去除血液中白細胞最佳方法

A. 全血中提取白細胞的方法

中性粒細胞分離的方法

1、 標准方法：Ficoll-泛影鈉（Ficoll-Hypaque）密度梯度及紅細胞裂解法

1） 取一50ml聚乙烯管，無菌採集人外周靜脈血，加4.4ml3.8%或5%的檸檬酸鹽液定容至40ml。上述全血300gX20min，離心，室溫。

2） 吸出富含血小板的上清，2500gX15min，制備無血小板血漿（platelet-poor Plasma, PPP）。

3） 餘下的沉降全血加入5ml 6%Dextran (分子量500,000，用無菌生理鹽水配製)，並用生理鹽水（0.9%）調節最終體積至50ml，輕輕、徹底混勻。室溫沉降30min。

4） 吸出富含白細胞的上層液，275gX6min。

5） 沉澱的細胞用8mlPPP-生理鹽水（1：4）重懸，並移到15ml離心管中。

6） 懸液細胞上面加入3mlFicoll-Hypaque（密度1.077），750gX5min，室溫。

7） 吸取富含中性粒細胞和紅細胞層，用0.155M NH4Cl重懸細胞，使紅細胞裂解，然後中性粒細胞用含0.25%BSA Hanks平衡液（HBSA，無鈣）洗2次，最終用HBSA（含鈣）重懸。

8） 用此法可得95%以上的中性粒細胞。

2、 不連續的密度梯度血漿－Percoll離心法

1） 先制備Percoll儲存液：Percoll原液（100%）:0.9%NaCl的體積比為9：1。

2） 取一50ml聚乙烯管，無菌採集人外周靜脈血，加4.4ml3.8%或5%的檸檬酸鹽液定容至40ml。上述全血300gX20min，離心，室溫。

3） 吸出富含血小板的上清，2500gX15min，制備無血小板血漿（platelet-poor Plasma, PPP）。

4） 餘下的沉降全血加入5ml 6%Dextran (分子量500,000，用無菌生理鹽水配製)，並用生理鹽水（0.9%）調節最終體積至50ml，輕輕、徹底混勻。室溫沉降30min。

5） 吸出富含白細胞的上層液，275gX6min。

6） 沉澱的細胞用2~3mlPPP重懸

7） 在一15ml離心管中依次加入2ml42%、2ml51%Percoll(均為用PPP新鮮配製)、2~3ml細胞懸液，275gX10min.

8） 單個核細胞及部分血小板位於血漿與42%Percoll液之間，中性粒細胞位於42%Percoll與51%Percoll之間。血小板可通過25%Percoll離心5min去除，也可在原密度梯度中加入第三個25%Percoll一起離心去除。

9） 中性粒細胞層用PPP液冼1次，再用含糖的Krebs-Ringer磷酸緩沖液（KRPD，PH7.23）洗1次。

10）用這種方法可得80%中性粒細胞，純度在95%以上。

3、「無LPS」方法（LPS-Free method)

1）已有用變形細胞（如白細胞）裂解的方法表明，容器及溶液的不含LPS，也就是說，LPS的含量小於0.1ng/ml。

2) 無菌採集靜脈血，用10%檸檬酸鈉抗凝。

3）抗凝血中加入6%的Dextran(mol wt 70,000)，比例為3：1（vol/vol,blood/dextran），室溫，1小時。

4) 收集白細胞的血漿，離心，去上清。

5）紅細胞用低滲的0.2%NaCl裂解15秒（此步也可用0.155M NH4Cl 15秒代替）

6）離心前立即加入10ml 1.6%NaCl（含糖(dextrose) 2mg/ml）

7) 離心後用KRPD洗2次。

8）此法得到中性細胞數與方法2類似，但純度只有80-85%，餘下為淋巴細胞及單核細胞。

8）此法得到中性細胞數與方法2類似，但純度只有80-85%，餘下為淋巴細胞及單核細胞。

4 從3中所獲得的中性粒細胞進行純化

1） 因為方法3隻能獲得80－85%純度的中性粒細胞，可以把方法2與方法3聯合對中性粒細胞進行純化。

2） 收集從方法3 dextran沉降所得到的富含白細胞的血漿，275g*6min，離心。

3） 管底沉澱用2ml PPP重懸

4） 在一15ml離心管中依次加入2ml42%、2ml51%Percoll(均為用PPP新鮮配製)、2~3ml細胞懸液，275gX10min。

5） 分別用PPP及KRPD各洗1次

6） 用這種方法所得的中性粒細胞純度高達99%以上，並且中間不需要紅細胞裂解的步驟。

krebs-Ringer phosphate（KRPD緩沖液）的配製： 130 mM NaCl, 5mM KCl, 1.27 mM MgSO4, 0.95 mM CaCl2, 5 mM glucose, 10 mMNaH2PO4/Na2HPO4, pH 7.4

配製方法：

A液：NaCl 7.5985g ; KCl 0.3727g ; CaCl2 0.1054g，glucose-H2O 0.9495g, 加ddH2O 100ml溶解；

B液：NaH2PO4-2H2O 0.2964g Na2HPO4-12H2O 2.9011g，加100mlddH20溶解後加入MgSO4-7H2O 0.3130g，充分溶解。

將A、B混合，用ddH20將體積調節至990ml左右，用1M NaOH或1M HCl調節pH至7.2~7.4，定容至1000ml。

B. 怎麼從人的血液中提取白細胞

1、新鮮全血，紅細胞裂解液（1：1），顛倒混勻數次，靜置5min。10000g，4度，10min。此時可見白細胞沉澱和上層亮紅色的液體。
2、加入TRIzol,(106－107細胞加500ul)，反復抽吸，直至有大量泡沫產生（細胞裂解的標志之一）。常溫孵育5min。
3、加入氯仿（氯仿：TRIzol＝1：5），劇烈混勻15s, 室溫靜置10 min。
4、離心,12,000g 15min, 4℃。
5、小心吸取上清液，轉移到新EP管中, 加入異丙醇（異丙醇：TRIzol=1:2）,充分混勻（8－10次）, 室溫孵育10min。
6、離心,12,000g 10min, 4℃。
7、可見管底有凝膠狀沉澱, 棄去上清液, 加入 75%乙醇（乙醇：TRIzol=1:1），溫和混勻。7500g，5min。
8、棄盡上清液,倒扣在濾紙片上（放在玻璃皿中）室溫乾燥5 min（不要干透，即RNA略微出現透明時），加入60ul DEPC水溶解沉澱。

C. 目前最實用的去除血液中的白細胞的最佳方法是

如果診斷明確為白血病，可以對症的應用一些葯物來進行治療，同時需要完善骨穿的相關檢查，來明確骨髓造血的情況。定期的復查血常規來觀察相關指標的變化，如果出現並且加重，需要輸血和血小板進行治療。另外，如果出現合並有發熱感染的情況，積極的給予抗生素應用。

D. 怎樣降低白細胞

可以先自服一些消炎葯或止吐葯。

E. 有什麼方法降低白細胞值的

白細胞高是說明孩子有炎證，消炎了白細胞自然就降下來，無需刻意去降這個值。有些炎證在體內，沒有表象反映了，但還有慢性炎證沒消完，那麼血項也下不來。如果之前是吊水治療的，那麼停水之後根據醫囑再吃五到七天消炎葯配合估計可好了。供參考。這種膿毒證還是要就醫檢查的。

F. 白細胞過高，要怎麼才能降低

以前做過手術或化療嗎?有炎症的時候，血液，尿液裡面的白細胞就會增加。一般來講感染會引起白細胞增高。多喝點水，吃點氟派酸可能會有幫助!
白細胞計數(WBC)和白細胞分類計數(DC)
血液中的白細胞包括中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、嗜鹼性粒細胞、淋巴細胞。化驗單中的白細胞計數(WBC)是指測定血液中白細胞的總數，而分類計數是指各種白細胞的百分比。由於各種白細胞的生理功能不同，所以在不同的病理情況下，可引起不同類型白細胞的數量發生變化。一般而言，我們只要掌握白細胞計數、中性粒細胞(N)和淋巴細胞(L)的分類就可以了，因為在平常的生活中，醫生是根據白細胞的數量來判斷身體是否有感染發生，然後再根據白細胞分類來判斷是什麼類型的感染，應該使用什麼類型的葯物。一般而言，如果中性粒細胞的數量增多是細菌性的感染，淋巴細胞數量增多是病毒性的感染。
另外可以嘗試青黴素V鉀片，每日三次，每次一片 白細胞計數正常范圍在4000---10000/立方毫米。白細胞技術高於正常時也有生理性增多。比如劇烈運動後，飽餐後，過度寒冷等。病理性增多可見1：感染。也就是有炎症。當然就首選消炎葯。當然任何葯都有副作用。你要選擇的用。保健葯品在有炎症期間是不主張吃的。因為按中醫理論，分虛實二證。炎症是實症。實則瀉之。虛則補之。所以保健葯品在有炎症期間不該用。當然你可以多吃點水果之類的保健食品。
你應該是屬於炎症,做一下尿檢看一下!

G. 如果用白細胞去除術治療慢性粒白血病有什麼傷害老人是否適用

您好！
「白細胞分離術」是慢粒白血病急變患者搶救治療時為快速降低白細胞水平的臨時措施，不是主要治療辦法。老人只要身體不是很虛弱的，可以做。
慢粒白血病有3個階段：1-慢性期CP（不正規治療情況下可持續1～3年,也有5-6年的）；2-加速期AP；3-急性變期BP/BC。
慢粒患者必須抓緊在慢性期積極治療、控制住病情，否則一旦急變、轉成急性白血病那就麻煩了，可能幾個月人就不行了。
請問患者現在是否已經急變了？白細胞特別高、脾臟腫大疼痛啊？
對於慢粒急變患者，現在首要療方案是：1-用血液細胞分離機和化療快速降白；2-然後1天吃6粒格列衛來緩解病情，將病情重新拉回慢性期；3-拉回慢性期後，改為1天吃4粒格列衛來控制病情。
慢性粒細胞白血病（CML）現在全世界主流治療方案是吃格列衛（甲磺酸伊馬替尼，有瑞士諾華公司的或印度NATCO公司的兩種）。格列衛能將病情始終控制在慢性期，也就是說能不斷延長慢性期、不發生急變。
瑞士諾華公司格列衛24000元1個月，買3贈9後是72000元1年。
印度NATCO公司格列衛現在1000元左右1個月。
現在格列衛2代葯也有了（達希納、達沙替尼等），但價格很高。
羥基脲和干擾素來降低白細胞只能短期表面維持，不是實質性治療。只能降低白細胞以避免白細胞過高導致並發症，不能不斷延長慢性期，不能阻止急變的發生。

H. 去白細胞過濾器的簡介

方法體外培
養腸腫瘤細胞LOVO和胃腫瘤細胞SGC，並採集非腫瘤患者術野血液，製成濃縮紅細胞。將腫瘤細胞計數後混入
濃縮的紅細胞中，用白細胞過濾器過濾，觀察過濾對血樣中腫瘤細胞的影響並與未經過濾處理的對照組進行比
較。結果過濾後的血樣中未發現腫瘤細胞，而對照組血樣中可見到腫瘤細胞。培養14d後觀察，經白細胞過濾
器過濾後的血樣未見腫瘤細胞生長，而對照組血樣中有大量腫瘤細胞生長。結論應用自體血液回收機配合白
細胞過濾器，可有效去除血液中的腫瘤細胞。
應用白細胞過濾器去除白細胞輸血的技術在國外已普遍應用。在我國近年來也取得很大進展，受到了臨床醫務人員的重視舊。目前，白細胞過濾器以其去除白細胞效率高、操作簡便、價格合理且無不不良反應， 而成為最有效的去除白細胞的方法，在預防輸血不良反應的產生及輸血相關病毒的傳染方面已取得了較為 滿意的效果。但應用白細胞過濾器去除血液中腫瘤細胞國內報道較少。