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蛋白質定性的常用方法

發布時間:2022-01-09 15:08:13

Ⅰ 蛋白質定性測試的方法有哪些

你的意思是確定這種樣品是蛋白質吧。第一種方法是考馬斯亮藍顏色反應。第二種方法是跑蛋白質電泳,第三種方法是bca顯色反應。謝謝。

Ⅱ 誰能給我一個定性測定蛋白質,還有脂肪的方法(試劑盡量是常見的,越簡便越好)

去醫院生化科 很簡單

Ⅲ 蛋白質定性

用western印跡,檢測你的細胞株產生的蛋白質,看是否是你要的蛋白質

Ⅳ 常用的蛋白質含量測定方法有哪些

①凱氏定氮法
原理:蛋白質平均含氮量為16%。當樣品與濃硫酸共熱,蛋白氮轉化為銨鹽,在強鹼性條件下將氨蒸出,用加有指示劑的硼酸吸收,最後用標准酸滴定硼酸,通過標准酸的用量即可求出蛋白質中的含氮量和蛋白質含量。
②雙縮脲法
原理:尿素在180℃下脫氨生成雙縮脲,在鹼性溶液中雙縮脲可與Cu2+形成穩定的紫紅色絡合物。蛋白質中的肽鍵實際上就是醯胺鍵,故多肽、蛋白質等都有雙縮脲(biuret)反應,產生藍色或紫色復合物。比色定蛋白質含量。
缺點:靈敏度低,樣品必須可溶,在大量糖類共存和含有脯氨酸的肽中顯色不好。其 精確度 較差 (數mg),且會受樣品中 硫酸銨 及 Tris 的干擾,但 准確度 較高,不受蛋白質的種類影響。
③Folin酚法(Lowry)
Folin酚法是biuret 法的延伸,所用試劑由試劑甲和乙兩部分組成。試劑甲相當於雙縮脲試劑(鹼性銅試劑),試劑乙中含有磷鉬酸和磷鎢酸。
在鹼性條件下,蛋白質中的巰基和酚基等可將Cu2+還原成Cu+, Cu+能定量地與Folin-酚試劑反應生成藍色物質,600nm比色測定蛋白質含量。
靈敏度較高(約 0.1 mg),但較麻煩,也會受 硫酸銨 及 硫醇化合物 的干擾。 步驟中各項試劑的混合,要特別注意均勻澈底,否則會有大誤差。
④紫外法
280nm光吸收法:利用Tyr在280nm在吸收進行測定。
280nm-260nm的吸收差法:若樣品液中有少量核酸共存按下式計算:
蛋白質濃度(mg/ml)=1.24E280-0.74E260 (280 260為角標)
⑤色素結合法(Bradford 法)
直接測定法:利用蛋白質與色素分子(Coomassie Brilliant Blue G-250)結合物的光吸收用分光光度法進行測定。
考馬斯亮蘭(CBG)染色法測定蛋白質含量。CBG 有點像指示劑,會在不同的酸鹼度下變色;在酸性下是茶色,在中性下為藍色。當 CBG接到蛋白質上去的時候,因為蛋白質會提供 CBG一個較為中性的環境,因此會變成藍色。當樣本中的蛋白質越多,吸到蛋白質上的CBG也多,藍色也會增強。因此,藍色的呈色強度,是與樣本中的蛋白質量成正比。
間接測定法:蛋白質與某些酸性或鹼性色素分子結合形成不溶性的鹽沉澱。用分光光度計測定未結合的色素,以每克樣品結合色素的量來表示蛋白質含量的多少。
⑥BCA法
BCA(Bicinchoninc acid procere,4,4』-二羧-2,2』-二喹啉)法與Lowry法相似,主要差別在鹼性溶液中,蛋白質使Cu2+轉變Cu+後,進一步以BCA 取代Folin試劑與Cu+結合產生深紫色,在波長562 nm有強的吸收。
它的優點在於鹼性溶液中BCA 比Folin試劑穩定,因此BCA與鹼性銅離子溶液結合的呈色反應只需一步驟即完成。靈敏度Lowry法相似。
本方法對於陰離子、非離子性及二性離子的清潔劑和尿素較具容忍度,較不受干擾,但會受還原糖 及EDTA的干擾。
⑦膠體金測定法
膠體金(colloidal gold)是氯金酸(chloroauric acid)的水溶膠,呈洋紅色,具有高電子密度,並能與多種生物大分子結合。
膠體金是一種帶負電荷的疏水膠體遇蛋白質轉變為藍色,顏色的改變與蛋白質有定量關系,可用於蛋白質的定量測定。
⑧其他方法
有些蛋白質含有特殊的 非蛋白質基團,如 過氧化物酶含有 亞鐵血紅素基團,可測 403 nm 波長的吸光來定量之。 含特殊金屬的酶 (如鎘),則可追蹤該金屬。

Ⅳ 蛋白質定量測定的方法有哪些

定氮法,雙縮尿法(Biuret法)、Folin-酚試劑法(Lowry法)和紫外吸收法。考馬斯亮藍法(Bradford法)。
凱氏定氮 靈敏度低,適用於0.2~ 1.0mg氮,誤差為 ±2% 費時
8~10小時 將蛋白氮轉化為氨,用酸吸收後滴定 非蛋白氮(可用三氯乙酸沉澱蛋白質而分離) 用於標准蛋白質含量的准確測定;干擾少;費時太長
雙縮脲法(Biuret法) 靈敏度低 1~20mg 中速 20~30分鍾 多肽鍵+鹼性Cu2+®紫色絡合物 硫酸銨;Tris緩沖液;某些氨基酸 用於快速測定,但不太靈敏;不同蛋白質顯色相似
紫外吸收法 較為靈敏 50~100mg 快速 5~10分鍾 蛋白質中的酪氨酸和色氨酸殘基在280nm處的光吸收 各種嘌吟和嘧啶;
Folin-酚試劑法(Lowry法) 靈敏度高 ~5mg 慢速 40~60分鍾 雙縮脲反應;磷鉬酸-磷鎢酸試劑被Tyr和Phe還原 硫酸銨;Tris緩沖液;甘氨酸;
各種硫醇 耗費時間長;操作要嚴格計時;顏色深淺隨不同蛋白質變化
考馬斯亮藍法(Bradford法) 靈敏度最高 1~5mg 快速5~15分鍾 考馬斯亮藍染料與蛋白質結合時,其lmax由465nm變為595nm 強鹼性緩沖液;
SDS 最好的方法;干擾物質少;顏色穩定; 顏色深淺隨不同蛋白質變化

Ⅵ 誰能給我一個定性測定蛋白質,還有脂肪的方法(越簡便越好,試劑盡量是常見的)

最簡便的方法是燃燒,然後聞其味,有毛質燃燒後氣味的即為蛋白質

Ⅶ 鑒定蛋白質有哪些方法

蛋白質含量的測定:
1 凱氏定氮法
根據氮在蛋白質分子中含量恆定(平均佔16%),因此測定出樣品中氮的含量後,即可求出樣品中蛋白質含量。
2 雙縮脲法
3 福林-酚試劑法
福林-酚試劑包括兩種試劑:鹼性銅試劑,磷鉬酸及磷鎢酸的混合試劑。鹼性銅試劑與蛋白質產生雙縮脲反應。這種被作用的蛋白質中的酚基(酪氨酸),在鹼性條件下易將磷鉬酸和磷鎢酸還原成藍色的鉬藍和鎢藍,所生成藍色的深淺,與蛋白質的含量成正比。在650nm和660nm波長下測定光吸收值,即可測定蛋白質含量。
4 紫外吸收法
酪氨酸,色氨酸在280nm處左右具有最大吸收。由於在各種蛋白質中這幾種氨基酸含量差別不大,所以280nm的吸收值與濃度呈正相關。可用於蛋白質濃度的測定。

Ⅷ 蛋白質的定性和定量

這樣的問題太復雜了,可以講一節課了。

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