測蛋白等電點有哪些方法

⑴ 解釋如何蛋白質等電點的測定

一、目的：
了解等電點的意義及其與蛋白質分子聚沉能力的關系。

二、原理：
蛋白質的分子量很大，它能形成穩定均一的溶液，主要是由於蛋白質分子都帶有相同符號的電荷，同時蛋白質分子周圍有一層溶劑化的水膜，避免蛋白質分子之間聚集而沉降。

蛋白質分子所帶的電荷與溶液的pH值有很大關系，蛋白質是兩性電解質，蛋白質在鹼性溶液中成陰離子，在酸性溶液中成陽離子：

蛋白質分子所帶凈電荷為零時的pH值稱為蛋白質的等電點（PI）。在等電點時，蛋白質分子在電場中不向任何一極移動，而且分子與分子間因碰撞而引起聚沉的傾向增加，所以這時可以使蛋白質溶液的粘度、滲透壓均減到最低，且溶液變混濁。若再加入一定量的溶劑如乙醇、丙酮，它們與蛋白質分子爭奪水分子，竭力減低蛋白質水化層的厚度而使混濁更加明顯。
各種蛋白質的等電點都不相同，但偏酸性的較多，如牛乳中的酪蛋白的等電點是4.7~4.8，血紅蛋白等電點為6.7~6.8，胰島素是5.3~5.4，魚精蛋白是一個典型的鹼性蛋白，其等電點在pH12.0~12.4。近年來蛋白質的等電點可以採用等電聚焦技術加以准確測定，但需一定的實驗條件。本實驗採用蛋白質在不同pH溶液中形成的混濁度來確定，即混濁度最大時的pH值即為該種蛋白質的等電點值，這個方法雖然不很准確，但在一般實驗條件下都能進行，操作也簡便。

四、操作步驟：
1．制備蛋白質膠液
（1）稱取酪蛋白3克，放在燒杯中，加入40℃的蒸餾水。
（2）加入50毫升1 mol·L-1氫氧化鈉溶液，微熱攪拌直到蛋白質完全溶解為止。將溶解好的蛋白溶液轉移到500毫升容量瓶中，並用少量蒸餾水洗凈燒杯，一並倒入容量瓶。
（3）在容量瓶中再加入1 mol·L-1醋酸溶液50毫升，搖勻。
（4）加入蒸餾水定容至500毫升，得到略現渾濁的，在0.1mol·L-1 NaAC溶液中的酪蛋白膠體。
2．等電點測定
按下表順序在各管中加入蛋白質膠液，並准確地加入蒸餾水和各種濃度的醋酸溶液，加入後立即搖勻。

觀察各管產生的混濁並根據混濁度來判斷酪蛋白的等電點。觀察時可用+，++，+++，表示渾濁度。

⑵ 在蛋白質等電子測定過程中,如何根據實驗現象判斷酪蛋白的等電點

根據實驗現象判斷酪蛋白的等電點的方法：
1）最小溶解度法。蛋白質在不同pH溶液中形成不同的濁度來測定，即最大濁度處的pH值為蛋白質的等電點值。渾濁最嚴重時的pH值，即為酪蛋白的等電點。
2） 等電聚焦法。等電聚焦完成後，切成膠條，測量不同段的pH值，並用三氯醋酸顯色，即可確定酪蛋白的等電點。

⑶ 等電點的測定方法

你配置水溶液，PH調到10，滴加稀鹽酸，同時測PH和電導率，作圖能求出來

⑷ 測量蛋白質等電點的方法有哪些謝謝

交錯分配法。

對一種特定的蛋白質，在不同鹽系統中，pH和其分配系數之間的關系應不同，而在等電點時，得到的均為不帶電時分子的分配系數。

對不同的鹽系統，其等電點時的分配系數應相等，兩條pH和分配系數關系的曲線必交於一點，該點所對應的pH值即為該特定蛋白質的等電點。根據這一原則測定蛋白質等電點的方法，稱為交錯分配法。

特性

蛋白質在溶液中有兩性電離現象。假設某一溶液中含有一種蛋白質。當pI=pH時該蛋白質極性基團解離的正負離子數相等，凈電荷為0，此時的該溶液的是pH值是該蛋白質的pI值。某一蛋白質的pI大小是特定的，與該蛋白質結構有關，而與環境pH無關。

在某一pH溶液中當pH>pI時該蛋白質帶負電荷，反之pH<pI時該蛋白質帶正電荷，pH=pI時該蛋白質不帶電荷。人體內pH=7.4；而體內大部分蛋白質的 pI<6； 所以人體內大部分蛋白質帶負電荷。

以上內容參考：網路-蛋白質等電點

⑸ 蛋白質等電點的測定方法

●方法：平板等電聚焦
●原理：蛋白質分子在含有載體兩性電介質形成的連續而穩定的線性pH梯度中進行電泳。但不自是按照等電點不同被分離。
●儀器：Bio-Rad Model 111Mini IEF Cell
●樣品要求：
●液體：濃度>3mg/ml；體積>200ul；固體：質量>200ug
●樣品純度>90%；含鹽量<3 0mM；分子量：一般要求大於1000Da
●常見影響測試情況:
1、蛋白質純度不足
2、含鹽量過高
3、蛋白質分子量太小，導致無法固定染色