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哪些方法可以測蛋白質分子量

發布時間:2024-11-13 12:18:52

1. 最常用於測定蛋白質分子量的方法是

正確答案:A
解析:SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳可以用來測定蛋白質分子量

2. 測定蛋白質分子量方法有哪些

1.凝膠過濾法

凝膠過濾法分離蛋白質的原理是根據蛋白質分子量的大小。由於不同排阻范圍的葡聚糖凝膠有一特定的蛋白質分子量范圍,在此范圍內,分子量的對數和洗脫體積之間成線性關系。因此,用幾種已知分子量的蛋白質為標准,進行凝膠層析,以每種蛋白質的洗脫體積對它們的分子量的對數作圖,繪制出標准洗脫曲線。未知蛋白質在同樣的條件下進行凝膠層析,根據其所用的洗脫體積,從標准洗脫曲線上可求出此未知蛋白質對應的分子量。

2.SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳法

蛋白質在普通聚丙烯醯胺凝膠中的電泳速度取決於蛋白質分子的大小、分子形狀和所帶電荷的多少。SDS(十二烷基磺酸鈉)是一舉中燃種去污劑,可使蛋白質變性並解離成亞基。當蛋白質樣品中加入SDS後,SDS與蛋白質分子結合,使蛋白質分子帶上大量的強負電荷,並且使蛋白質分子的形狀都變成短棒狀,從而消除了蛋白質分子之間原有的帶電荷量和分子形狀的差異。這樣電泳的速度只取決於蛋白質分子量的大小,蛋白質分子在電泳中正虛的相對遷移率和分子質量的對數成直線關系。以標准蛋白質分子質量的對數和其相對遷移率作圖,得到標准曲線,根據所測樣品的相對遷移率,從標准曲線上便可查出其分子質量。

3.沉降法(超速離心法)

沉降系數(S)是指單位離心場強度溶質的沉降速度。S也常用於近似地描述生物大分子的大小。蛋白質溶液經高速離心分離時,由於比重關系,蛋白質分子趨於下沉,沉降速度與蛋白質顆粒大小成正比,應用光學方法觀察離心過程中蛋白質顆粒的沉降行為,可判斷出蛋白質的沉降速度。根據沉降速度可求出沉降系數,將S帶入公式,即可計算培運出蛋白質的分子質量。

3. 測定蛋白質分子量的常用方法

粘度法
凝膠過濾層析法
SDS-凝膠電泳
凝膠滲透(過濾)色譜法
滲透壓法
質譜法包括電噴霧離子化質譜技術和基質輔助激光解吸電離質譜技術
光散射法(多角度激光散射)
沉降法(超速離心法)

4. 測定蛋白質相對分子質量的方法有()

測定蛋白質相對分子質量的方法有()

A.鹽析

B.SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳

C.紫外分光光度法

D.超速離心

正確答案:BD

5. 如果測定某種蛋白質的分子量,採用何種層析法最好其原理是什麼

需要測定蛋白質的分子量,可以直接用SDS聚丙烯醯胺凝膠電泳就可以了,層析法不能測定蛋白子的分子量,但是可以根據分子量的大小來分離開蛋白。

常用技術

1、沉澱,

2、電泳:蛋白質在高於或低於其等電點的溶液中是帶電的,在電場中能向電場的正極或負極移動。根據支撐物不同,有薄膜電泳、凝膠電泳等。

3、透析:利用透析袋把大分子蛋白質與小分子化合物分開的方法。

4、層析:利用蛋白質在固定相與流動相之間不同的分配比例,達到分離目的的技術。

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產品特點

1、處理過程為單純物理過程,無任何相變。設備操作溫度低,避免了傳統工藝的種種弊端;

2、系統採用先進的膜分離技術,工藝簡單,運行穩定可靠,處理效率高;

3、可以對生產廢水中的有用物質進行提純回用,實現經濟、環保雙贏;

4、設備投資少,運行費用低。

6. 實驗室測定蛋白質分子量的方法有哪些

測定蛋白質分子量的常用方法:

粘度法、凝膠過濾層析法、凝膠滲透色譜法、SDS-凝膠電泳、滲透壓法、質譜法包括電噴霧離子化質譜技術和基質輔助激光解吸電離質譜技術、光散射法(多角度激光散射)、沉降法(超速離心法)。

1、粘度法

一定溫度條件下,高聚物稀溶液的粘度與其分子量之間呈正相關性,隨著分子量的增大,聚合物溶液的粘度增大。通過測定高聚物稀溶液粘度隨濃度的變化,即可計算出其平均分子量(粘均分子量)。

如果高聚物分子的分子量愈大,則它與溶劑間的接觸表面也愈大,摩擦就大,表現出的特性粘度也大。特性粘度和分子量之間的經驗關系式為:

8、電噴霧離子化質譜技術

電噴霧離子化質譜技術(ESI-MS)是在毛細管的出口處施加一高電壓,所產生的高電場使從毛細管流出的液體霧化成細小的帶電液滴,隨著溶劑蒸發,液滴表面的電荷強度逐漸增大,最後液滴崩解為大量帶一個或多個電荷的離子,致使分析物以單電荷或多電荷離子的形式進入氣相的質譜技術。ESI-MS 測定蛋白質大分子是根據一簇多電荷的質譜峰群,通過解卷積的方式計算得到蛋白質的分子量,由於ESI-MS可以產生多電荷峰,因此使得測試的分子質量范圍大大擴大。

優缺點:(1)對樣品的消耗少,不會造成樣品的大量浪費;(2)對樣品分子質量測試靈敏度、分辨力和准確度都相當高;(3)能夠方便地與多種分離技術聯用,如毛細管電泳、高效液相色譜等,是解決非揮發性、熱不穩定性、極性強的復雜組分化合物的定性定量的高靈敏度檢測方法

9、基質輔助激光解吸電離質譜技術

基質輔助激光解吸電離質譜技術(MALDI-MS)是將待測物懸浮或溶解在一個基體中,基體與待測物形成混晶,當基體吸收激光的能量後,均勻傳遞給待測物,使待測物瞬間氣化並離子化。基體的作用在於保護待測物不會因過強的激光能量導致化合物被破壞。MALDI的原理是用激光照射樣品與基質形成的共結晶薄膜,基質從激光中吸收能量傳遞給生物分子,而電離過程中將質子轉移到生物分子或從生物分子得到質子,而使生物分子電離的過程。TOF的原理是離子在電場作用下加速飛過飛行管道,根據到達檢測器的飛行時間不同而被檢測即測定離子的質荷比(M/Z)與離子的飛行時間成正比,檢測離子。

優缺點:(1)同ESI-MS 一樣對樣品的消耗很少;(2)隨著質量分析器的不斷改進、新的基質的不斷發現和應用以及延遲萃取技術的使用,使得MALDI-MS 的最高解析度不斷提高,甚至超過ESI-MS;(3)MALDI-MS 單電荷峰佔主要部分,碎片峰少,非常有利於對復雜混合物的分析,且能忍受較高濃度的鹽、緩沖劑和其他難揮發成分,降低了對樣品預處理的要求;(4)MALDI-TOF 質譜對生物大分子分子量的測定范圍是所有測試技術中最廣的。

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