食用菌蛋白質的測定方法

❶ 測定蛋白質含量的方法有哪些

1、凱氏定氮法

凱氏定氮法是由丹麥化學家凱道爾於1833年建立的，現已發展為常量、微量、平微量凱氏定氮法以及自動定氮儀法等，是分析有機化合物含氮量的常用方法。

凱氏定氮法的理論基礎是蛋白質中的含氮量通常占其總質量的16%左右(12%~一19%)，因此，通過測定物質中的含氮量便可估算出物質中的總蛋白質含量(假設測定物質中的氮全來自蛋白質)，即: 蛋白質含量=含氮量/16%。

2、紫外吸收光譜法

紫外吸收光譜法又稱紫外分光光度法，是根據物質對不同波長的紫外線吸收程度不同而對物質組成進行分析的方法。此法所用儀器為紫外吸收分光光度計或紫外-可見吸收分光光度計。

光源發出的紫外光經光柵或棱鏡分光後，分別通過樣品溶液及參比溶液，再投射到光電倍增管上，經光電轉換並放大後，由繪制的紫外吸收光譜可對物質進行定性分析。

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蛋白質含量測定的意義：

膳食蛋白質符合人的需要時，可維持正常代謝，生成抗體，抵抗感染，有病也易恢復。相反，蛋白質供給不足時，會減輕體重，易患貧血，容易感染疾病；創傷、骨折不易癒合；嚴重缺乏時，血漿蛋白降低，可引起浮腫。

此外癌症與蛋白質攝入量不足也有一定關系。但是，蛋白質攝入過多也可造成腎臟負擔。食物蛋白質在體內代謝所生成的尿酸、氨、酮體等累積過多，可導致衰老；而氨還對機體有毒性，不僅會陡然增加肝臟負擔，還會增加胃腸負荷，引起肝腎受累以及消化不良等症。所以，蛋白質的攝入量要適當。

❷ 蛋白質及氨基酸的測定有哪些方法求大神幫助

樓主你好： 測定蛋白質最基本的方法是定氮法，即先測定樣品中的總氮量，再由總氮量計算出樣品中蛋白質的含量。蛋白質含量測定最常用的方法是凱氏定氮法，它是測定總有機氮的最准確和操作較簡便的方法之一，在國內外應用普遍。此外，雙縮脈法、染料結合法、酚試劑法等也常用於蛋白質含量測定，由於方法簡便快速，故多用於生產單位質量控制分析。 蛋白質及氨基酸的測定 蛋白質是生命的物質基礎，是構成生物體細胞組織的重要成分，一切有生命的活體都含有不同類型的蛋白質。人體內的酸鹼平衡、水平衡的維持；遺傳信息的傳遞；物質的代謝及轉運都與蛋白質有關。人及動物只能從食品得到蛋白質及其分解產物，來構成自身的蛋白質，故蛋白質是人體重要的營養物質，也是食品中重要的營養指標。 蛋白質是復雜的含氮有機化合物，分子量很大，它們由20種氨基酸通過醯胺鍵以一定的方式結合起來，並具有一定的空間結構。不同的蛋白質其氨基酸構成比例及方式不同，故各種不同的蛋白質其含氮量也不同。蛋白質可以被酶、酸或鹼水解，最終產物為氨基酸。氨基酸是構成蛋白質的最基本物質，在構成蛋白質的氨基酸中，亮氨酸、異亮氨酸、賴氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、蘇氨酸、色氨酸和纈氨酸等8種氨基酸在人體中不能合成，必須依靠食品供給，故被稱為必需氨基酸，它們對人體有著極其重要的生理功能，常會因其在體內缺乏而導致患病，或通過補充而增強了新陳代謝作用。所以食品及其原料中蛋白質和氨基酸的分離、鑒定和定量具有極其重要的意義。 蛋白質的測定 測定蛋白質最基本的方法是定氮法，即先測定樣品中的總氮量，再由總氮量計算出樣品中蛋白質的含量。蛋白質含量測定最常用的方法是凱氏定氮法，它是測定總有機氮的最准確和操作較簡便的方法之一，在國內外應用普遍。此外，雙縮脈法、染料結合法、酚試劑法等也常用於蛋白質含量測定，由於方法簡便快速，故多用於生產單位質量控制分析。 微量凱氏定氮法 本法適用於各類食品中蛋白質的測定。 1．原理 食品與硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋白質分解，分解的氨與硫酸結合生成硫酸胺。然後鹼化蒸餾使氨游離，用過量硼酸吸收後再以硫酸或鹽酸標准溶液滴定，根據酸的消耗量乘以換算系數，即為蛋白質含量。反應過程分為三個階段，用反應式表示如下。 ①消化 2NH2(CH2)2COOH 4-13H2S04一(NH。)2S04+6C02+12S0=+16H20 (NH4)2S04+2Na()H一2NH3十+2H20+。Na2S04 2NH3+4H3803—，(NH4)2 B207+5H20 ③滴定 (NH4)2 B2 07+2HCl+5H20—NH4C1+4H3803 2．儀器 ①消化爐。 ②凱氏定氮蒸餾裝置。 3．試劑 所用試劑均用不含氨的蒸餾水配製。試劑均為分析純。 ①CuS04。 ②K2SO。 ③濃H2SO。 ④2％H。BO。溶液。 ⑤混合指示劑：1份O．1％甲基紅乙醇溶液與5份O．1％溴甲酚綠乙醇溶液臨用時混合。也可用2份O．1％甲基紅乙醇溶液與1份0．1％次甲基藍乙醇溶液臨用時混合。 ⑥飽和氫氧化鈉：500 g氫氧化鈉加入500 mL水中，攪拌溶解，冷卻後放置數日，澄清後使用。 ⑦0．01 toolI．一』或0．05 toolL叫HCl標准溶液(需用無水碳酸鈉標定後使用)。 4．操作步驟 ①樣品消化：精密稱取O．2～2．0 g固體樣品或2～5 g半固體樣品或吸取液體樣品5～20mI。，放人500 mI。乾燥凱氏燒瓶中，加人O．2 g硫酸銅、3 g硫酸鉀及20 mL濃HzSOa，於凱氏瓶口放一小漏斗，並將其以45。角斜支於有小孔的石棉網上。（更多詳細咨詢請參考國家標准物質網 www.rmhot.com ）用電爐以小火加熱，待內容物全部碳化，泡沫停止產生後，加大火力，保持瓶內液體微沸，至液體變藍綠色透明後再繼續加熱微沸30 min。冷卻，小心加入20 mL水，再放冷至室溫，移人100 mL容量瓶中，並用少量水洗燒瓶洗液並人容量瓶，在加水至刻度，混勻備用。除不加樣品外，取與處理樣品相同量的硫酸銅、硫酸鉀、硫酸，按同一方法做試劑空白消化。 ②水蒸氣發生瓶內裝水至約2／3處，加甲基紅指示液數滴及數毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入數粒玻璃珠以防暴沸，加熱煮沸水蒸氣發生瓶內的水。 ③向接收瓶內加入10 mL 2％硼酸溶液及混合指示液l滴，並使冷凝管的下端插入液面下，吸取lO mI。樣品消化稀釋液由小玻璃杯流人反應室，並以10 mL水洗滌小燒杯使之流人反應室內，塞緊小玻璃杯的棒狀玻璃塞。將3～10 mL飽和氫氧化鈉溶液倒人小玻璃杯中，提起玻璃塞使其緩緩流入反應室，立即將玻璃塞蓋緊，並加水於小玻璃杯中以防漏氣。加緊螺旋夾，開始蒸餾。蒸汽通人反應室使氨通過冷凝管而進入接收瓶內，蒸餾2～5 min，移動接收瓶，使冷凝管下端離開液面，然後用少量中性水沖洗冷疑管下端外部，再蒸餾1 min取下接收瓶，以0．01 molI．叫或O．05 molL1HCl標准溶液滴定至灰色或藍紫色為終點。同時吸取10 mI_，試劑空白消化液按③操作。 5．計算 6。說明 ①干樣用稱量紙稱重連紙一同消化，空白管同樣放稱量紙消化。 ②含糖量高和油脂高的樣品消化時容易溢出，加熱要緩慢。 ③氨是否蒸餾完全，可用pH試紙測試餾出液是否為鹼性來判斷。 ④實驗前必須仔細檢查蒸餾裝置的各個連接處，保證不漏氣。所用橡皮管、塞子須浸在氫氧化鈉(10％)中，煮沸10 min，然後水洗、水煮，再用水洗。 ⑤小心加樣，切勿使樣品沾污凱氏燒瓶口部和頸部。

❸ 測定蛋白質的定量的方法有哪些及其原理各是什麼

常用的蛋白質純化方法有離子交換色譜、親和色譜、電泳、疏水色譜等等
離子交換色譜：蛋白質和氨基酸一樣會兩性解離，所帶電荷決定於溶液ph。ph小於pi時蛋白質帶正電，ph大於pi時蛋白質帶負電。不同蛋白質等電點的蛋白質在同一個溶液中，表面電荷情況不同。離子交換就是利用不同蛋白質在同一溶液中表面電荷的差異來實現分離的。
親和色譜：生物大分子有一個特性，某些分子或基因對它們有特異性很強的吸附作用。如鎳柱中ni可以與his標簽的蛋白結合，這種只針對一種或一類物質的吸附就是親和色譜的原理。
電泳：sds-聚丙烯醯胺凝膠電泳，sds能斷裂分子內和分子間氫鍵，破壞蛋白質的二級和三級結構，強還原劑能使半胱氨酸之間的二硫鍵斷裂，蛋白質在一定濃度的含有強還原劑的sds溶液中，
與sds分子按比例結合，形成帶負電荷的sds-蛋白質復合物，這種復合物由於結合大量的sds，使蛋白質喪失了原有的電荷狀態形成僅保持原有分子大小為特徵的負離子團塊，從而降低或消除了各種蛋白質分子之間天然的電荷差異，由於sds與蛋白質的結合是按重量成比例的，因此在進行電泳時，蛋白質分子的遷移速度取決於分子大小。
疏水色譜：疏水色譜基於蛋白質表面的疏水區與介質疏水配體間的相互作用，在高濃度鹽作用下，蛋白質的疏水區表面上有序排列的水分子通過鹽離子的破壞被釋放，裸露的疏水區與疏水配體相互作用而被吸附。疏水色譜就是利用樣品中各組分在色譜填料上配基相互作用的差異，在洗脫時各組分移動速度不同而達到分離的目的。隨著鹽離子濃度的降低，疏水作用降低，蛋白質的水化層又形成，蛋白質被解吸附。

❹ 蛋白質定量測定的方法有哪些

定氮法，雙縮尿法（Biuret法）、Folin－酚試劑法（Lowry法）和紫外吸收法。考馬斯亮藍法（Bradford法）。
凱氏定氮 靈敏度低，適用於0.2~ 1.0mg氮，誤差為 ±2％ 費時
8～10小時 將蛋白氮轉化為氨，用酸吸收後滴定 非蛋白氮（可用三氯乙酸沉澱蛋白質而分離） 用於標准蛋白質含量的准確測定；干擾少；費時太長
雙縮脲法（Biuret法） 靈敏度低 1～20mg 中速 20~30分鍾 多肽鍵＋鹼性Cu2＋®紫色絡合物 硫酸銨；Tris緩沖液；某些氨基酸 用於快速測定，但不太靈敏；不同蛋白質顯色相似
紫外吸收法 較為靈敏 50～100mg 快速 5～10分鍾 蛋白質中的酪氨酸和色氨酸殘基在280nm處的光吸收 各種嘌吟和嘧啶；
Folin－酚試劑法（Lowry法） 靈敏度高 ～5mg 慢速 40～60分鍾 雙縮脲反應；磷鉬酸－磷鎢酸試劑被Tyr和Phe還原 硫酸銨；Tris緩沖液；甘氨酸；
各種硫醇 耗費時間長；操作要嚴格計時；顏色深淺隨不同蛋白質變化
考馬斯亮藍法(Bradford法) 靈敏度最高 1～5mg 快速5～15分鍾 考馬斯亮藍染料與蛋白質結合時，其lmax由465nm變為595nm 強鹼性緩沖液；
SDS 最好的方法；干擾物質少；顏色穩定； 顏色深淺隨不同蛋白質變化

❺ 國家標准檢測蛋白質含量測定方法

蛋白質含量測定方法就是檢測N元素的含量，像三聚氰胺的問題，就是通過增加N的含量使「蛋白質」含量提高的。

國家標准檢測蛋白質含量的方法叫做凱氏定氮法，食物中的蛋白質在催化加熱條件下分解，導致氨和硫酸結合產生硫酸銨。 鹼蒸餾採用無硫，硼酸吸收，用硫酸或鹽酸標准滴定溶液滴定，根據酸耗計算氮含量，再乘以轉化系數，即蛋白質含量。

具體操作步驟如下：

1.樣品處理

精確稱量0.2-2.0g固體樣品或2-5g半固體樣品或吸收10-20ml液體樣品（約30-40mg氮當量）。將其轉移至乾燥的100毫升或500毫升氮氣固定瓶中，加入0.2克硫酸銅，6克硫酸鉀和20毫升硫酸，輕輕搖動，在瓶口放置一個小漏斗，將瓶子傾斜石棉網上有45度角，有小孔。

加熱小火後，內容物碳化，泡沫完全停止，加強火力，保持瓶內液體稍微沸騰，直至液體呈藍綠色澄清透明，然後繼續加熱0.5小時。取出並冷卻，小心加入20毫升水，冷卻，移入100毫升容量瓶中，用少量水洗凈氮氣瓶，洗凈液放入容量瓶中，然後用水沖洗至刻度，混勻備用。

取相同量的硫酸銅，硫酸鉀和濃硫酸作為試劑進行空白試驗。然而，這種方法很危險，很難在實驗室中證明。大多數實驗室都有一個消化器，可以一次處理16個以上的樣品和一個可以自行設定溫度的呼吸機。它更安全，更可操作。

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除了凱氏定氮法以外，標準的測量方法還有：

• 分光光度法

食品中的蛋白質在催化加熱條件下被分解，分解產生的氨與硫酸結合生成硫酸銨，在pH4.8的乙酸鈉-乙酸緩沖溶液中與乙醯丙酮和甲醛反應生成黃色的3,5-二乙醯-2,6-二甲基-1,4-二氫化吡啶化合物。在波長400nm 下測定吸光度值，與標准系列比較定量,結果乘以換算系數，即為蛋白質含量。

• 燃燒法

樣品在900~1200℃下燃燒。在燃燒過程中，產生混合氣體。 諸如碳，硫和鹽的干擾氣體被吸收管吸收，氮氧化物被還原成氮。 形成的氮氣流由熱導檢測器（TCD）檢測。

❻ 測量蛋白質總量的方法有哪些

1.凝膠過濾法 凝膠過濾法分離蛋白質的原理是根據蛋白質分子量的大小。由於不同排阻范圍的葡聚糖凝膠有一特定的蛋白質分子量范圍，在此范圍內，分子量的對數和洗脫體積之間成線性關系。因此，用幾種已知分子量的蛋白質為標准，進行凝膠層析，以每種蛋白質的洗脫體積對它們的分子量的對數作圖，繪制出標准洗脫曲線。未知蛋白質在同樣的條件下進行凝膠層析，根據其所用的洗脫體積，從標准洗脫曲線上可求出此未知蛋白質對應的分子量。
2.SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳法 蛋白質在普通聚丙烯醯胺凝膠中的電泳速度取決於蛋白質分子的大小、分子形狀和所帶電荷的多少。SDS（十二烷基磺酸鈉）是一種去污劑，可使蛋白質變性並解離成亞基。當蛋白質樣品中加入SDS後，SDS與蛋白質分子結合，使蛋白質分子帶上大量的強負電荷，並且使蛋白質分子的形狀都變成短棒狀，從而消除了蛋白質分子之間原有的帶電荷量和分子形狀的差異。這樣電泳的速度只取決於蛋白質分子量的大小，蛋白質分子在電泳中的相對遷移率和分子質量的對數成直線關系。以標准蛋白質分子質量的對數和其相對遷移率作圖，得到標准曲線，根據所測樣品的相對遷移率，從標准曲線上便可查出其分子質量。
3.沉降法（超速離心法） 沉降系數（S）是指單位離心場強度溶質的沉降速度。S也常用於近似地描述生物大分子的大小。蛋白質溶液經高速離心分離時，由於比重關系，蛋白質分子趨於下沉，沉降速度與蛋白質顆粒大小成正比，應用光學方法觀察離心過程中蛋白質顆粒的沉降行為，可判斷出蛋白質的沉降速度。根據沉降速度可求出沉降系數，將S帶入公式，即可計算出蛋白質的分子質量。質的沉降速度。S也常用於近似地描述生物大分子的大小。蛋白質溶液經高速離心分離時，由於比重關系，蛋白質分子趨於下沉，沉降速度與蛋白質顆粒大小成正比，應用光學方法觀察離心過程中蛋白質顆粒的沉降行為，可判斷出蛋白質的沉降速度。根據沉降速度可求出沉降系數，將S帶入公式，即可計算出蛋白質的分子質量。

❼ 常用來測定蛋白質含量的方法有哪些優缺點是什麼

1、凱氏定氮法

凱氏定氮法是測定化合物或混合物中總氮量的一種方法。即在有催化劑的條件下，用濃硫酸消化樣品將有機氮都轉變成無機銨鹽，然後在鹼性條件下將銨鹽轉化為氨，隨水蒸氣蒸餾出來並為過量的硼酸液吸收，再以標准鹽酸滴定，就可計算出樣品中的氮量。

由於蛋白質含氮量比較恆定，可由其氮量計算蛋白質含量，故此法是經典的蛋白質定量方法。

優點：可用於所有食品的蛋白質分析中；操作相對比較簡單；實驗費用較低；結果准確，是一種測定蛋白質的經典方法；用改進方法（微量凱氏定氮法）可測定樣品中微量的蛋白質。

缺點：凱氏定氮法只是一個氧化還原反應,把低價氮氧化並轉為氨鹽來測定,而不能把高價氮還原為氮鹽的形式,所以不可以測出物質中所有價態的氮含量。

2、雙縮脲法

雙縮脲法是一個用於鑒定蛋白質的分析方法。雙縮脲試劑是一個鹼性的含銅試液，呈藍色，由1%氫氧化鉀、幾滴1%硫酸銅和酒石酸鉀鈉配製。

當底物中含有肽鍵時（多肽），試液中的銅與多肽配位，配合物呈紫色。可通過比色法分析濃度，在紫外可見光譜中的波長為540nm。鑒定反應的靈敏度為5-160mg/ml。鑒定反應蛋白質單位1-10mg。

優點：測定速度較快，干擾物質少，不同蛋白質產生的顏色深淺相近。

缺點：①靈敏度差； ② 三羥甲基氨基甲烷、一些氨基酸和EDTA等會干擾該反應。

3、酚試劑法

取6支試管分別標號，前5支試管分別加入不同濃度的標准蛋白溶液，最後一支試管加待測蛋白質溶液，不加標准蛋白溶液，在室溫下放置30分鍾，以未加蛋白質溶液的第一支試管作為空白對照，於650nm波長處測定各管中溶液的吸光度值。

優點：靈敏度高，對水溶性蛋白質含量的測定很有效。

缺點：①費時，要精確控制操作時間；②酚法試劑的配製比較繁瑣。

4、紫外吸收法

大多數蛋白質在280nm波長處有特徵的最大吸收，這是由於蛋白質中有酪氨酸，色氨酸和苯丙氨酸存在，可用於測定0.1～0.5mg/mL含量的蛋白質溶液。

取9支試管分別標號，前8支試管分別加入不同濃度的標准蛋白溶液，1號試管不加標准蛋白溶液，最後一支試管加待測蛋白質溶液，而不加標准蛋白溶液，每支試管液體總量通過加入蒸餾水補足而保持一致，將液體混合均勻，在280nm波長處進行比色，記錄吸光度值。

優點：簡便、靈敏、快速，不消耗樣品，測定後能回收。 

缺點：①測定蛋白質含量的准確度較差，專一性差； ②干擾物質多，若樣品中含有嘌呤、嘧啶及核酸等能吸收紫外光的物質，會出現較大的干擾。

5、考馬斯亮藍法

考馬斯亮藍顯色法的基本原理是根據蛋白質可與考馬斯亮藍G-250 定量結合。當考馬斯亮藍 G-250 與蛋白質結合後，其對可見光的最大吸收峰從 465nm 變為 595nm。

在考馬斯亮藍 G-250 過量且濃度恆定的情況下，當溶液中的蛋白質濃度不同時，就會有不同量的考馬斯亮藍 G-250 從吸收峰為 465nm 的形式轉變成吸收峰為 595nm 的形式，而且這種轉變有一定的數量關系。

一般情況，當溶液中的蛋白質濃度增加時，顯色液在 595nm 處的吸光度基本能保持線性增加，因此可以用考馬斯亮藍 G-250 顯色法來測定溶液中蛋白質的含量。

優點：靈敏度高，測定快速、簡便，干擾物質少，不受酚類、游離氨基酸和緩沖劑、絡合劑的影響，適合大量樣品的測定。

缺點：由於各種蛋白質中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同,因此用於不同蛋白質測定時有較大的偏差。

❽ 食品中蛋白質測定是怎麼操作的

食品中蛋白質的測定
1 原理
蛋白質是含氮的有機化合物.食品與硫酸和硫酸銅、硫酸鉀一同加熱消化,使蛋白質分解,分解的氨與硫酸結合生成硫酸銨.然後鹼化蒸餾使氨游離,用硼酸吸收後以硫酸或鹽酸標准滴定溶液滴定,根據酸的消耗量乘以換算系數,即為蛋白質的含量.
2 分析步驟
2.1 試樣處理：稱取0.20g～2.00g固定試樣或2.00g～5.00g半固體試樣或吸取10.00ml～25.00ml液體試樣（約相當氮30mg～40mg）,移入乾燥的100ml或500ml定氮瓶中,加入0.2g硫酸銅,6g硫酸鉀及20ml硫酸,稍搖勻後於瓶口放一小漏斗,將瓶以45°角斜支於有小孔的石棉網上.小心加熱,待內容物全部炭化,泡沫完全停止後,加強火力,並保持瓶內液體沸騰,至液體呈藍綠色澄清透明後,再繼續加熱0.5h～1h.取下放冷,小心加20ml水.放冷後,移入100ml容量瓶中.並用少量水洗定氮瓶,洗液並入容量瓶中,再加水至刻度,混勻備用.同時做試劑空白試驗.
2.2 測定：按上圖裝好定氮裝置,於水蒸氣發生瓶內裝水至三分之二處,加入數粒玻璃珠,加甲基紅指示液數滴及數毫升硫酸,以保持水呈酸性,用調壓器控制,加熱煮沸水蒸氣發生瓶內的水.2.3 向接收瓶內加入10ml硼酸溶液（20g/L）及1～2滴混合指示液,並使冷凝管的下端插入液面下,准確吸取10ml試樣處 理液由小漏洞流入反應室,並以10ml水洗滌小燒杯使流入反應室內,棒狀玻塞塞緊.將10ml氫氧化鈉溶液（400g/L）倒入小玻杯,提起玻塞使其緩緩流入反應室,立即將玻塞蓋緊.並加水於小玻杯以防漏氣.夾緊螺旋夾,開始蒸餾.蒸餾5min.移動接收瓶,液面離開冷凝管下端,再蒸餾1min.然後用少量水沖洗冷凝管下端外部.取下接收瓶.以硫酸或鹽酸標准滴定溶液（0.05mol/L）滴定至灰色或藍紫色為終點.同時准確吸取10ml.
試劑空白消化液按2.2操作.
3 結果計算
試樣中蛋白質的含量按下列公式計算.
式中：
X—試樣中蛋白質的含量,單位為克每百克或克每百毫升（g/100g或g/100ml）
V1—試樣消耗硫酸或鹽酸標准滴定液的體積,單位為毫升（ml） V2—試劑空白消耗硫酸或鹽酸標准滴定液的體積,單位為毫升.
（ml）
C—硫酸或鹽酸標准滴定液的濃度,單位為摩爾每升（mol/L） 0.0140—1.0ml
硫酸[c(1/2H2SO4)=1.000mol/L]或鹽酸
[c(HCL)=1.000mol/L]標准滴定溶液相當的氮的質量,單位為克（g）
m—試樣的質量或體積,單位為克或毫升（g或ml）
F—氮換算為蛋白質的系數,一般食物為6.25；乳製品為6.38；麵粉為5.70；玉米、高粱為6.24；花生為5.46；米為5.95；大豆及其製品為5.71；肉與肉製品為6.25；大麥、小米、燕麥、裸麥為5.83；芝麻、向日葵為5.30.計算結果保留三位有效數字.
4 精密度
在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差不得超過算數平均值的10%.
zttn037 2014-11-19

❾ 檢測食品中蛋白質含量的原理和方法是什麼

一、蛋白質的檢測原理：

基於食品中蛋白質含量與食品中氮含量的比例關系換算的。如乳中蛋白質與氮含量的比值為6.38，大豆中蛋白質與氮含量的比值為5.71，普通食品中蛋白質與氮含量的比值為6.25。因此是通過測定食品中氮含量後再根據換算系數得到食品中蛋白質含量。

二、蛋白質的檢測方法：

1、凱氏定氮法：樣品在高溫濃硫酸的消化作用下，將樣品中的有機氮轉化為無機銨，待消化液冷卻後，加入過量的鹼，使無機銨轉化為揮發性的氨，再將氨蒸出後，利用鹽酸標准溶液滴定，最後根據消耗的鹽酸標液體積推算樣品中的氮含量。

2、杜馬斯定氮法：樣品在高純氧中充分燃燒的過程中，將氮元素轉化為氮氣或氮氧化物，再經過高溫銅的還原，使所有的氮轉化為N2，然後利用熱導檢測器檢測N2的含量來推算樣品中氮含量。因此杜馬斯定氮法也稱為杜馬斯燃燒法或燃燒定氮法。

(9)食用菌蛋白質的測定方法擴展閱讀：

凱氏定氮法通過硫酸高溫消化，只能將有機氮轉化為無機銨，而對於硝態氮（如硝酸鹽、亞硝酸鹽）則不能轉化。因此凱氏定氮法適用於不含硝態氮的食品、農產品、化妝品、醫葯等。凱氏定氮法是由丹麥化學家凱道爾於1883年率先提出，由於設備要求簡單，自提出後便成為蛋白質測定的經典方法，廣泛運用於蛋白質檢測中。

杜馬斯燃燒法既能將有機氮轉化為N2,又能將無機的硝態氮轉化為N2。因此，杜馬斯的應用更為廣泛。杜馬斯定氮法是由法國化學家杜馬斯在1831年提出，雖然該法比凱氏定氮法早半個世紀提出，但由於當時設備條件難以滿足杜馬斯定氮法的要求，限制了其發展。

❿ 常用的蛋白質含量測定方法有哪些

①凱氏定氮法
原理：蛋白質平均含氮量為16%。當樣品與濃硫酸共熱，蛋白氮轉化為銨鹽，在強鹼性條件下將氨蒸出，用加有指示劑的硼酸吸收，最後用標准酸滴定硼酸，通過標准酸的用量即可求出蛋白質中的含氮量和蛋白質含量。
②雙縮脲法
原理：尿素在180℃下脫氨生成雙縮脲，在鹼性溶液中雙縮脲可與Cu2+形成穩定的紫紅色絡合物。蛋白質中的肽鍵實際上就是醯胺鍵，故多肽、蛋白質等都有雙縮脲（biuret）反應，產生藍色或紫色復合物。比色定蛋白質含量。
缺點：靈敏度低，樣品必須可溶，在大量糖類共存和含有脯氨酸的肽中顯色不好。其 精確度 較差 (數mg)，且會受樣品中 硫酸銨 及 Tris 的干擾，但 准確度 較高，不受蛋白質的種類影響。
③Folin酚法(Lowry)
Folin酚法是biuret 法的延伸，所用試劑由試劑甲和乙兩部分組成。試劑甲相當於雙縮脲試劑（鹼性銅試劑），試劑乙中含有磷鉬酸和磷鎢酸。
在鹼性條件下，蛋白質中的巰基和酚基等可將Cu2+還原成Cu+， Cu+能定量地與Folin－酚試劑反應生成藍色物質，600nm比色測定蛋白質含量。
靈敏度較高(約 0.1 mg)，但較麻煩，也會受 硫酸銨 及 硫醇化合物 的干擾。 步驟中各項試劑的混合，要特別注意均勻澈底，否則會有大誤差。
④紫外法
280nm光吸收法：利用Tyr在280nm在吸收進行測定。
280nm-260nm的吸收差法：若樣品液中有少量核酸共存按下式計算：
蛋白質濃度(mg/ml)=1.24E280-0.74E260 （280 260為角標）
⑤色素結合法（Bradford 法）
直接測定法：利用蛋白質與色素分子（Coomassie Brilliant Blue G-250）結合物的光吸收用分光光度法進行測定。
考馬斯亮蘭（CBG）染色法測定蛋白質含量。CBG 有點像指示劑，會在不同的酸鹼度下變色；在酸性下是茶色，在中性下為藍色。當 CBG接到蛋白質上去的時候，因為蛋白質會提供 CBG一個較為中性的環境，因此會變成藍色。當樣本中的蛋白質越多，吸到蛋白質上的CBG也多，藍色也會增強。因此，藍色的呈色強度，是與樣本中的蛋白質量成正比。
間接測定法：蛋白質與某些酸性或鹼性色素分子結合形成不溶性的鹽沉澱。用分光光度計測定未結合的色素，以每克樣品結合色素的量來表示蛋白質含量的多少。
⑥BCA法
BCA（Bicinchoninc acid procere，4,4』-二羧-2,2』-二喹啉）法與Lowry法相似，主要差別在鹼性溶液中，蛋白質使Cu2+轉變Cu+後，進一步以BCA 取代Folin試劑與Cu+結合產生深紫色，在波長562 nm有強的吸收。
它的優點在於鹼性溶液中BCA 比Folin試劑穩定，因此BCA與鹼性銅離子溶液結合的呈色反應只需一步驟即完成。靈敏度Lowry法相似。
本方法對於陰離子、非離子性及二性離子的清潔劑和尿素較具容忍度，較不受干擾，但會受還原糖 及EDTA的干擾。
⑦膠體金測定法
膠體金(colloidal gold)是氯金酸(chloroauric acid)的水溶膠，呈洋紅色，具有高電子密度，並能與多種生物大分子結合。
膠體金是一種帶負電荷的疏水膠體遇蛋白質轉變為藍色，顏色的改變與蛋白質有定量關系，可用於蛋白質的定量測定。
⑧其他方法
有些蛋白質含有特殊的 非蛋白質基團，如 過氧化物酶含有 亞鐵血紅素基團，可測 403 nm 波長的吸光來定量之。 含特殊金屬的酶 (如鎘)，則可追蹤該金屬。