蛋白質檢查方法有哪些方法有哪些方法有哪些

⑴ 什麼是尿蛋白

尿蛋白 尿蛋白定性試驗是用以篩選和粗略估計尿蛋白含量的方法。試驗的方法有三種：試紙法、磺柳酸法和加熱醋酸法。磺柳酸法和加熱醋酸法都是根據濁度反應將無混濁或無沉澱定為陰性(一)，將出現混濁或沉澱的定為陽性(+)。磺柳酸法操作簡便，靈敏度高，可廣泛用於普查，但其對白蛋白的靈敏度高於球蛋白，且影響因素較多，易造成假陰性或假陽性。加熱醋酸法對白蛋白和球蛋白的靈敏度基本一致，影響因素少，准確性較高。
根據濁度反應估算尿蛋白的含量如下：
尿蛋白<0．1g／L：一；尿蛋白為0．1—0．2g／L：±；尿蛋
白為0．2—1.0g／L：+；尿蛋白為1．0～2．0g／L：++；尿蛋白
為2．0—4．0g／l： +++；尿蛋白>4．0g／L： +++十。
正常尿液中含有微量蛋白質(24小時尿蛋白定量<150mg)，普通檢測方法不能發現，檢查結果為陰性。超出此范圍則可檢出，稱為蛋白尿。但由於尿蛋白試驗只是測定一次尿的結果，易受尿液濃縮及稀釋程度的影響，常常不能准確反映蛋白尿的程度。
當腎小球、腎小管發生病變時，如各期腎炎、腎病以及高血壓發生腎動脈硬化時，均可出現蛋白尿；各種細菌性感染，如腎盂腎炎、腎結核、敗血症等亦可出現蛋白尿；非感染性疾病，如腎結石、多囊腎、腎澱粉樣變性以及休克、嚴重肌肉損傷、發熱、黃疸、甲狀腺功能亢進、溶血性貧血及白血病等，也可出現蛋白尿。
生理性蛋白尿常見於食高蛋白飲食後，精神激動、劇烈運動、長時間受寒、妊娠等，都可能出現暫性的蛋白尿，但尿蛋白定性一般不超過+。
一般說來，持續性的蛋白尿往往代表腎臟有病變。尿蛋白的多少反映了病變程度，臨床可據此作療效觀察。然而，需要特別指出的是，腎小球病變到了晚期，由於大量腎單位廢損，使蛋白濾出減少，尿蛋白檢查反而減少或消失，這並不代表腎臟病變的減輕。 中醫治療腎病——獨樹一幟
血尿、蛋白尿雖然是判斷腎臟病病情嚴重程度及其預後的重要指標，但是腎病患者不能一葉障目。數值固然重要，但更重要的是病情能得到真正好轉。只要病情得到控制，潛血、尿蛋白數值自然會降下來。但現在有一些患者捨本逐末，一雙眼睛死盯著數值不放，必然導致只見樹木不見森林的後果。要想真正恢復健康，治病於本是最重要的。這就要求患者必須找到適合自己的方法，徹底治癒腎病。
目前現代醫學對腎病治療方法比較局限，只是應用激素、免疫抑制劑及抗菌素治療，在病情轉入尿毒症期以後，進行透析與換腎。這些是治療腎病的常規方法，雖然在療效上有一定優勢，但其副作用較大，且費用昂貴。尤其進入尿毒症期，病人在治療時會更加痛苦，這痛苦不僅來源於身體上，更多的是精神上的。它給患者及家庭帶來巨大的思想壓力和經濟壓力，一般家庭難以承受。
近年來，由於我國傳統中醫學理論得到了極大發展，在腎病治療上，與世界先進科技接軌所衍生出的微化中葯滲透治療，在腎病治療領域創造出神奇效果。對腎臟病的恢復、腎功能的改善及晚期腎病患者生命的延長上起到了明顯作用。微化中葯滲透治療腎臟病就是運用中醫理論對每一種腎臟疾病的病因、病機進行分析、歸納，辯證准確地用葯，並在此基礎上，應用先進的微化技術改善葯物有效成份的吸收率，從根本上提高葯效，迅速改善症狀。
微化中葯如何消除腎病引起的蛋白尿、血尿？
由上面的論述知道，腎臟病尿蛋白和紅細胞的漏出，主要原因是腎小球濾過膜受損傷導致通透性增加造成的。在過去，我們只是針對原發病進行治療，在腎小球濾過膜的修復上針對性很差。由此可知，即便尿蛋白、潛血在一段時間內減少甚至消失，但其最根本的病因沒有解決，腎小球的濾過膜仍未得到修復。在葯物作用消失後，或在某些原因誘導下，尿蛋白、潛血又怎會不卷土重來呢？
經過微化處理後的中葯，具有更強的葯物活性，它在充分發揮傳統中葯治病於本特點，使破碎的中葯分子鏈再次有效鏈結，形成新功能的同時。還可針對受損傷的腎小球基底膜，去除沉積在基底膜上的免疫復合物與病變組織，修復受損的基底膜。這一方法主要是修復腎臟病變的基因和受損的腎臟病變細胞，並激活受損組織細胞內DNA復制，促使受損腎臟結構改變，使受損腎臟功能得到恢復。所以，修復之後，由於引起病變的根本原因被消彌於無形，尿蛋白、潛血必然會逐漸減少直到消失，且這種消失是隨著病因的清除而消失的，所以很難出現反復，當然更不存在停葯後症狀的反彈。
所以，在腎病引起的蛋白尿、血尿的治療上，關鍵是要治「本」，是去修復受損的基底膜，而不是一味的被表象所蒙蔽；病情的好壞病人本身是可以感覺到的，不必去刻意追求那一個個數字。只有這樣，病情才會達到真正意義上的治癒！
以上是以前的，今天才發現有很多不足，目前保護腎太依賴中葯未必是好事，中葯確實不錯，可是尿蛋白並不只是腎炎腎本身的問題，根據尿蛋白的成因，一般可以分為5類
1.腎小球性蛋白尿：腎小球性蛋白尿（glomerular proteinuria）是由於腎小球濾過膜對血漿蛋白通透性增高所致。是臨床最多見的類型。見於多種原發或繼發性腎小球腎炎。是由於缺血、中毒、免疫病理損傷破壞了濾過膜的完整性；或由於濾過膜電荷屏障作用減弱而致。
2.腎小管性蛋白尿：在正常情況下經腎小球濾出的中小分子蛋白質，幾乎全被腎小管重吸收。當腎小管疾病時，蛋白質重吸收受障礙，小分子蛋白質就會從尿中排出，包括β2-微球蛋白、溶菌酶、核糖核酸酶等。由於血液中小分子蛋白質濃度很低，故此類病人尿蛋白總量一般不超過2g，有時僅10mg，也可以蛋白尿存在。
3.溢出性蛋白尿：在某些疾病中，血中小分子蛋白濃度增加，如本周氏蛋白、血紅蛋白、肌紅蛋白等：若濾液中濃度超過腎吸收閾限，就可以排出，見於骨髓瘤、血管內溶血性疾病。
4.分泌性蛋白尿：尿中IgA排泄增多，見於腎小管間質性腎病；髓袢升支厚段受炎症及葯物刺激時，分泌粘液蛋白（Tamm Horsfell蛋白，T-H蛋白）增多。
5.組織性蛋白尿：組織遭受破壞後可以釋放胞質中各種酶及蛋白質，若分子量小，腎小球濾液中濃度超過腎小管吸收閾限，就則可自尿中排出。該項蛋白液可以直接從腎小管排出，如癌胚抗原——aFP、溶菌酶、腎小管基膜抗原等。
因此，測定蛋白質的大小及性質對臨床很有意義。SDS據丙醯胺凝膠電泳的應用更有實際價值。
總之，如果你沒有學過醫，那我告訴你，蛋白尿只是一個症狀而不是病，治療蛋白尿關鍵是認識他，為什麼會有蛋白尿。糖尿病高血壓是不是控制好了。
尿蛋白測定，包括尿蛋白定性和尿蛋白定量。
尿蛋白定性的臨床意義：
尿蛋白定性有生理性的，也有病理性，其陽性程度與腎損害程度不一定成正比。糖尿病患者尿中持續出現尿蛋白陽性，除外泌尿系感染、原發性腎病外，應考慮糖尿病腎病的診斷。有專家認為，糖尿病腎病早期蛋白尿呈間歇性，只在勞動或運動後為陽性反應。因此，運動後尿蛋白檢驗對診斷糖尿病腎病的早期發現有一定的意義。
尿蛋白定量的臨床意義：
（1）24小時尿蛋白定量的正常參考值為10～150毫克。若在150～500毫克，為微量蛋白尿，＞500毫克為臨床蛋白尿。微量蛋白尿提示糖尿病腎病早期，需長期控制血糖，對逆轉或延緩腎病和視網膜病變的發生發展有一定意義。
（2）尿白蛋白排泄率（uAE）正常參考值＜15微克/分。糖尿病腎病早期，腎小球基底膜受損較輕，故只有微量白蛋白漏出。早期糖尿病腎病uAE為15～200微克/分，臨床糖尿病腎病＞200微克/分。有專家報告，糖尿病腎病有明顯蛋白尿者，幾乎100%有糖尿病視網膜病變。當糖尿病患者uAE30微克/分，可能是糖尿病微血管合並症防治的關鍵時刻。嚴格控制血糖後，早期糖尿病腎病尿白蛋白可逆轉或部分逆轉。目前，常用測定微量尿蛋白的方法是放射免疫法。
什麼是尿蛋白？正常人尿液中有無蛋白？
尿蛋白是尿液通過酸化加熱後混濁而檢出的。正常人每天尿中排出的蛋白質一般為40～80毫克，上限為150毫克，稱為生理性蛋白尿。由於量少，常規化驗檢測為陰性，超過150毫克/日，即屬於異常蛋白尿。人體在劇烈運動、重體力勞動、情緒激動、過冷、過熱及在應激狀態時，尿蛋白的排出量均可增多，稱一過性蛋白尿，在幾小時或數天後即可恢復正常。
腎病患者的尿驗常識
留尿化驗應注意的問題：
收集尿液的時間：任何時間排出尿都可以做常規化驗檢查。一般腎病病人為觀察前後結果則規定一律採用清晨起床第一次尿液送檢。
送檢尿量：一般5～10ml，如要測尿比重則不能少於50ml。
留尿標本應取中段尿：即先排出一部分尿棄去，以沖掉留在尿道口及前尿道的細菌，然後將中段尿留取送檢。
應注意不要把非尿成分帶入尿內：如女性患者不要混入白帶及月經血，男性患者不要混入前列腺液等。
正常值與其變動
○健康的人也會排出一些尿蛋白
健康的人也會出現極少量的尿蛋白，但在定性檢查時只要試紙不變色呈陰性(一)就屬正常。
此外，定量檢查尿蛋白量，只要在100毫克以下時皆屬正常的范圍。
另外，即使身體並無障礙，只要有激烈運動、酷寒、精神興奮、強烈壓力時，也會出現尿蛋白。
被懷疑為異常值的疾病
○疑陽性及陽性就是異常
定性檢查呈疑陽性(+ -)、或陽性(+)時就被認為是異常值。
此外，定量檢查時，一日數值超過100毫克就是異常值。
尿蛋白顯示異常值時的疾病，有的是腎臟本身的疾病，有的則是腎臟病以外的原因所引起的疾病。
○腎臟病以外的原因所引起的蛋白尿
腎臟病以外的原因所引起的蛋白尿多數為良性，當其疾病治癒後，蛋白尿也就隨之消失。
[熱性蛋白尿] 感冒等疾病引起發燒至攝氏三十八度以上時就會出現蛋白尿。
[起立性蛋白尿] 年輕人脊椎向前彎屈壓迫到腎臟血管時就會有蛋白尿的情形。如果不治療，在三十歲前後也會自動消失。
[瘀血腎] 心臟衰竭等腎靜脈瘀血時會出現尿蛋白，但瘀血消失時蛋白也會消失。
○腎臟疾病所引起的蛋白尿
每次做尿液檢查就會出現蛋白時，很明顯的就是患有腎臟疾病。
[腎炎] 急性腎炎或慢性腎炎，其一日的尿液蛋白量從少量到數十公克都有。
[腎變病癥候群] 一日量尿液會出現三公克以上的多量尿蛋白。症狀嚴重時，尿液滲出的蛋白會使血液中的蛋白濃度降低。另外，也有因糖尿病性腎症、澱粉樣變性病(AJnyloidosis)、膠原病等而引起的情形。
[腎硬化症] 隨著本態性高血壓引起的腎硬化症，尿蛋白量會減少，多半在300毫克以下。
此外，多發性骨髓瘤、全身性紅斑狼瘡、慢性風濕性關節炎、痛風、水腫病等水銀中毒、鉛中毒疾病，也會出現尿蛋白。
出現異常值時該怎麼辦？
○不能以一次檢查就下診斷
第一次檢查出現尿蛋白時，必須再做檢查。再檢查仍出現異常時，就要接受尿沉澱、紅細胞數、白細胞數等的檢查，也要實施腎臟與泌尿道的精密檢查，然後綜合全身症狀來診斷是否有腎臟疾病或是其他疾病。有腎臟疾病時，還要做其他腎功能檢查，再做綜合的診斷。
○治療的基本在於飲食療法
診斷為膀胱炎、腎盂腎炎等泌尿道感染症、腎炎、腎病變時，必須保持平靜，服用醫師所指示的葯物。
診斷為腎炎、腎病變時，必須接受腎機能檢查。其檢查結果不良時，就要限制運動，並實施飲食療法。腎障礙的治療基本在於飲食療法，由此可知飲食療法是十分重要的，所以必須遵守醫師指示，控制一日內食鹽與蛋白質的攝取量。

⑵ 蛋白質及氨基酸的測定有哪些方法求大神幫助

樓主你好： 測定蛋白質最基本的方法是定氮法，即先測定樣品中的總氮量，再由總氮量計算出樣品中蛋白質的含量。蛋白質含量測定最常用的方法是凱氏定氮法，它是測定總有機氮的最准確和操作較簡便的方法之一，在國內外應用普遍。此外，雙縮脈法、染料結合法、酚試劑法等也常用於蛋白質含量測定，由於方法簡便快速，故多用於生產單位質量控制分析。 蛋白質及氨基酸的測定 蛋白質是生命的物質基礎，是構成生物體細胞組織的重要成分，一切有生命的活體都含有不同類型的蛋白質。人體內的酸鹼平衡、水平衡的維持；遺傳信息的傳遞；物質的代謝及轉運都與蛋白質有關。人及動物只能從食品得到蛋白質及其分解產物，來構成自身的蛋白質，故蛋白質是人體重要的營養物質，也是食品中重要的營養指標。 蛋白質是復雜的含氮有機化合物，分子量很大，它們由20種氨基酸通過醯胺鍵以一定的方式結合起來，並具有一定的空間結構。不同的蛋白質其氨基酸構成比例及方式不同，故各種不同的蛋白質其含氮量也不同。蛋白質可以被酶、酸或鹼水解，最終產物為氨基酸。氨基酸是構成蛋白質的最基本物質，在構成蛋白質的氨基酸中，亮氨酸、異亮氨酸、賴氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、蘇氨酸、色氨酸和纈氨酸等8種氨基酸在人體中不能合成，必須依靠食品供給，故被稱為必需氨基酸，它們對人體有著極其重要的生理功能，常會因其在體內缺乏而導致患病，或通過補充而增強了新陳代謝作用。所以食品及其原料中蛋白質和氨基酸的分離、鑒定和定量具有極其重要的意義。 蛋白質的測定 測定蛋白質最基本的方法是定氮法，即先測定樣品中的總氮量，再由總氮量計算出樣品中蛋白質的含量。蛋白質含量測定最常用的方法是凱氏定氮法，它是測定總有機氮的最准確和操作較簡便的方法之一，在國內外應用普遍。此外，雙縮脈法、染料結合法、酚試劑法等也常用於蛋白質含量測定，由於方法簡便快速，故多用於生產單位質量控制分析。 微量凱氏定氮法 本法適用於各類食品中蛋白質的測定。 1．原理 食品與硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋白質分解，分解的氨與硫酸結合生成硫酸胺。然後鹼化蒸餾使氨游離，用過量硼酸吸收後再以硫酸或鹽酸標准溶液滴定，根據酸的消耗量乘以換算系數，即為蛋白質含量。反應過程分為三個階段，用反應式表示如下。 ①消化 2NH2(CH2)2COOH 4-13H2S04一(NH。)2S04+6C02+12S0=+16H20 (NH4)2S04+2Na()H一2NH3十+2H20+。Na2S04 2NH3+4H3803—，(NH4)2 B207+5H20 ③滴定 (NH4)2 B2 07+2HCl+5H20—NH4C1+4H3803 2．儀器 ①消化爐。 ②凱氏定氮蒸餾裝置。 3．試劑 所用試劑均用不含氨的蒸餾水配製。試劑均為分析純。 ①CuS04。 ②K2SO。 ③濃H2SO。 ④2％H。BO。溶液。 ⑤混合指示劑：1份O．1％甲基紅乙醇溶液與5份O．1％溴甲酚綠乙醇溶液臨用時混合。也可用2份O．1％甲基紅乙醇溶液與1份0．1％次甲基藍乙醇溶液臨用時混合。 ⑥飽和氫氧化鈉：500 g氫氧化鈉加入500 mL水中，攪拌溶解，冷卻後放置數日，澄清後使用。 ⑦0．01 toolI．一』或0．05 toolL叫HCl標准溶液(需用無水碳酸鈉標定後使用)。 4．操作步驟 ①樣品消化：精密稱取O．2～2．0 g固體樣品或2～5 g半固體樣品或吸取液體樣品5～20mI。，放人500 mI。乾燥凱氏燒瓶中，加人O．2 g硫酸銅、3 g硫酸鉀及20 mL濃HzSOa，於凱氏瓶口放一小漏斗，並將其以45。角斜支於有小孔的石棉網上。（更多詳細咨詢請參考國家標准物質網 www.rmhot.com ）用電爐以小火加熱，待內容物全部碳化，泡沫停止產生後，加大火力，保持瓶內液體微沸，至液體變藍綠色透明後再繼續加熱微沸30 min。冷卻，小心加入20 mL水，再放冷至室溫，移人100 mL容量瓶中，並用少量水洗燒瓶洗液並人容量瓶，在加水至刻度，混勻備用。除不加樣品外，取與處理樣品相同量的硫酸銅、硫酸鉀、硫酸，按同一方法做試劑空白消化。 ②水蒸氣發生瓶內裝水至約2／3處，加甲基紅指示液數滴及數毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入數粒玻璃珠以防暴沸，加熱煮沸水蒸氣發生瓶內的水。 ③向接收瓶內加入10 mL 2％硼酸溶液及混合指示液l滴，並使冷凝管的下端插入液面下，吸取lO mI。樣品消化稀釋液由小玻璃杯流人反應室，並以10 mL水洗滌小燒杯使之流人反應室內，塞緊小玻璃杯的棒狀玻璃塞。將3～10 mL飽和氫氧化鈉溶液倒人小玻璃杯中，提起玻璃塞使其緩緩流入反應室，立即將玻璃塞蓋緊，並加水於小玻璃杯中以防漏氣。加緊螺旋夾，開始蒸餾。蒸汽通人反應室使氨通過冷凝管而進入接收瓶內，蒸餾2～5 min，移動接收瓶，使冷凝管下端離開液面，然後用少量中性水沖洗冷疑管下端外部，再蒸餾1 min取下接收瓶，以0．01 molI．叫或O．05 molL1HCl標准溶液滴定至灰色或藍紫色為終點。同時吸取10 mI_，試劑空白消化液按③操作。 5．計算 6。說明 ①干樣用稱量紙稱重連紙一同消化，空白管同樣放稱量紙消化。 ②含糖量高和油脂高的樣品消化時容易溢出，加熱要緩慢。 ③氨是否蒸餾完全，可用pH試紙測試餾出液是否為鹼性來判斷。 ④實驗前必須仔細檢查蒸餾裝置的各個連接處，保證不漏氣。所用橡皮管、塞子須浸在氫氧化鈉(10％)中，煮沸10 min，然後水洗、水煮，再用水洗。 ⑤小心加樣，切勿使樣品沾污凱氏燒瓶口部和頸部。

⑶ 尿常規有蛋白質是什麼意思

尿常規有蛋白質，說明病人已經有蛋白尿。尿常規檢查其中就有一項查尿蛋白，檢查的方法一般是採用定性的方法或者是半定量的方法，定性的方法給出的結果是(+)、(-)，一直到(++++)。半定量的方法可以給出一定的數值，但這個數值的准確性並沒有那麼高。如果在尿常規檢查的時候發現尿蛋白陽性，往往提示病人出現蛋白尿，首先要排除生理性蛋白尿。
生理性蛋白尿最常見的就是運動性蛋白尿和直立性蛋白尿等等，排除生理性蛋白尿，才可以考慮病理性蛋白尿。這個時候會要求病人去做24小時尿蛋白定量和尿蛋白分類，看看尿蛋白的總量到底有多少，尿蛋白從哪來，從而找到病人的尿蛋白的具體的原因，給他相應的治療。

⑷ 尿蛋白微量的尿蛋白檢驗方法

定性試驗是用以篩選跟粗略估計尿蛋白含量的方法。檢查的方法有著三種：試紙法、磺柳酸法跟加熱醋酸法。磺柳酸法跟加熱醋酸法都是根據濁度反應將無混濁或無沉澱定為陰性（一），將出現混濁或是沉澱的定為陽性（+）。磺柳酸法操作比較簡便，靈敏度高，可廣泛用於普查，但是對白蛋白的靈敏度高於球蛋白，且影響因素較多，易造成假陰性或是假陽性。加熱醋酸法對白蛋白跟球蛋白的靈敏度基本一致，影響因素少，准確性較高。
根據濁度反應估算的尿蛋白含量如下：
尿蛋白<0.1g/L：一；
尿蛋白為0.1-0.2g/L：±；
尿蛋白為0.2-1.0g/L：+；
尿蛋白為1.0～2.0g/L：++；
尿蛋白為2.0-4.0g/L：+++；
尿蛋白>4.0g/L：++++。
正常尿液中含有微量蛋白質（24小時尿蛋白定量<釋程度的影響，常常不能准確反映蛋白尿的程度。人體在劇烈運動、重體力勞動、情緒激動、過冷、過熱及在應激狀態時，尿蛋白的排出量均可增多，稱一過性蛋白尿，在幾小時或數天後即可恢復正常150mg），普通檢測方法不能發現，檢查結果為陰性。超出此范圍則可檢出，稱為蛋白尿。但由於尿蛋白試驗只是測定一次尿的結果，易受尿液濃縮及稀。
尿蛋白是腎病出現一定會出現的症狀之一，可是慢性腎病出現的尿蛋白，患者朋友都不太了解。因為在生活中的不注意，常常忽略它的危害。專家提醒患者，尿蛋白引起的小管細胞生物學變化是十分嚴重的，出現尿蛋白的許多腎臟病都存在著細胞過度增生，代表著一種非適應性反應，嚴重的會導致腎衰。

⑸ 蛋白質組學主要包括哪些分析技術及各自特點

雙向凝膠電泳
雙向凝膠電泳的原理是第一向基於蛋白質的等電點不同用等電聚焦分離，第二向則按分子量的不同用SDS-PAGE分離，把復雜蛋白混合物中的蛋白質在二維平面上分開。由於雙向電泳技術在蛋白質組與醫學研究中所處的重要位置，它可用於蛋白質轉錄及轉錄後修飾研究，蛋白質組的比較和蛋白質間的相互作用，細胞分化凋亡研究，致病機制及耐葯機制的研究，療效監測，新葯開發，癌症研究，蛋白純度檢查，小量蛋白純化，新替代疫苗的研製等許多方面。近年來經過多方面改進已成為研究蛋白質組的最有使用價值的核心方法。

等電聚焦
等電聚焦（isoelectric focusing，IEF）是60年代中期問世的一種利用有pH梯度的介質分離等電點不同的蛋白質的電泳技術。等電聚焦凝膠電泳依據蛋白質分子的靜電荷或等電點進行分離，等電聚焦中，蛋白質分子在含有載體兩性電解質形成的一個連續而穩定的線性pH梯度中電泳。載體兩性電解質是脂肪族多氨基多羧酸，在電場中形成正極為酸性，負極為鹼性的連續的pH梯度。蛋白質分子在偏離其等電點的pH條件下帶有電荷，因此可以在電場中移動；當蛋白質遷移至其等電點位置時，其靜電荷數為零，在電場中不再移動，據此將蛋白質分離。

生物質譜
生物質譜技術是蛋白質組學研究中最重要的鑒定技術，其基本原理是樣品分子離子化後，根據不同離子之間的荷質比（M/E）的差異來分離並確定分子量。對於經過雙向電泳分離的目標蛋白質用胰蛋白酶酶解（水解Lys或Arg的-C端形成的肽鍵）成肽段，對這些肽段用質譜進行鑒定與分析。目前常用的質譜包括兩種：基質輔助激光解吸電離-飛行時間質譜（MALDI-TOF-MS）和電噴霧質譜（ESI- MS）。

飛行時間質譜
MALDI 的電離方式是 Karas和Hillenkamp於1988年提出。MALDI的基本原理是將分析物分散在基質分子（尼古丁酸及其同系物）中並形成晶體，當用激光（337nm的氮激光）照射晶體時，基質分子吸收激光能量，樣品解吸附，基質-樣品之間發生電荷轉移使樣品分子電離。它從固相標本中產生離子，並在飛行管中測定其分子量，MALDI-TOF-MS一般用於肽質量指紋圖譜，非常快速（每次分析只需3~5min），靈敏（達到fmol水平），可以精確測量肽段質量，但是如果在分析前不修飾肽段，MALDI-TOF-MS不能給出肽片段的序列。

電噴霧質譜（ESI-MS）
ESI- MS是利用高電場使質譜進樣端的毛細管柱流出的液滴帶電，在N2氣流的作用下，液滴溶劑蒸發，表面積縮小，表面電荷密度不斷增加，直至產生的庫侖力與液滴表面張力達到雷利極限，液滴爆裂為帶電的子液滴，這一過程不斷重復使最終的液滴非常細小呈噴霧狀，這時液滴表面的電場非常強大，使分析物離子化並以帶單電荷或多電荷的離子形式進入質量分析器。ESI-MS從液相中產生離子，一般說來，肽段的混合物經過液相色譜分離後，經過偶聯的與在線連接的離子阱質譜分析，給出肽片段的精確的氨基酸序列,但是 分析時間一般較長。 目前，許多實驗室兩種質譜方法連用，獲得有意義的蛋白質的肽段序列，設計探針或引物來獲得有意義的基因。隨著蛋白質組研究的深入，又有多種新型質譜儀出現，主要是在上述質譜儀的基礎上進行改進與重新組合。

⑹ 國家標准檢測蛋白質含量測定方法

蛋白質含量測定方法就是檢測N元素的含量，像三聚氰胺的問題，就是通過增加N的含量使「蛋白質」含量提高的。

國家標准檢測蛋白質含量的方法叫做凱氏定氮法，食物中的蛋白質在催化加熱條件下分解，導致氨和硫酸結合產生硫酸銨。 鹼蒸餾採用無硫，硼酸吸收，用硫酸或鹽酸標准滴定溶液滴定，根據酸耗計算氮含量，再乘以轉化系數，即蛋白質含量。

具體操作步驟如下：

1.樣品處理

精確稱量0.2-2.0g固體樣品或2-5g半固體樣品或吸收10-20ml液體樣品（約30-40mg氮當量）。將其轉移至乾燥的100毫升或500毫升氮氣固定瓶中，加入0.2克硫酸銅，6克硫酸鉀和20毫升硫酸，輕輕搖動，在瓶口放置一個小漏斗，將瓶子傾斜石棉網上有45度角，有小孔。

加熱小火後，內容物碳化，泡沫完全停止，加強火力，保持瓶內液體稍微沸騰，直至液體呈藍綠色澄清透明，然後繼續加熱0.5小時。取出並冷卻，小心加入20毫升水，冷卻，移入100毫升容量瓶中，用少量水洗凈氮氣瓶，洗凈液放入容量瓶中，然後用水沖洗至刻度，混勻備用。

取相同量的硫酸銅，硫酸鉀和濃硫酸作為試劑進行空白試驗。然而，這種方法很危險，很難在實驗室中證明。大多數實驗室都有一個消化器，可以一次處理16個以上的樣品和一個可以自行設定溫度的呼吸機。它更安全，更可操作。

(6)蛋白質檢查方法有哪些方法有哪些方法有哪些擴展閱讀

除了凱氏定氮法以外，標準的測量方法還有：

• 分光光度法

食品中的蛋白質在催化加熱條件下被分解，分解產生的氨與硫酸結合生成硫酸銨，在pH4.8的乙酸鈉-乙酸緩沖溶液中與乙醯丙酮和甲醛反應生成黃色的3,5-二乙醯-2,6-二甲基-1,4-二氫化吡啶化合物。在波長400nm 下測定吸光度值，與標准系列比較定量,結果乘以換算系數，即為蛋白質含量。

• 燃燒法

樣品在900~1200℃下燃燒。在燃燒過程中，產生混合氣體。 諸如碳，硫和鹽的干擾氣體被吸收管吸收，氮氧化物被還原成氮。 形成的氮氣流由熱導檢測器（TCD）檢測。