❶ 檢測細胞增殖的種類以及方法步驟
主要有四種，方法步驟如下
一、胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）滲入法
胸腺嘧啶核苷（TdR）是DNA特有的鹼基，也是DNA合成的必需物質。用同位素3H標記TdR即3H-TdR作為DNA合成的前體能摻入DAN合成代謝過程，通過測定細胞的放射性強度，可以反映細胞DAN的代謝及細胞增殖情況。但是具有放射性。
二、MTT檢測法
MTT檢測法主要反映細胞的能量代謝，是檢測細胞增殖活力的一種簡便准確的方法，其原理是在活細胞生長和增殖過程中，線粒體內的脫氫酶可將黃色的MTT分解成蘭紫色的甲（Formazan），生成的甲量的多少與細胞的數量和細胞的活力成正比
三、羥基熒光素二醋酸鹽琥珀醯亞胺脂（CFSE）檢測法
羥基熒光素二醋酸鹽琥珀醯亞胺脂（CFSE）是一種可穿透細胞膜的熒光染料，具有與細胞特異性結合的琥珀醯亞胺脂基團和具有非酶促水解作用的羥基熒光素二醋酸鹽基團，使C E成為一種良好的細胞標記物。CFSE進入細胞後可以不可逆地與細胞內的氨基結合偶聯到細胞蛋白質上。當細胞分裂時，CFsE標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中，因此其熒光強度是親代細胞的一半。這樣，在一個增殖的細胞群中，各連續代細胞的熒光強度呈對遞減，利用流式細胞儀在488nm激發光和熒光檢測通道可對其進行分析。
四、Br檢測法
Br中文全名5-溴脫氧尿嘧啶核苷，為胸腺嘧啶的衍生物，可代替胸腺嘧啶在DNA合成期（S期），活體注射或細胞培養加入，而後利用抗Br單克隆抗體，ICC染色，顯示增殖細胞。同時結合其它細胞標記物，雙重染色，可判斷增殖細胞的種類，增殖速度，對研究細胞動力學有重要意義。
❷ 細胞活性檢測的方法有多少種
細胞活性測定方法有台盼藍染色法、克隆（集落）形成法、 3H 放射性同位素摻入法、 MTT 法等。其中 MTT 法以其快速簡便，不需要特殊檢測儀器、無放射性同位素、適合大批量檢測的特點而得到廣泛的應用。但 MTT 法形成的 Formazan 為水不溶性的，需要加有機溶劑溶解，由於在去上清操作時會有可能帶走小部分的 Formazan ，故有時重復性略差。為了解決這個問題，研究人員又開發了很多種水溶性的四氮唑鹽類：如 XTT 、 CCK-8 （ WST-8 ）等。
（1）生物學檢測法：又稱生物活性檢測，是根據細胞因子特定的生物活性而設計的檢測法。生物活性檢測法又可分為： 1、細胞增殖法； 2、靶細胞殺傷法； 3、細胞因子誘導的產物分析法； 4、細胞病變抑製法。
（2）免疫學檢測法：細胞因子均為蛋白或多肽，具有較強的抗原性，可利用抗原抗體特異性反應的特性，用免疫學技術定量檢測細胞因子，常用的方法包括ELlSA、RlA及免疫印跡法
（3）分子生物學方法：目前公認的細胞因子的基因均已克隆化，較容易地得到某一細胞因子cDNA探針或根據已知的核苷酸序列人工合成寡聚核苷酸探針。常使用斑點雜交、Northernblot、逆轉錄PCR，細胞或組織原位雜交等。具有靈敏、快速等優點，甚至從l～10個細胞中就可檢出其中的特異mRNA
❹ 常用的檢測細胞活力的方法有哪些（除了MTT）
現在應用最多的是CCK-8法。CCK8基本與MTT是一樣的，優點是產物溶於水，所以避免了有機溶劑溶解甲月贊的步驟，既節省了時間，還大幅提高了一致性。
當然最精確的還是同位素標記法。
❺ 細胞活力測定常用的簡便方法是
MTT法又稱MTT比色法，是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚（Formazan）並沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二甲基亞碸（DMSO）能溶解細胞中的甲瓚，用酶聯免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數量。在一定細胞數范圍內，MTT結晶形成的量與細胞數成正比。該方法已廣泛用於一些生物活性因子的活性檢測、大規模的抗腫瘤葯物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經濟。
缺點：由於MTT經還原所產生的甲瓚產物不溶於水，需被溶解後才能檢測。這不僅使工作量增加，也會對實驗結果的准確性產生影響，而且溶解甲瓚的有機溶劑對實驗者也有損害。
細胞活力常用百分比表示，活力的大小對試驗結果有很大影響。細胞活力的測定有許多方法，最簡便常用的方法是台盼藍（trypanblue）染色法。台盼藍又稱錐藍，是一種陰離子型染料，這種染料不能透過活細胞正常完整的細胞膜，故活細胞不著色，但死亡細胞的細胞膜通透性增加，可使染料通過細胞膜進入細胞內，使死細胞著色呈藍色。
❻ 常見的檢測紅細胞的手段有哪些
紅細胞檢查計數、血紅蛋白測定、形態檢查、比容測定、生物活性檢測、ELISA檢測、DNA聚全酶鏈反應、血流變指數檢測、甲襞微循環檢測、血細胞比容檢測等，這些都是常見的關於紅細胞的檢測手段，但大多數檢測方法都是數值，指標性的，一般老百姓也看不懂。
紅細胞影像系統此類是通過高分辨的顯微鏡，很直觀的看到紅細胞的聚集性、變形性和滾動能力。
❼ 請問現在測細胞活性，除了MTT，還有其他好方法嗎
MTT是最常用的檢測細胞活性的方法，但目前也有很多其他選擇。像CCK-8和WST-1，還有一些其他方法不是很常用。
CCK-8比前面的MTT更加靈敏，也越來越受到大家的認可，CCK-8的原理跟MTT其實是相同的，不同之處在於CCK-8法生成的formazan是水溶性的，不需要再吸出培養液加入有機溶劑溶解這個步驟，因此可以減少一定的誤差。對細胞毒性小；為1瓶溶液，毋需預制，即開即用。但是CCK-8價格要比MTT貴，我們選了一個知名度比較好的國產CCK-8試劑盒，炎熙的CCK-8試劑盒，已經用了一年多了，質量穩定，價格比sigma的便宜很多。沒辦法，預算有限。
還有一些檢測增殖，毒性的試劑，像BrdU 等等，沒有親自用過。
❽ 檢測細胞增殖的方法有哪些
一、MTT比色：
MTT比色是一種目前被廣泛採用的檢測細胞生長和存活的方法，其原理是外源性MTT（四唑鹽）可被活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶還原成難溶的藍紫色結晶物並沉澱在細胞中，而死細胞無此功能，DMSO（二甲基亞碸）能溶解細胞中的紫色結晶物，用酶聯檢測儀在490nm波長處檢測其光密度值，可間接反映活細胞數量。在一定范圍內，MTT結晶物形成的量與細胞數成正比，此方法已廣泛用於檢測細胞活力、觀察細胞生長等方面，具有靈敏度高、重復性好、操作簡便、經濟、快速、易自動化、無放射性污染等特點，與細胞計數有良好的相關性。
二、rdU標記法
1．細胞以1.5×105/ml細胞數接種於直徑35ml培養皿中（內放置一蓋玻片），培養1天，用含0.4％ FCS培養液同步化3天，使絕大多數細胞處於G0期。
2．終止細胞培養前，加入BrdU（終濃度為30μg/L），37℃，孵育40min。
3．棄培養液，玻片用PBS洗滌3次。
4．甲醇/醋酸固定10min。
5．經固定的玻片空氣乾燥，0.3％H2O2-甲醇30min滅活內源性氧化酶。
6．5％正常兔血清封閉。
7．甲醯胺100℃，5min變性核酸。
8．冰浴冷卻後PBS洗滌，加1抗即抗小鼠BrdU單抗（工作濃度1：50），陰性對照加PBS或血清。
9．按ABC法進行檢測，蘇木素或伊紅襯染，在顯微鏡下隨機計數10個高倍視野中細胞總數及BrdU陽性細胞數，計算標記指數（LI）。
三、結晶紫法
1．體外細胞培養結束後，去培養液，加入11％的戊二醛固定，置於振盪器上搖20min。
2．固定細胞用去離子水洗滌至戊二醛液洗凈。
3．置空氣或烘箱37℃徹底乾燥。
4．加入0.1％的結晶紫液對細胞染色，振搖30min。
5．用蒸餾水洗滌，至多餘的結晶紫液沖洗干凈。
6．置空氣或37℃烘箱中徹底乾燥。
7．加入10％的乙酸對細胞吸收的結晶紫進行提取。
8．1h後在酶標儀上測定光吸收度，波長595nm。
四、酸性磷酸酶法
1．96孔細胞培養板中培養細胞，去培養液。用0.01mol/L PBS洗滌1次（如為懸浮細胞則用離心洗滌）。
2．去洗滌液後加入磷酸酶底物100μl/孔。
3．37℃，孵育1～4h。
4．加入0.1mol/L氫氧化鈉10μl/孔。
5．在多孔酶標儀上405nm處測光吸收度，將細胞培養板其中不含細胞，同樣處理過的一孔作為空白對照，所測的每孔光吸收度可間接反應每孔中的細胞數。如在同樣條件下作一細胞數的系列標准對照，以細胞數為X軸，光吸收度為Y軸，可作直線回歸，可推算出每孔中的細胞。
❾ 細胞活力測定常用的簡便方法
又稱MTT比色法，是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚(Formazan)並沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二甲基亞碸(DMSO)能溶解細胞中的甲瓚，用酶聯免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數量。在一定細胞數范圍內，MTT結晶形成的量與細胞數成正比。該方法已廣泛用於一些生物活性因子的活性檢測、大規模的抗腫瘤葯物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經濟。
缺點:由於MTT經還原所產生的甲瓚產物不溶於水，需被溶解後才能檢測。這不僅使工作量增加，也會對實驗結果的准確性產生影響，而且溶解甲瓚的有機溶劑對實驗者也有損害。
❿ 細胞免疫功能檢測常用有哪幾種方法
細胞免疫（CMⅠ）是由多種細胞相互作用的結果。免疫細胞間相互作用導致多種細胞因子的釋放。因此細胞功能測定不僅涉及T細胞的數量和功能與包括各類因子活性測定，因此評價機體的細胞免疫功能不僅程序復雜，且很難標准化。
一、遲發型過敏反應的體外檢測方法
皮膚試驗和接觸性過敏的誘發是檢測遲發型過敏反應（DTH）的兩種常用方法。皮膚試驗中誘發對曾經使病人致敏的抗原的再次應答，而接觸性過敏是測試受者對從未接觸過的物質發生致敏的能力。
1．皮膚試驗 用皮膚試驗診斷DTH，常用的抗原有結核菌純蛋白衍生物（PPD）、腮腺炎病毒、念珠菌素等，在人類試驗時在前臂皮內注射少量可溶性抗原，24～48小後，測量紅腫硬結的大小，硬結直徑大於10mm即被看作為陽性。表明受試者對該病原菌有了一定的細胞免疫能力，若皮試無反應，可用更高濃度的抗原重復試驗，若仍無反應即為陰性，需排除皮試技術誤差，也可能受試者從未接觸過此抗原，也可能由於細胞免疫功能缺損，或由於細胞免疫功能缺損，或由於嚴重感染（麻疹、慢性播散性結核）造成的無反應性。
2．接觸性過敏常應用低分子量化合物如二硝基氯苯（DNCB）誘生接觸性過敏。化合物與皮膚蛋白質結合而導至DTH反應。在動物試驗時，初次皮膚上塗抹DNCB後間隔7～10天再激發刺激，則皮膚出現即為陽性。此試驗人類已不使用。
二、細胞免疫的體外檢測方法
體外檢測淋巴細胞的數量和功能，最易採集的是血標本，首先需分離或純化淋巴細胞，一般使用萄聚糖-泛影葡胺配成比重為1.077的淋巴細胞分層液，當將血液重疊於淋巴細胞分層液之上離心時，由於紅細胞（1.092）、多形核白細胞（1.090）、淋巴細胞（1.070）的比重不同而相互分開。淋巴細胞和單核細胞在血漿和分層液交界處形成一薄層。仔細分出這一薄層的細胞，其中淋巴細胞佔80%，單核細胞佔20%，淋巴細胞中T細胞佔80%，B細胞佔4%～10%，其作為非DT、非B細胞。
1．T細胞計數
（1）E花環法：人類T細胞表面有SRBC受體（CD2）能與SRBC結合形成玫瑰花環樣結構，將經分層液分離現的RBM懸液與SRBC在含有血清的平衡鹽水中混合，經37℃培養5～10分鍾放4℃過夜，取細胞懸計數，外周血淋巴細胞中約70%～80%淋巴細胞結成花環即為T細胞。目前此方法已用來分離T細胞，而不用做T細胞計數。
（2）用單克隆抗體計數T細胞：將人的PBM分成三等份，分別用小鼠抗人CD3、CD4和CD8的單克隆抗體作第一抗體與細胞結合，再用FITC標記的兔抗小鼠IgG抗體作第二抗體進行間接免疫熒光染色，在熒光顯微鏡下或流式細胞儀檢測結果，在PBM中被CD3抗體染上熒光的細胞稱為CD3 細胞即總T細胞。正常人在PBM中T細胞佔70%～80%。正常人的CD4 細胞和CD8 細胞之和應與CD3 細胞數一致。CD4 細胞與CD8 細胞的比值正常人約為2/1而艾滋病患者則比值小於1.7。
2．T細胞活化試驗 T細胞能被非特異的物質稱為有絲分裂原所激活而向淋巴母細胞轉化。T細胞轉化過程可伴隨有DNA、RNA、蛋白質的合成增加，最圖導致細胞分裂。在光學顯微鏡下可計數轉化後的淋巴細胞數，也可用氚標記的胸腺嘧啶核苷（3HTdR）摻入正在分裂的淋巴細胞，用液閃測定儀檢查摻入正在分裂的淋巴細胞，用液測量儀檢查摻入的3H-TdR的多少確定淋巴細胞轉化率。最近有一種不用同位素，又可用儀器測量的淋巴細胞增殖反應的檢查法，稱為MTT檢測法，MTT是一種甲氮唑鹽，它是細胞線粒體脫氫酶的底物，細胞內的酶可將MTT分解產生藍黑色甲（fromazan）產物。該產物的多少與活性細胞數正相關。結果可用酶標檢測儀（595mm）測量匯豐銀行密度，做為MTT法的檢查指標。此法的結果與3H-TdR摻入法平行，並能反應試驗中的活細胞數。
3．細胞毒試驗 TC細胞、NK細胞、LAK細胞、TIL細胞對其靶細胞有直接的細胞毒（殺傷）作用。常用的栓測細胞毒效應的方法是51Cr-Na2Cro4鹽水溶液與靶細胞胞混合，於37℃培養1小時左右，51Cr即可進入靶細胞，與胞漿蛋白結合，洗去游離的51Cr後，即可得到51Cr標記的靶細胞，將待檢細胞毒性的細胞與51Cr標記的靶細胞混合（比例約為50：1或100：1）靶細胞被殺傷越多，釋放到上清液中的液游離的51Cr越多，且不能被其他細胞吸收。用γ射線測量儀檢測上清液中的cpm值，即可計算出待檢細胞殺傷活性的高低。
細胞毒試驗檢測Tc細胞效應功能是否健全，及經IgG介導的ADCC效應，或NK細胞在抗腫瘤免疫中的作用是有意義的。
4．混合淋巴細胞的反應（MIR） 是體外研究T細胞的較好的方法，雙向MLR常被用來篩選骨髓移植的供體。來自不同供體的淋巴細胞分別與病人的淋巴細胞混合培養4～5天，在最後8小時摻入51TdR摻入法測T細胞的反應性。或用細胞毒法觀察受刺激的T細胞與活的靶細胞混合（靶細胞來自與刺激細胞相同的個體）如果T細胞受刺激後產生了細胞毒T細胞，可殺死活的細胞，根據靶細胞釋放51Cr的多少算出T細胞移動抑制因子）和LIF（白細胞移動抑制因子）來評估細胞免疫功能。近年來應用測定IL-2的免疫酶技術，操作簡單，並能定量以取代了MIF和LIF的測定。單個核細胞與分裂原一起培養24小時，然後測定清液中的IL-2活性。在細胞免疫功能缺損時，特別是AIDS病人，IL-2分泌明顯降低。而有些疾病，如多發性硬化、類風濕關節炎、移植排斥反應等病人體內血清中IL-2水平升高，表明病人T細胞活性增高。發生移植排斥反應的病人尿中IL-2也可升高。
也可用酶聯免疫吸附試驗測定各種體液中活化的T細胞脫落的IL-2受體（CD25），一般來說IL-2的水平和IL-2受體水平是平行的，IL-2和IL-2受體的檢測可用於對某些疾病的監測，如移桿排斥、自身免疫病以及接受免疫抑制治療的病人。
對體外培養的細胞進行細胞因子產生能力檢測是檢查細胞培養上清液中細胞因子的生物活性或抗原性。現已可用核酸雜交技術，即從組織中或細胞中提取RNA，與同位素或酶標記的該種細胞因子的cDNA探針作分子雜交試驗，即印跡（dot blotting）或Northern印跡，若查出有某種因子的mRNA存在，即說明該細胞在所處培養條件下有產生某種細胞因子的能力。