熒光顯微鏡使用方法

㈠ 熒光顯微鏡的使用注意事項

操作要注意汞燈不要頻繁開關，打開之後半小時之內不要關閉，關閉後半小時不要打開。開機時注意把光強調到最小，這樣可以延長燈泡壽命。熒光觀察完畢後注意把熒光轉換到空擋。

㈡ 倒置熒光顯微鏡的操作方法和注意事項

熒光顯微鏡一般都是用到汞燈，在使用時，兩次開啟光源間隔要在20分鍾以上，要不然會縮短汞燈的使用壽命。進口的汞燈價格比較貴。至於用到哪個波段的光，要看你的樣品需求了。
CFM-550 系列熒光顯微鏡是由倒置顯微鏡和落射熒光裝置組成。配有長工作距離平場消色差物鏡、大視野目鏡、雙目觀察。倒置熒光顯微鏡還配有特長工作距離聚光鏡、同時配有相襯裝置及長工作距離平場相襯物鏡，具有在培養瓶或培養皿內進行顯微觀察的特點。倒置熒光顯微鏡可以觀察不經染色的透明活體；落射熒光裝置適用於熒光顯微術。倒置熒光顯微鏡特別適用於對活體細胞和組織、流質、沉澱物等進行顯微研究，是生物學、細胞學、腫瘤學、遺傳學、免疫學等研究工作的理想儀器。可供科研、高校、醫療、防疫質檢和農牧等部門使用。

㈢ 熒光顯微鏡怎麼看綠色熒光

綠色熒光蛋白是一類存在於包括水母、水螅和珊瑚等腔腸動物體內的生物發光蛋白，當受到紫外或藍光激發時，發射綠色熒光。

其特點在於：它產生熒光無需底物或輔因子，發色團是其蛋白質一級序列固有的來源於水母的氨基酸殘基組成。水母的綠色熒光蛋白很穩定，無種屬限制，已在多種動植物細胞中表達成功並產生熒光。GFP 的熒光受外界的影響較小，另外GFP 的檢測十分方便，而對細胞的傷害小。

細胞中有些物質，如葉綠素等，受紫外線照射後可發熒光；另有一些物質本身雖不能發熒光，但如果用熒光染料或熒光抗體染色後，經紫外線照射亦可發熒光，熒光顯微鏡就是對這類物質進行定性和定量研究的工具之一。

目前在常用的方法就是採用熒光顯微鏡觀察，熒光顯微鏡在實驗室普及，但不足的是必須採集葉片或動物切片進行觀察，對培養的標本進行破壞，無法進行活體觀察。

綠色熒光蛋白GFP的發光特性：

GFP吸收的光譜峰值為395nm（紫外），並有一個峰值為470nm的副吸收峰（藍光）；發射光譜峰值為509nm（綠光），並帶有峰值為540nm的側峰（Shouder）。雖然450～490nm只是GFP的副吸收峰，但由於該激發光對細胞的傷害小，因此通常多使用該波段光源（多為488nm）。

此外，GFP的光譜特性與熒光素異硫氰酸鹽（FITC）很相似，兩者通常共有一套濾光片。GFP熒光極其穩定，在激發光照射下，GFP抗光漂白（Photobleaching）能力比熒光素強，特別是在450～490nm藍光波長下穩定。

類似的，GFP融合蛋白的熒光靈敏度遠比熒光素標記的熒光抗體高，抗光漂白能力強，因此適用於定量測定與分析。

由於GFP熒光的產生不需要任何外源反應底物，因此GFP作為一種廣泛應用的活體報告蛋白，其作用是任何其它酶類報告蛋白無法比擬的。但因為GFP不是酶，熒光信號沒有酶學放大效果，因此GFP靈敏度可能低於某些酶類報告蛋白，比如螢火蟲熒光素酶等。

㈣ 誰能提供熒光顯微鏡操作規程

熒光顯微鏡操作規程（以OLYMPUS為例）
OLYMPUS日光型膠片照相步驟
■ 設備標注及基本狀態
⒈色溫測定光路轉換拉桿①，插入；
⒉照相光路轉換拉桿②，插入；
⒊照明光源電壓調節鈕③，中間位；
⒋燈光型膠片色溫平衡（LBD）濾光器④，使用日光型膠片時推向後面，請勿扳動；
⒌單色反差濾光片插槽⑤，使用彩色膠片時不用濾色片；
⒍視場光闌和孔徑光闌，調到約3/4打開位置，請勿轉動。

■ 安裝與准備
⒈ 安裝：裝上照相機（圓點對合，順時針旋轉至入位），裝上膠卷；相機短輸出線連接到自動曝光本體，長輸出線連接到數據輸入控制儀；
⒉ 通電：接通自動曝光控制儀及顯微鏡電源，初始化1～2分鍾後膠片自動卷片至第1張，並自動顯示膠片感光度（ISO），抽除載物台下面的遮光板。

■ 明亮視野彩色負片自動曝光
⒈ 粗准焦：拉出①②拉桿，調節取景器的屈光度調節環至雙十線清晰可辨；全部插入②拉桿，調節准焦旋鈕，找到切片平面；
⒉ 色溫調節：將切片空白處移至視野中央，拉出②拉桿，色溫調節盤轉至D，調節③鈕至色溫平衡顯示在黃色三角（此時③鈕顯示大致在相機標志，色溫約為5000～6000）。調定色溫後一直到攝影終止，不要對上述步驟進行調整，光亮的調節只能用ND濾光器進行！
⒊ 准焦：插入②拉桿，按常規用雙筒目鏡對要拍攝的部位進行准焦；
⒋ 拍照：插入①拉桿（或部分插入），拉出②拉桿，自動曝光控制儀顯示屏左下角顯示曝光時間，一般以0.01～0.50秒之間為好（超過0.50秒需增加倒易律失效補償）。按下曝光按鈕（EXPOSE），自動曝光和卷片；
⒌ 結束：拍照結束後自動倒片，插入①②拉桿，切斷電源，按安裝相機相反步驟把相機取下，另行保管。

■ 熒光暗視野彩色負片自動曝光
⒈ 接通熒光電源開關（綠色按鈕）。關閉熒光電源後必須等候半小時以上才能再開機，以免燒壞熒光電源！
⒉ 接通可見光電源，准焦；
⒊ 插入載物台下遮光板，選用合適的激發波長（WU、WIB或WIG），觀察熒光顯色；
⒋ 連續按動自動曝光控制儀上的自動曝光選擇按鈕（MODE/AUTO）直至出現「FL-AUTO」；
⒌ 其餘照相步驟同上。如細胞沒有布滿視野，可選用定點測光（拉出自動曝光本體上的准焦范圍選擇拉桿，參照使用說明書p.5和p.21）。

■ 注意事項和提示
⒈ 常用的膠卷多為日光型。
⒉ 使用日光型膠片時把燈光型膠片色溫平衡（LBD）濾光器④推向後面，請勿扳動。
⒊ 使用彩色膠片時單色反差濾光片插槽⑤里不必放置濾色片。
⒋ 視場光闌和孔徑光闌，調到約3/4打開位置，請勿轉動。
⒌ 調定色溫後一直到攝影終止，不要對各項參數進行調整，光亮的調節只能用ND濾光器（在LBD調節鈕後面）進行。
⒍ 關閉熒光電源後必須等候半小時以上才能再開機，以免燒壞熒光電源。
⒎ 在切斷電源情況下安裝或取下相機。膠卷未照完時取下，相機會自動關閉遮光板，保證膠卷不會感光。取下的相機應放在乾燥器內保存。
⒏ 熒光暗視野照相最好選用感光度高的膠卷如ISO=400。
⒐ 本室照相系統配備的照相鏡頭為PE3.3×，如物鏡為10×，則放大倍數為33×。
⒑ 使用完畢請在登記簿作記錄。
敬請注意:使用完畢請在登記簿作記錄,否則將追究責任。

㈤ 顯微鏡的使用

1．右手握住鏡臂，左手托住鏡座。
2．把顯微鏡放在實驗台上，略偏左（顯微鏡放在距實驗台邊緣7厘米左右
處）。安裝好目鏡和物鏡。

二、對光
3．轉動轉換器，使低倍物鏡對准通光孔(物鏡的前端與載物台要保持2厘
米的距離)。

4．把一個較大的光圈對准通光孔。左眼注視目鏡內(右眼睜開，便於以後
同時畫圖)。轉動反光鏡，使光線通過通光孔反射到鏡筒內。通過目鏡，可以

看到白亮的視野。

三、觀察
5．把所要觀察的玻片標本（也可以用印有「6」字的薄紙片製成）放在
載物台上，用壓片夾壓住，標本要正對通光孔的中心。

6．轉動粗准焦螺旋，使鏡筒緩緩下降，直到物鏡接近玻片標本為止（眼
睛看著物鏡，以免物鏡碰到玻片標本）。

7．左眼向目鏡內看，同時反方向轉動粗准焦螺旋，使鏡筒緩緩上升，直
到看清物像為止。再略微轉動細准焦螺旋，使看到的物像更加清晰。

㈥ 請問怎麼使用這種熒光顯微鏡照相啊，哦，應該是怎麼使用這種落射熒光顯微鏡看熒光薄片啊

要先知道你要是用激發光的波長，把樣品放到合適的激發光下看就可以了，建議你在拍照片時用冷CCD，這樣拍出的照片效果會好一些！

㈦ 熒光顯微鏡的用途

以紫外線為光源， 用以照射被檢物體， 使之發出熒光， 然後在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。熒光顯微鏡用於研究細胞內物質的吸收、運輸、化學物質的分布及定位等。
細胞中有些物質，如葉綠素等，受紫外線照射後可發熒光；另有一些物質本身雖不能發熒光，但如果用熒光染料或熒光抗體染色後，經紫外線照射亦可發熒光，熒光顯微鏡就是對這類物質進行定性和定量研究的工具之一。
熒光顯微鏡和普通顯微鏡有以下的區別：
1.照明方式通常為落射式，即光源通過物鏡投射於樣品上；
2.光源為紫外光，波長較短，分辨力高於普通顯微鏡；
3.有兩個特殊的濾光片，光源前的用以濾除可見光，目鏡和物鏡之間的用於濾除紫外線，用以保護人目。

㈧ 尼康熒光顯微鏡怎麼操作

尼康熒光顯微鏡的操作手冊，你可以去官網下載。
尼康北京辦事處應該在長安街東，SK大廈。