蛋白質定量測定的方法有哪些

❶ 蛋白質定量測定的方法有哪些

定氮法，雙縮尿法（Biuret法）、Folin－酚試劑法（Lowry法）和紫外吸收法。考馬斯亮藍法（Bradford法）。
凱氏定氮 靈敏度低，適用於0.2~ 1.0mg氮，誤差為 ±2％ 費時
8～10小時 將蛋白氮轉化為氨，用酸吸收後滴定 非蛋白氮（可用三氯乙酸沉澱蛋白質而分離） 用於標准蛋白質含量的准確測定；干擾少；費時太長
雙縮脲法（Biuret法） 靈敏度低 1～20mg 中速 20~30分鍾 多肽鍵＋鹼性Cu2＋®紫色絡合物 硫酸銨；Tris緩沖液；某些氨基酸 用於快速測定，但不太靈敏；不同蛋白質顯色相似
紫外吸收法 較為靈敏 50～100mg 快速 5～10分鍾 蛋白質中的酪氨酸和色氨酸殘基在280nm處的光吸收 各種嘌吟和嘧啶；
Folin－酚試劑法（Lowry法） 靈敏度高 ～5mg 慢速 40～60分鍾 雙縮脲反應；磷鉬酸－磷鎢酸試劑被Tyr和Phe還原 硫酸銨；Tris緩沖液；甘氨酸；
各種硫醇 耗費時間長；操作要嚴格計時；顏色深淺隨不同蛋白質變化
考馬斯亮藍法(Bradford法) 靈敏度最高 1～5mg 快速5～15分鍾 考馬斯亮藍染料與蛋白質結合時，其lmax由465nm變為595nm 強鹼性緩沖液；
SDS 最好的方法；干擾物質少；顏色穩定； 顏色深淺隨不同蛋白質變化

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❸ 蛋白質定量測量方法除雙縮脲法外,還有哪些測定方法

蛋白質的定量定主要有直接紫外吸收法、Bradford法和Lorry法三種。

蛋白質中存在著含有共軛雙鍵的酪氨酸和色氨酸，所以任何一個蛋白質都具有280nm附近的紫外吸收峰，在此波長范圍內，蛋白質溶液的光密度OD280nm與其濃度呈正比關系。

改良的Bradford法，蛋白質與染料考馬斯亮藍G-250結合，在一定的線性范圍內，反應液595nm處吸光度的變化量與反應蛋白量成正比，測定595nm處吸光度的增加即可進行蛋白定量。

Lorry法。蛋白質與鹼性銅溶液中的Cu2+絡和使得肽鍵伸展，從而使暴露出的酪氨酸和色氨酸在鹼性銅條件下與福林試劑反應，產生藍色，在一定濃度范圍內，其顏色的深淺與蛋白質中的酪氨酸和色氨酸的含量成正比，由於各種蛋白質中的酪氨酸和色氨酸的含量各不相同，因此在測定時需使用同種蛋白質作標准。

中國葯典推薦的方法是Lorry法。蛋白質與鹼性銅溶液中的Cu2+絡和使得肽鍵伸展，從而使暴露出的酪氨酸和色氨酸在鹼性銅條件下與福林試劑反應，產生藍色，在一定濃度范圍內，其顏色的深淺與蛋白質中的酪氨酸和色氨酸的含量成正比，由於各種蛋白質中的酪氨酸和色氨酸的含量各不相同，因此在測定時需使用同種蛋白質作標准。
美國fda葯典推薦的是Bradford法，蛋白質與染料考馬斯亮藍G-250結合，在一定的線性范圍內，反應液595nm處吸光度的變化量與反應蛋白量成正比，測定595nm處吸光度的增加即可進行蛋白定量。
兩者大多數情況下是都能給較為精確的對蛋白質定量。

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