常用凝血酶原使用方法

㈠ 凝血酶時間測定和凝血酶原時間測定的區別

凝血酶原時間（PT）測定和膽鹼酯酶（ChE）活力檢測各有什麼臨床意義？

凝血酶原是由肝臟合成的一種蛋白質。凝血酶原試驗是一種了解血液凝固情況的試驗，它可以反映肝臟的凝血功能。凝血酶原時間（PT）和凝血因子Ⅰ、Ⅴ、Ⅶ和Ⅹ有關，而這些因子也均在肝臟合成。凝血酶原時間的正常值為11～15秒（奎氏法）。當肝臟出現病變、肝功能不良、上述凝血因子因合成障礙而含量降低時，即可引起凝血酶原時間延長而發生凝血障礙。如重型肝炎時，凝血酶原時間明顯延長，患者容易出血，預後較差；慢性活動性肝炎與肝硬變時，凝血酶原時間可輕度延長；肝外阻塞而無明顯肝細胞損害時，凝血酶原時間可正常。長期肝外阻塞、膽汁淤積、影響維生素K的吸收時，也可導致凝血酶原時間延長；若給患者注射維生素K時，則凝血酶原時間可恢復正常。

此外, 由於凝血酶原半衰期短，在急性重型肝炎發病後的短時間內即有凝血酶原時間的改變，故測定凝血酶原時間，對重型肝炎的診斷，病情和預後的判定，具有重要的臨床意義。

血清膽鹼酯酶，又稱「假性」或「非特異性」膽鹼酯酶，是由肝臟合成的一種特異性較差的，既可作用於乙醯膽鹼，又能作用於其他膽鹼酯類的酶。其正常值為0.80～1.00或40單位以上。

由於血清膽鹼酯酶的半衰期短，所以它是肝內損害時的一種極為敏感的、反映肝臟酶合成障礙的試驗。其活性降低的程度往往與肝病的嚴重程度相一致。如重型肝炎患者膽鹼酯酶活性值一般都較正常降低，且降低程度與病情輕重密切相關；約80％的病人，其血清膽鹼酯酶活性可降至正常值的60％，重危病人甚至下降至10％以下，此類患者多很快死亡。因此，血清膽鹼酯酶活性的測定，有助於對重型肝炎的診斷及對病情和預後的判定。此外，重度慢性肝炎和晚期肝硬變患者，血清膽鹼酯酶亦有不同程度的降低。

血栓與止血實驗室檢查的臨床重要性與日俱增，檢驗內容不斷擴大，工作量也日益增多；不斷出現的方法更新和試劑商品化、操作自動化，改變了以往靠手工操作、自配試劑、工作效率低的局面。與此同時，方法標准化和質量控制也顯得格外重要。然而，由於血栓與止血試驗的特殊性 ......

有關（凝血酶原時間（PT）、活化的部分凝血活酶時間（APTT）和纖維蛋白原(FIB)測定等三項實驗）

摘要：對ICSH、ICTH或美國國家臨床生物化學委員會（NCCLS）等國際以文件形式公布的有關凝血酶原時間（PT）、活化的部分凝血活酶時間（APTT）和纖維蛋白原測定等三項實驗的標准化及其重要性作了簡單敘述。

關鍵詞： 凝血酶原時間 活化的部分凝血活酶時間 纖維蛋白原 標准化

由於血栓與止血實驗的特殊性，因此迄今僅有凝血酶原時間（prothrombin time,PT）、活化的部分凝血酶時間（activated partial thromboplastin time,APTT）和纖維蛋白原（fibrinogen,Fg）等三項實驗有了標准化的試劑（如PT）、標准品（如Fg）、質控品和統一的報告形式等；其他，如血小板功能、抗凝因子和纖溶成分等檢測尚缺乏成熟的標准化方案。本文僅就經國際血液學標准化委員會（ICSH）國際血栓與止血委員會（ICTH）或美國國家臨床生物化學標准委員會（NCCLS）等國際組織以文件形式公布的有關PT、APTT和Fg三項實驗的標准化問題作一簡介。

一、標准化和質量控制的重要性
所謂血栓與止血檢測方法的標准化和質量控制，是指採用統計學原理，運用規范的物理、化學、生物學的方法，對血栓與止血實驗的技術、操作、儀器、試劑和標本等項的質量水平，進行合理的管理、檢測和評價，以標准化和質量控制來堵絕誤差，提高實驗的精密度、准確性和可靠性。標准化和質量控制的重要性在於：

1、為臨床診治提供可靠的依據：實驗結果的可靠性是臨床診治疾病的重要依據和條件。實驗結果若為假陽性就會造成誤診、誤治；若為假陰性就會造成漏診、漏治；實驗結果偏高或偏低都會影響患者的診斷、鑒別診斷以及影響醫師對病情和療效的判斷。

2、提高血栓與止血基礎研究的效率和價值：血栓與止血基礎研究的形式就是進行各種實驗。實驗可靠性好，就能揭示血栓與止血的客觀規律，甚至可帶來重大理論突破及（或）社會、經濟效益；若實驗可靠性差或有錯誤，則會造成假象或錯誤理論。

3、有助於人群健康調查和建立血液學參數的正常范圍：為了解一定人群的健康水平，建立具有廣泛意義的血液學參考值的范圍須進行較大規模人群的健康調查，健康調查必須要有實驗結果的可靠性作保障，不然會導致不準確或錯誤的結果，故質量控制對群體醫學也有重要意義。

總之，血栓與止血實驗室的質量控制，從一定程度上反映一個國家，一個地區，一個單位血栓與止血醫療水平和研究水平的高低。因此，應倍加重視。

二、 凝血酶原時間（PT）的標准化
自1935年Quick創建凝血酶原時間（prothrombin time,PT）測定方法以來，迄今仍然 是檢查外源凝血系統諸因子及相關抑制物的重要篩選試驗，PT也是目前口服抗凝劑治療的主要手段。但是，PT測定受多種因素影響，必須對它進行標准化和質量控制，以提高PT檢測的精密度、准確度和可靠性。

（一）凝血酶原時間（PT）的標准化問題

1、組織凝血活酶標准化：應用的國際參考品（international reference preparation IRP），有下列幾種：
（1）單一組織凝血活酶國際參考品：是一種組織提取物的生理鹽水懸液制劑。WHO在英國使用的統一標準的"英國比較凝血活酶"（British comparative thromboplastin,BCT）為基礎，制備WHO的原級凝血活酶參考品（primary reference preparation），如人腦組織凝血活酶，編號67/40。同時又以BCT67/40為基礎標化了次級參考品（secondary reference preparation）。如牛腦組織凝血活酶，編號為68/434；兔腦為70/178。後來WHO還公布了一些次級組織凝血活酶參考品，如人腦或胎盤制劑，如BCT/253；兔或兔、猴組織混合制劑，如RBT/79等。

（2）復合組織凝血活酶國際參考品：它是組織提取物的生理鹽水懸液中加入適量的纖維蛋白原、因子V 和氯化鈣組成的制劑，如牛組織凝血活酶OBT/79等。

目前世界各國都廣泛應用WHO的這些參考品來校正本國或本地區制備或生產的組織凝血活酶參考物。這樣使世界范圍內有了多種組織凝血活酶參考品。

2、組織凝血活酶工作制劑（working preparation,WP）的國際敏感度指數（international sensitivity index,ISI）
由於不同組織凝血活酶對凝血因子的敏感性不同。為了使不同敏感性的組織凝血活酶在檢測PT中能得到同樣的結果，必須要制定一個共同的敏感性指標。這就需要通過自製的試劑與國際參考品（IRP）進行比較，然後得出一個校正值。具體的方法如下：

（1）用國際參考品（IRP）標定國家、地區或本實驗室的參考制劑（reference preparation,RP）。
（2）用實驗室參考制劑（RP）標定工作制劑（WP）。

1）標本：2份正常人血漿和6份口服抗凝劑達6周的患者血漿，連收10天，共60份標本。

2）測定：按一定順序進行測定，每份標本重復測定2次。將PT測定的結果（秒）點在雙 對數坐標紙上，橫坐標代表WP的PT測定結果，縱坐標代表RP的PT測定結果，畫出最佳的各點擬合直線，得出定標曲線，通過WP/RP比值，或回歸方程求出斜率b。

3）計算WP的ISI值：ISI值愈接近於1.0，表明組織凝血活酶試劑愈敏感，因此，生產和出售組織凝血活酶試劑的廠商，必須在產品上標有ISI。

3、PT測定結果的報告方式：理論上，無論何種組織凝血活酶，只要標有ISI，就可與國際參考製品進行對比校正，並可用同一種計量單位報告。1985年ICSH和ICTH推薦以PT監測口服抗凝劑的報告方式是國際正常化比率（international normalizde ratio,INR）。

INR的計算公式如下： 在用INR後，各種敏感性不同的組織凝血活酶均可得到相同的INR值。

4、儀器特有有ISI：上述PT根據報告方式適用於手工法（試管傾斜法）測定PT。但是手工法與儀器法以及儀器法與儀器法測定PT的INR之間，仍有差異。研究表明，在ACL、Cobas Fibro和Coaga-Pet三台自動化儀器上，使用同一種ISI為1.12的Thromborel S試劑，測定PT的均值分別為10.7秒、12.1秒和11.1秒。但若以同一ISI值計算INR，得出的數值也存在著不同程度的差異。為此，專家們提出建議：同一組織凝血活酶試劑用於不同儀器時，可用所謂的"儀器特有的ISI"（instrument specific ISIs）或稱區域性ISI（Local ISI）來計算INR。每台儀器所使用的凝血活酶試劑都應該有特定的ISI值，重新標定ISI值的做法是購買標有INR的凍干血漿，然後在自己的儀器上再標定所使用凝血活酶試劑的ISI值，這樣才可使病人的INR具有可比性。

（二）凝血酶原時間（PT）的推薦方法

[原理]
將組織凝血活酶（主要含組織因子和脂質）和鈣離子，加到枸櫞酸抗凝血漿中，在37℃保溫，測定血漿凝固時間，即為PT。PT主要用於篩選檢測外源凝血系統的因子Ⅶ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅹ和相關因子的抑制物的試驗。

[標本來集和處理]
1、標本採集：用硅化或塑料注射器抽取空腹靜脈血，按9:1比例加入含0.109mol/L的枸櫞酸鈉抗凝劑的硅化或塑料試管中，輕輕混合均勻。
2、標本處理：以2000～2500g，離心15分鍾，分離乏血小板血漿，並在24小時內完成試驗。
3、正常對照血漿：選擇正常健康男性和女性各lO名以上，年齡在18～45歲。但不能是妊娠、月經期、哺乳期和口服避孕葯的婦女，採取的血漿冰凍乾燥保存或-80℃保存。

[試劑]
1、抗凝劑：109mmol/L枸櫞酸鈉液（相當於含二分子結晶水的枸櫞酸鈉32g/L）。
2、凝血活酶試劑：市售商品，應標有ISI、批號及有效期。凍干者應按說明書加指定的緩沖稀釋劑復溶。
3、氯化鈣（CaCl2）溶液：為25mmol/L。（目前有些商品試劑已將凝血活酶液與氯化鈣液混合好，可不必另配CaCl2液）。
4、質控物：正常及異常對照血漿
5、配製試劑用水必須符合1級純水的標准。

[儀器]
1、手工法：秒錶，保持37℃±1℃的恆溫水浴箱或電熱塊。水深能浸試管3cm以上，表面無劃痕的10×mm拭管。經標準的0.1mL移液管。經校正的秒錶。
2、儀器法：各種自動或半自動血凝儀，嚴格按說明書操作。

[操作步驟]
1、手工法
（1）測定溫度36.5～38.5℃，上述各試劑及被測血漿，均應預溫至此一溫度，但凝血活酶試劑預溫不可超過30分鍾，血漿預溫一般不宜超過10分鍾。

（2）所用試管及加樣器等接觸血漿的器具均為塑料或硅化玻璃管。

（3）吸取枸櫞酸抗凝血漿0.1mL，加入一小試管中：加入凝血活酶試劑0.1mL混勻後置37℃水浴中。再加入25mmol/L CaCl2液0.1mL，（也可先將凝血活酶試劑與CaCl2溶液等量混合，加入0.2mL）。立即混勻並開動秒錶：試管仍浸於水浴中，至約10秒鍾時，自水浴中取出，在紗布上迅速擦去試管外水滴，在明亮處不斷傾斜試管，在流動狀態下觀察有無纖維蛋白形成。一旦見到纖維蛋白（同時將出現液體流動減慢），立即停表，記錄時間。每次測定二管，按平均數報告。本試驗的最後混合液其pH應為7.2～7.3，大部分商品凝血活酶試劑均用含緩沖液的溶液配製。

（4）每批均同時做正常和異常對照，方法應與測定標本完全相同。

[報告方式]
1、以PT的秒（S）數報告（最接近的0.5秒）
2、以患者血漿（S）/正常對照PT（S）的比率（PRT）報告。
3、在口服華法令類抗凝葯物治療監控時，應報告國際正常化比率（INR）。大部分自動化儀器可根據所測的PTR和凝血活酶試劑的ISI，自動算出INR。手工法可根據下列公式，用一計算器直接計算：

Poller設計了一個簡便的列線圖，在取得PTR和ISI值後，即可從圖上直接查找出INR值，十分便利，國內已有介紹。
ICSH規定，不再用稀釋曲線或百分比（活動度）報告。

[參考值]
因儀器/試劑不同，會得出不同結果，故很難統一規定參考值。各實驗室應根據自己的儀器、試劑等條件，自行測定一批健康人，建立參考值。此後至少每年或當條件有變化時，根據新的條件，重新建立。參考值PT測定的一切條件均應與患者血漿PT測定相同（包括采血、容器、抗凝劑等）。健康供血者應選至少20個18～55歲的男性和非妊娠、月經期女性，不可服葯，在平靜休息狀態采血、以減少個體差異（有條件時，可測一批老年人和小兒，分開統計）。同時應分開幾天采血和測定，以減少天間差異。測定結果經統計學處理，計算標准差：以兩個標准差（2SD）或95%可信限作為參考范圍。對於三個標准差是正常還是異常，需結合具體情況進行評估。從統計學上講，其中有些人是正常的。用以上標准，病人（PT異常）則很少會遺漏。

三、活化部分凝血活酶時間(APTT)的標准化
（一）活化部分凝血活酶時間(APTT)的標准化
APTT是檢測內源凝血系統諸凝血因子缺陷和相關抑制物的篩選試驗，也是當前用於凝血因子、肝素抗凝治療以及狼瘡抗凝物質檢測的主要手段。
與PT測定一樣，不同的部分凝血活酶、不同的活化劑和不同的激活時間對各種凝血因子缺陷、對肝素和對狼瘡抗凝物質的敏感性相差很大。例如，檢測APTT的試劑中，所用活化劑（白陶土、硅藻土、鞣花酸）不同，他們對檢測肝素、狼瘡抗凝物質和因子Ⅷ、Ⅸ的敏感性不同。

迄今，ICSH和ICTH尚未有APTT檢測方法標准化或試劑標准化的可行方案問世，僅NCCLS於1992年，提出一個編號為H29-T的暫行方案。

（二）活化的部分凝血活酶時間（APTT）的推薦方法

[原理]
將一種磷脂和激活劑加到血漿中，經過孵育後，加入適當濃度的鈣離子。其纖維蛋白凝塊形成的時間（以秒計），即為APTT。本法主要用於過篩測定內源途徑凝血因子的缺陷，如因子Ⅶ、Ⅺ、Ⅷ、Ⅸ、激肽釋放酶原（PK）、高分子量激肽原（HMWK）以及纖維蛋白原等。同時也用於上述因子的抑制物測定、肝素治療的監測以及狼瘡抗凝因子的檢查。

[儀器]
本實驗所用儀器、設備（包括采血、貯血容器、加樣裝置和標本的處理等）以及對它們的要求完全與PT相同。PT所用自動化儀器同樣適於本實驗。

[試劑]
1、部分凝血活酶試劑：由商品供應。一般已與檄活劑按比例配在一起（或分開配製）常用的激活劑由硅藻土（商品名Celite）、白陶土、二氧化硅微粒、鞣化酸（ellagic acid）或其它可用的激活劑，由廠方配套供應。
APTT試劑/儀器結合，應能使因子Ⅷ、Ⅸ或Ⅺ活性低於0.3μ/mL（或＜30%）的血漿，出現異常延長的結果。
2、氯化鈣溶液（25mmol/L）以及其它試劑與PT所用者相同。

[操作步驟]
1、樣品的採取、貯存、輸送與PT測定相同。注意，應用清潔的塑料或硅化玻璃采血器采血及貯血。
2、標本（去血小板的血漿）的制備與PT相同。注意、應用去血小板血漿測定。
3、水浴箱或電熱板的溫度為37℃±1℃，要經常檢查是否正確。
4、接觸活化時間：加激活劑活化因子Ⅻ的時間要保持一致；各儀器和試劑生產廠家的規定可能不一樣，應嚴格按說明書要求進行。手工操作時，應用秒錶或類似的定時裝置計時。
5、操作：預溫（不超過30分鍾）APTT試劑一份與預溫（不超過10分鍾）的侍測血漿一份混合，立即開動秒錶計時；至規定的接觸活化時間終點時，加人預溫37℃的CaCl2液一份，混勻，同時開動秒錶。至出現血漿凝固時，停表，記錄血漿凝固時間（以秒計）。手工測定時應同時測定兩管，按平均數報告。一些精密度已有很大改進的自動或半自動凝血儀，如果有適當的質控標准也可只測定一次。應同時測定正常和異常對照血漿。

[參考值]參照PT

[特殊解釋]
1、對肝素的敏感性：APTT常用於肝素治療的監測，通常以患者APTT與正常血漿APTT的比率在1.5～2.5作為治療控制范圍：但不同的試劑/儀器系統對肝素的敏感性不同。其試劑/儀器系統對肝素的敏感性可進行測定。體外的敏感性（in vitro sensitlvity）是指將臨床在使用的同類型釣肝素按其治療濃度，加到正常血漿中，測定APTT。體外敏感性與體內敏感性（in vivo sensitivity）不等同，但可作參考。
2、浪瘡抗凝因子：狼瘡抗凝因子是一種抗磷脂的自身抗體，由於它抗凝血的重要成分磷脂，故能幹擾凝血。血中如存在狼瘡抗凝因子，APTT將延長。但APTT試劑對狼瘡抗疑因子的敏感性有很大差別，試劑製造廠家應提供足夠的說明，有關的國家機構也可提供對狼瘡抗凝因子的資抖。但要知道，病人個體之間也有很大差異，沒有一種試劑能測出所有狼瘡抗凝因子。

四、纖維蛋白原測定（Fg）的標准化
（一）纖維蛋白原測定（Fg）的標准化問題
纖維蛋白原（死）由肝合成，存在於血漿和體液中，其結構和功能基本已搞清，但迄今仍無理想的臨床檢測方法；文獻報道的測定方法多至10餘種，有的精密度、准確信較好，但過於復雜、煩瑣；有的雖然簡便、快速，但精密度、准確性較差。
1992年，英國國家生物標准及控制研究所（NIBSC）、研究完成了一個纖維蛋白原標准品，編號為89/644，向WHO的生物標准專家委員會（ECBS）推薦，[15]並被ECBC批准為國際參考品（IRP）。從此，各國均引進這一標准品來標化本國或廠家生產的次極標准品（我國衛生部臨床檢驗中心亦已在引進）。使纖維蛋白原測定的標准化工作，走出了關鍵的一步。因此根據調查，各家標准品纖維蛋白原含量差別很大。

（二）纖維蛋白原（Fg）測定的推薦方法
各家用IRP來標化自己的標准時，推薦採用Jacobsson的改良法，現將該法介紹如下。

[試劑]
1、緩沖液：Na2O·2H2O 0.882g；KH2PO4 2.77gl升，此為貯存緩沖液；將貯存緩沖液l份，加生理鹽水2份即為應用緩沖液，pH為6.35。
2、生理鹽水：0.15mol/L
3、人或牛凝血酶：500IU/mL，生理鹽水溶液。
4、凝塊溶解劑：尿素400g溶於少量蒸溜水中，200mL 1.Omol/L NaOH，再加水至l升。

[操作步驟]
將纖維蛋白原凍干（標准）品（源於89/644）加lmL蒸餾水復溶，加到含有2mL應用緩沖液的有機玻璃淺盤或其他容器中，再加入凝血酶液50μL，迅速混勻，在室溫中靜制置2小時。將容器倒扣於吸水的布上（其下可墊吸水紙），再用適當物質（加濾紙）將凝塊吸干。將凝塊取下，置於5OmL生理鹽水中洗滌2次，每次洗滌後均應將凝塊吸干（可用玻璃擠壓凝塊），盡量除去含於凝塊中的液體，以免液體中的其它血漿蛋白殘留。必要時可在清潔棉布上擠壓。
小心將凝塊加人含凝塊溶解劑7.5mL的容器中，搖勻，直至凝塊完全溶解。倒人光徑為1cm的比色杯中，以凝塊溶解劑為空白，在280nm和315nm波長讀取吸光度（A）。

（三）適用的纖維蛋白原（Fg）測定（Clauss法）

[原理]
將凝血酶加到血漿中，使纖維蛋白原變成纖維蛋白，血漿便出現凝固。在有足量的凝血酶時，與不同含量的纖維蛋白原作用，其出現血漿凝固的時間與纖維蛋白原含量呈負相關。

[試劑]
1、牛凝血酶l00NIHU/mL
2、纖維蛋白原標准品（IRP次級標准）
3、緩沖液（下列兩種任選一種）：
（1）巴比妥緩沖液（PH7.5）；巴比妥2.5g，巴比妥鈉2.75g，璐氯化鈉7.3g溶於750mL去離子水中，校正至PH7.5，加水至1L。
（2）咪唑（Imidazole，或Glyoxaline）緩沖液：咪唑3.4g（0.05mol/L），氯化鈉5.85g，加於約500mL水中；加O.1mol/L鹽酸186mL，調PH至7.3-7.4，最後加蒸餾水至1升。

[操作步驟]
1、手工法
（1）用上述緩沖液先將標准品稀釋成0.8，1.6，2.4，和4.0g/L纖維蛋白原濃度，各濃度再用緩沖液作1:10稀釋。
（2）患者血漿及質控物用緩沖液作1:10稀釋。
（3）將含100NIHU/mL，牛凝血酶，混勻後室溫保存。如用儀器法測定，則用100NIHU/mL，牛凝血酶，不必稀釋。
（4）在一試管中，加稀釋血漿0.2mL，置37℃水浴中4分鍾。
（5）加入預溫37℃的lOONIHU/mL凝血酶液O.2mL，搖勻並立即開動秒錶，不斷觀察凝固時間。至出現凝固時停表。
（6）每份標本測定兩次，求平均數。同時測定各標准管和對照（質控）管，方法相同，准確記錄時間。
（7）計算：用雙對數紙作圖，以凝固時間為縱坐際、纖維蛋白原濃度為橫坐標，將各相應濃度的標准管對凝固時間，在圖上標出相應的點並連成直線，製成標准曲線。然後根據患者和質控血漿所測得的凝固時間。在圖上查到纖維蛋白原含量。
如血漿纖維蛋白原含量大於4g/L，應稀釋血漿後重測，結果乘以稀釋倍數。如血漿纖維蛋白原含量低於O.8g/L，需將原血漿改為1:2或1:5稀釋，在標准曲線上查得結果後除以5或除以2。
2.儀器法：本法可用自動或半自動凝血儀按凝血酶時間（TT）測定法測定。可自動列印出結果。一般儀器法比手工法精密度高。

㈡ 凝血酶原時間(PT) 檢測方法及使用的設備和試劑盒名稱

這個試劑盒有國產的也有進口的，國產的建議用南京建成生物公司的，很便宜，技術支持也比較到位。
貨號：F007 凝血酶原時間(PT)測試盒(2ml*10瓶) 360.00元
也有進口的。比如Human Prothrombin,PT ELISA Kit，RB的，Abnova的。這些都要在生物技術公司代購。
還有一種解決方法是找生物公司幫你們做，也是可以的。
【產品名稱】 凝血酶原時間檢測試劑盒（凝固法）
【包裝規格】 PT試劑：2.0ml×10； PT試劑溶解液：5.0ml×4
【預期用途】 本試劑盒用於體外檢測人血漿凝血酶原時間（PT）,以定性篩查外源凝血系統情況。
【主要組成成分】 PT試劑：兔腦粉鹽水抽提物（凍干品）； PT試劑溶解液：氯化鈣溶液。 【儲存條件及有效期】 1.本試劑盒2℃～8℃保存有效期為12個月； 2.復溶試劑2℃～8℃保存有效期為7天； 3.復溶試劑37℃保溫穩定8小時。
【適用儀器】 手工法或半自動血凝分析儀。
【樣本要求】 靜脈采血，1份抗凝劑（0.109mol/L枸櫞酸三鈉）採集9份全血 ，輕輕顛倒混勻，以2700g（離心半徑18cm約3500轉/分）離心10分鍾，分離血漿待測。如該血漿不能立即分析，應將其密封後於2℃～8℃保存，最長不超過4小時；或立即置－20℃以下凍存不超過一個月；-70℃以下凍存，不超過半年，用時37℃融化，避免反復凍融。
【檢驗方法】 試劑准備： 1.每瓶PT試劑准確加入2.0ml PT試劑溶解液，輕搖溶解； 2.取適量復溶後PT試劑，置37℃保溫。 實驗步驟： 1.取待測血漿或正常凝血質控血漿※0.1ml，37℃保溫3分鍾； 2.迅速加入0.2ml已預溫至37℃的PT試劑，混勻，立即計時，記錄其凝固時間，即為凝血酶原時間（PT）。） 如採用血凝分析儀測定，請參考儀器使用說明書。 ※ 該正常凝血質控血漿不包含在此試劑盒內。 結果計算： 1.凝血酶原時間秒值（PTs）：即測得的凝固時間（正常或異常血漿樣本PTs） 被檢血漿PTs 2. PT比值（PTR）= ────────── 正常凝血質控血漿PTs 3. 國際標准化比值（INR）= PTRISI
【參考范圍】 1.以PTs值表示：10～15秒。 2.以PTR表示：0.95～1.24。 3 監測口服抗凝劑，以INR表示。 註：上值僅供參考，建議各實驗室建立自己的參考值范圍。試劑、儀器操作、血樣收集技術或抗凝劑改變時，都應重新建立新的參考值范圍。
【檢驗結果的解釋】 1.與正常凝血質控血漿PTs值比較，超過3秒以上為異常。 2.PTR值超出0.95～1.24的范圍為異常。 3.監測口服抗凝劑，以INR表示。
【注意事項】 1.本品僅用於體外診斷。 2.抽血要順利，抗凝要充分，不能有血凝塊；分離血漿時，務必去除血小板。 3.保溫溫度控制在37±0.5℃，過高或過低均會影響測定結果。 4.樣品收集時不宜用EDTA、肝素或草酸鹽作抗凝劑。 5.手工測定時，觀察凝固的光線要充足。 6.抗凝劑的比例應准確，如果血球壓積小於20%或大於55%，則需調整血樣與抗凝劑的比例，方法是：0.00185×全血毫升數×（100－壓積）= 抗凝劑毫升數。 7.防止試劑被任何痕跡量的血漿污染。 8.不要測試質量可疑的樣品血漿。因為很小的血漿凝固會使凝固時間顯著縮短（所有凝血因子已被激活），而廣泛凝固又會因凝血因子和纖維蛋白原的消耗延長凝固時間。 9.凝血酶抑制劑出現在樣品中可能導致該樣品凝血酶原時間延長。 10.使用者若不慎將試劑濺在皮膚或眼睛上，應立即用水沖洗。

㈢ 促凝和抗凝的方法各有哪先

影響凝血功能的因素主要包括血管因素以及血液成分因素，凝血過程 1.三個階段（1）凝血酶原激活物生成 （2）凝血酶原被激活生成凝血酶 （3）纖維蛋白原在凝血酶的作用下生成纖維蛋白 兩個途徑 （1）內源性凝血途徑 參與凝血的全部凝血因子都在血管內。啟動因子為XII，因子Xa、V、Ca2+和PF3共同組成凝血酶原激活物。 （2）外源性凝血途徑 參與凝血的始動因子為組織因子（Ⅲ）來自組織。啟動因子為Ⅲ，因子Ⅲ、Ⅶ和 Ca2+組成復合物，激活因子X，其後反應過程同內源行凝血途徑。 影響血液凝固的因素 1.一般因素（1）接觸面的光滑程度：接觸粗糙面加速血液的凝固。 （2）溫度：一定范圍內溫度升高加速血液凝固。 （3）Ca2+濃度：濃度增高，血液凝固速度增快。 影響血液凝固的原因是比較復雜的，但主要因素是血小板，如果一個人的血小板偏低，他的血液凝固所需要的時間會比正常的人會長一點。如果說一個人沒有血小板他的血是不會凝固的。至於你所說的你身體有傷口，很難癒合，這個原因也是比較復雜的，比如說你會吸煙，喝酒，或者你的血糖偏高等，都可以影響你的傷口癒合。所以，一個人有一個好的生活習慣是很重要的，他對健康和影響很大喲。 影響血液凝固的原因是缺乏鈣元素，凝血酶原--具有活性的凝血酶，需要鈣來激活。

㈣ 怎樣記住14個凝血因子

目前公認的凝血因子有14個，按羅馬數字命名的有12個，尚有高分子量激肽原（HMWK）和激肽釋放酶原（PK）。因子VI是因子V的活化形式，已廢用；除外因子IV為鈣離子，其餘均為蛋白質；除因子III存在於血管內皮組織，其餘均存在於血漿中，且多在肝臟中合成。

下面是主要的凝血因子的中文名

I：纖維蛋白原

II：凝血酶原；

III：組織因子；

IV：鈣離子；

V：易變因子；

VII：前轉變素；

VIII：抗血友病因子A；

IX：抗血友病因子B；

X：stuart因子；

XI：血漿凝血激酶前質；

XII：接觸因子；

XIII：纖維蛋白穩定因子；

HK：高分子量激肽原；

PK：激肽釋放酶原

1、I、II、III、IV因子常涉及，怎麼進行記憶呢？

簡記方法： 1纖2凝3組4鈣（先擰足鈣）；

成語：一馬當先，故I是纖維蛋白原。

2、維生素K依賴的凝血因子：2，7，9，10

簡記方法： 二七九十（兒去就食）。

3、對凝血酶敏感的凝血因子：1，5，8，13

簡記方法：我要八十三（我要活到83）。

4、甲型血友病：缺VIII因子，乙型血友病：缺IX因子，丙型血友病：缺XI因子。

簡記方法：血友病，甲乙丙，酒吧里打110。

5、凝血瀑布

簡記方法：

內皮十二十一九

組織加七外源走

八C P3 十激活

鈣五P3 酶共有

十三激活有作用

分解纖原止血久！凝血的相關知識在檢驗里算是一個比較難和雜的內容，但是它確實一個很重要而且使用很頻繁的知識，所以這需要我們重點去學習。無論是平時工作，還是職稱考試都很常常考察凝血的內容，因為它比較雜，我們常常用一些很巧妙的方法去記憶，比如聯想、口訣等等。這里閑魚給大家分享一些記憶方法，閑魚職稱考試也有這么記憶過，還是很不錯的，記住了基本上就不會忘，大家一起學習學習吧。

參與外源性凝血的凝血因子有：III、VII

參與內源性凝血的凝血因子有：XII、XI、VIII、IX

共同參與的凝血因子有：I、II、XIII、V、X

總結圖：

拓展知識：

目前公認的凝血因子有14個，按羅馬數字命名的有12個，尚有高分子量激肽原（HMWK）和激肽釋放酶原（PK）。因子VI是因子V的活化形式，已廢用；除外因子IV為鈣離子，其餘均為蛋白質；除因子III存在於血管內皮組織，其餘均存在於血漿中，且多在肝臟中合成。

下面是主要的凝血因子的中文名

II：凝血酶原；

III：組織因子；

IV：鈣離子；

V：易變因子；

VII：前轉變素；

VIII：抗血友病因子A；

IX：抗血友病因子B；

X：stuart因子；

XI：血漿凝血激酶前質；

XII：接觸因子；

XIII：纖維蛋白穩定因子；

HK：高分子量激肽原；

PK：激肽釋放酶原

凝血中一些相似難以區分的幾組：

一、I、II、III、IV因子常涉及，怎麼進行記憶呢？

記憶方法： 1先2凝3組4鈣，成語：一馬當先，故I是纖維蛋白原。

二、甲型血友病：缺VIII因子，乙型血友病：缺IX因子，丙型血友病：缺XI因子。

記憶方法：8甲9乙11丙。酒吧（9，8）里打110，數字按大小順序是甲乙丙。

三、維生素K依賴的凝血因子：2，7，9，10

按2 7=9，9後面是10來記憶的，但後面還有很多因子，怎麼把這個和維生素K記在一起呢？大家都知道有個抗凝劑叫EDTA-K2，所以依賴維生素K的凝血因子從2開始。

四、對凝血酶敏感的凝血因子：1，5，8，13

13姨寧（凝）靜地說：「我（5）要（1）發（8）財」 。13姨是受之前文章作者西瓜團子的影響，在此表示感謝。

五、接觸激活因子：11，12，激肽釋放酶（PK）， HMWK：高分子量激肽原

記憶方法：11，12 Happy（HMWK）（PK）地接觸在一起。

㈤ 如何提取凝血酶

採用檸檬酸鋇吸附法從豬血漿中提取得到的凝血酶原純度更高。
檸檬酸鋇吸附法 1。提取：血漿中加入溶液溶液1.0 mol/L BaCl2溶液，體積比為10∶1，4℃攪拌30 min，靜置30 min後，3 000 r/min離心30 min，棄上清。沉澱用溶液0.02 mol/L Tris，0.15 mol/L BaCl2，0.10 mol/L NaCl，pH7.4； 洗滌，3 000 r/min離心15 min，棄上清。重復洗3次。沉澱用溶液0.02 mol/L Tris， 0.10 mol/L NaCl，0.20 mol/L Na2EDTA，pH7.4解吸附，4℃攪拌0.5～1h，3 000 r/min離心15 min取上清。上清液用溶液0.02 mol/L Tris，0.15 mol/L NaCl，pH6.5.於4℃透析過夜。3 000 r/min離心15 min取上清液，即為凝血酶原溶液。
2 凝血酶原激活 用2 % Na2CO3溶液將凝血酶原溶液的pH調至7.1，加入0.25 mol/L CaCl2溶液，使Ca2+終濃度為0.03 mol/L，再用2 % Na2CO3溶液將凝血酶原溶液的pH調至7.1，室溫靜置2 h，過濾即得凝血酶溶液。

㈥ 低凝血酶原血症的治療

食物中的維生素K主要是K1和K2，均為脂溶性，在膽汁的參與下，由腸內吸收，腸道細菌特別是大腸桿菌能合成維生素K2。K3和K4系水溶性人工合成品，口服吸收不需膽汁或膽鹽存在，但副作用大。K3對新生兒有溶血作用，可致高膽紅素血症及核黃疸。故新生兒宜用維生素K1，治療量為每次肌注1mg，可重復數次，或靜脈緩慢注射。口服劑量應加倍。
用法用量 1、低凝血酶原血症：肌內或深部皮下注射，每次10mg，每日1－2次，24 小時內總量不超過40mg。 2、預防新生兒出血：可於分娩前12－24小時給母親肌注或緩慢靜注2－5mg。也可在新生兒出生後肌內或皮下注射0.5-1mg，8小時後可重復。 3、本品用於重症患者靜注時，給葯速度不應超過1mg/分。
不良反應 偶見過敏反應。靜注過快，超過5mg/分，可引起面部潮紅、出汗、支氣管痙攣、心動過速、低血壓等，曾有快速靜脈注射致死的報道。肌注可引起局部紅腫和疼痛。新生兒應用本品後可能出現高膽紅素血症，黃疸和溶血性貧血。
禁忌症 嚴重肝臟疾患或肝功不良者禁用。
遇出血過多時，應輸新鮮血10～30ml/kg/次，輕者可輸庫存血漿以補充凝血因子。早產兒因肝功能不成熟，肝臟不能合成凝血因子，雖用維生素K1還不能奏效，最好輸新鮮血。
2、凝血酶原復合物（PCC）治療
3、.止血、糾正貧血。合並顱內出血急性期以止血、輸血、營養支援療法、對症處理治療。
4、葉綠醌是所選擇的制劑且以維生素K1 通稱應市.它可用於治療低凝血酶原血症，特別是來自於香豆素或茚滿二酮的抗凝劑衍生物所引起的.2-甲基萘醌鈉二硫化物對這些拮抗劑無效，因為它轉化為維生素K2 類的效力很低(1%).一有可能，應給以維生素K1 皮下注射或肌內注射.成人常用劑量為10mg肌肉注射.在緊急情況下，10~20mg可注射的維生素K1 溶於5%葡萄糖或0.9%氯化鈉溶液中靜脈注射，速率每分鍾不超過1mg(極為少見的是，甚至在維生素K1 適當地稀釋且緩慢給予時，仍可發生類似於過敏的嚴重反應，包括休克以及心跳和呼吸停止).如果PT並未令人滿意的降低則可在6~8小時內反復使用同一劑量，通常在1~2小時內即可生效.在大多數病例，該治療在3~6小時內有效.服用抗凝劑的病人可口服維生素K1 5~20mg以非緊急地控制低凝血酶原血症，有益作用在6~10小時內通常很為明顯.
5、個別遲發性出血可在生後1/2～3個月發病，見於母乳喂養兒，可合並腹瀉、使用抗生素、肝膽疾病、長期禁食或接受胃腸道外高營養等有關。常見為急性顱內出血。此類病例宜用維生素K預防。

㈦ 凝血酶原復合物 怎麼注射

使用說明上，要求用輸血器靜滴。
實際使用中，用靜推的方法，很方便。

㈧ 下肢靜脈血栓的治療方法有哪些

葯物治療是用抗凝的葯物來降低血液凝固的可能性,還有就是用溶栓葯來溶解已經形成的血栓,條件是血栓必須新鮮。另外取栓手術也要求血栓形成的時間相對較短。很多患者來就診時血栓形成的時間往往是比較長的,隨著腔內外科技術的發展,出現了髂靜脈球囊擴張支架成型術這樣一種微創的治療方法。以下介紹三種靜脈血栓的常規治療方法。1、下肢深靜脈血栓葯物治療:以溶栓、抗凝、促靜脈迴流這三類葯物為主,其中以抗凝、溶栓最為重要。抗凝、溶栓治療期間存在皮膚、粘膜、臟器出血的風險,因此需要臨床醫師密切觀察患者症狀,定時監測病人凝血功能,隨時調整抗凝、溶栓葯物用量。2、手術治療:治療急性下肢深靜脈血栓的手術主要的目的是恢復下肢深靜脈的迴流,以取栓手術為代表的傳統手術方法。3、置管溶栓術:這是一種微創的介入療法,將一根特製頭端多側孔的溶栓導管直接置入靜脈血管血栓部位,留置導管期間將溶栓、抗凝葯物直接注射至血栓內,增加葯物在病變部位的濃度,增強療效,減少出血等副反應。以上是對靜脈血栓有哪些治療的方法這個問題的建議,希望對您有幫助,祝您健康!

㈨ 凝血酶原時間的正常范圍

凝血酶原時間11～13秒（也有的說11～15秒）。12-16秒。
凝血酶原時間（prothrombin time，PT） PT異常意義：1 、延長：先天性因子Ⅱ Ⅴ Ⅶ Ⅹ缺乏症和低（無）纖維蛋白原血症；獲得性見於DIC、原發性纖溶症、維生素K缺乏、肝臟疾病；血循環中有抗凝物質如口服抗凝劑肝素和FDP以及抗因子Ⅱ Ⅴ Ⅶ Ⅹ的抗體。
2.縮短：先天性因子Ⅴ增多症、口服避孕葯、高凝狀態和血栓性疾病。 凝血酶原時間是監測口服抗凝劑的常用指標，在ISI介於2.2-2.6時，凝血酶原時間比值在1.5-2.0 INR在3.0-4.5用葯為合理和安全.世界衛生組織（WHO）規定應用口服抗凝劑時INR的允許范圍：非髖部外科手術前1.5-2.5；髖部外科手術前2.0-3.0；深靜脈血栓形成2.0-3.0；治療肺梗塞2.0-4.0；預防動脈血栓形成3.0-4.0；人工瓣膜手術3.0-4.0
凝血酶原時間；報告方式；即報告被檢標本的凝血酶原時間（秒）也同時報告正常對照的結果（秒）並用凝血酶原比值報告之 待檢血漿的凝血酶原時間 凝血酶原時間比值 = 正常血漿的凝血酶原時間二、國際標准化比值（international normalized ratio，INR）
1.正常參考值：0.8-1.5。
2.臨床應用：INR是病人凝血酶原時間與正常對照凝血酶原時間之比的ISI 次方（ISI：國際敏感度指數，試劑出廠時由廠家表定的）。同一份在不同的實驗室，用不同的ISI試劑檢測，PT值結果差異很大，但測的INR值相同，這樣，使測得結果具有可比性。國際上強調用INR來監測口服抗凝劑的用量，是一種較好的表達方式