常採用一種鹼性染料如美藍、鹼性復紅、 結晶紫對細菌進行染色。美藍是美藍的鹽酸鹽，可解離為帶正電荷的美藍，很容易與細菌結合使菌體著色。染色後的細菌細胞與背景形成鮮明的對比，在顯微鏡下更易於識別。
簡單染色過程：塗片→固定→染色→水洗→乾燥→鏡檢
塗片→ 固定→ 乾燥→ 水洗、吸干→鏡檢→染色 1mim
2．革蘭氏染色法：
革蘭氏染色法是由丹麥醫生 Hans Christian Gram於 1884 年創立。它是細菌學中很重要的鑒 別染色法，因為通過此法染色，可將細菌鑒別為革蘭氏陽性菌（G + ）和革蘭氏陰性菌（G － ）兩大 類。
革蘭氏染色過程：塗片→固定→結晶紫初染（1min）→碘液媒染（1min）→乙醇脫色（95% 酒精,30s）→番紅復染（30 秒）→乾燥→鏡檢
陽性菌：紫色； 陰性菌：紅色