液相選用方法選不了怎麼辦

① 液相色譜怎麼選擇檢測方法

簡單說9個字「出得來」、「分得開」、「跑得快」

出得來：所要檢測的物質要能被檢測到。要針對物質的特性要考慮檢測器的選用及參數設定，以及流動洗脫力的強弱。
分得開：所有的檢測組份要能完全分離，之間不相互干擾。要考慮流動相溶劑的選擇；比例的優化；流動相PH的控制，是否要加離子對試劑；色譜柱的選型等凡是影響色譜分離因素都要考慮到。以進行優化。
跑得快：在滿足可檢測性與完全分離的條件下，進一步優化各項條件，以達到快速檢測，降低分析運行時間，提高檢測效率。

你所說的「10——90， 5——35,60——100，45——95等」應該是指的梯度洗脫吧？

② 如何使用液相色譜

現在一般說的就是高效液相色譜（HPLC），原理如下文，但具體的操作就要看具體的儀器了，因為國內外的不同廠家生產的操作方案可能有所不同，而且你去面試要使用HPLC的話建議你最好先去找台能使用的熟悉下，畢竟這玩意的價格不是一般的。而有些普通的液相色譜就很簡單了，只要你看懂了原理就能進行操作，沒有什麼特別的難度。

液相色譜法簡介

氣相色譜不能由色譜圖直接給出未知物的定性結果，而必須由已知標准作對照定性。當無純物質對照時，定性鑒定就很困難，這時需藉助質譜、紅外和化學法等配合。另外大多數金屬鹽類和熱穩定性差的物質還不能分析。此缺點可高效液相色譜法來克服。在經典液相色譜的基礎上，引入了氣相色譜的理論與技術，在70年代初建立了高效液相色譜分析法（以HPLC表示）。在常壓下操作的液相色譜，分離一個樣品往往長達幾小時至幾十小時，因此工作效率很低。人們曾對這種經典液相色譜法試用了柱前加壓或柱後減壓的辦法來提高流速，以縮短分離時間，但是結果失敗了。根據液相色譜理論，因為隨著載液（流動相）流速的提高，板高則增大，所以柱效會顯著降低。隨著生產技術的提高，人們製成了細小（<10μm）而高效的填充物，從而使柱效大大提高。但是隨著填充物粒度的減小，柱壓降顯著增大，為了得到合理的載液流速，使用了高壓；輸液泵，使流速達到1～10mL/min。從而使分析一個多組分樣品只需幾分鍾到幾十分鍾時間。隨著高效固定相、高壓泵和高靈敏度檢測器以及電子技術和計算機技術的應用，70年代以業逐步實現了液相色譜分析的高效、高速、高靈敏和自動化操作。因此人們常稱它為高效液相色譜或現代液相色譜，以區別於經典液相色譜。高效液相色譜法的分類與經典液相色譜法一致。按固定相的聚集狀態不同分為液固色譜法和液液色譜法。按分離原理不同分為吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜和凝膠色譜法四類。

高效液相色譜所用基本概念：

保留值等色譜分析有關術語，以及分配系數、分配比、塔板高度、分離度、選擇性等方面均與氣相色譜相一致；高效液相色譜所用基本理論：塔板理論與速率理論也與氣相色譜一致。因液相色譜以液體代替氣相色譜中的氣體作流動相，則速率議程H=A+B/?+C?。式中：縱向擴散項（分子擴散項）B/?對板高的影響與氣相色譜不同，由於液相色譜中組分分子在流動相中的擴散系數Dm僅為氣相色譜中的萬分之一，因此縱向擴散項對板高的影響可以忽略不計。於是影響液相色譜的主要因素是傳質項Cu。由圖14—可知，氣相色譜（GC）的流動相流速u增大時，板高H顯著增大（即柱效顯著降低），而液相色譜（LC）的流速增大時，板高增大不顯著（即柱效降低不顯著）。這說明高效液相色譜也有很高的分離效能，此外，氣相色譜的載氣權數種，其性質差別也不大，對分離效果影響也不大。而液相色譜的載液種類多，性質差別也大，對分離效果影響顯著。因此流動相的選擇很重要，並且在選擇流動相對應注意以下幾點：流動相對樣品有適當的溶解度，但不與樣品發生化學反應，也不與固定液互溶；流動相的純度要高（至少分析純）、粘度要小，以免帶進雜質和組分在流動相中擴散系數下降；流動相應與所用檢測器相匹配，不應對組分檢測產生干擾作用。高效液相色譜不但具有高效、高速、高靈敏度的特點，還由於它的流動相（載液）種類比氣相色譜的流動相（載氣）多，因此可選用兩種或多種不同比例的液體作流動相，從機時可提高選擇性。此外，液相色譜的餾分比氣相色譜易於收集。便於為紅外、核磁等方法確定化合物結構提供純樣品。由於高效液相色譜法具有以上特點，它適於分離、分析沸點高、熱穩定性差、分子量大（大於400）的氣相色譜法不能或不易分析的許多有機物和一些無機物，而這些物質占化合物總數的75～80%。因此它已廣泛用於核酸、蛋白質、氨基酸、維生素、糖類、脂類、甾類化合物、激素、生物鹼、稠環芳烴、高聚物、金屬螯合物、金屬有機化合物以及多種無機鹽類的分離和分析。但是，高效液相色譜的固定相的分離效率、檢測器的檢測范圍以及靈敏度等方面，目前還不如氣相色譜法。此外對於氣體和易揮發物質的分析方面也遠不如氣相色譜法，因此高效液相色譜法和氣相色譜法配合使用可互相取長補短，相輔相成。

1.分離原理
凝膠色譜，又稱空間排阻色譜。它是利用某些凝膠對混合物各組分因分子量不同，其阻滯作用也不同而進行分離、分析的方法。凝膠色譜的分離要理和其它色譜法不同，它類似於分子篩的作用，但凝膠的孔徑要比分子篩大得多，一般為幾百至幾千埃。色譜柱內填充具有一定大小孔穴的凝膠。當樣品進入色譜柱後，不同大小的樣品分子（圖14—2中以黑點表示）隨流動相沿凝膠顆粒（圖14—2中以空心圈表示）外部間隙和凝膠孔穴旁流過，體積在的分子因不能滲透到凝膠孔穴里而得到排阻，因此較為順利地通過凝膠柱而較早地被流動相沖洗出來。中等體積的分子產生部分滲透作用，小分子可滲透到凝膠孔穴里去而受阻滯，因有一個平衡過程而較晚地被流動相沖洗出來。這樣，試樣組分基本上按分子大小受到不同阻滯而先後流出色譜柱，從而實現分離目的。光凝膠色譜採用水溶液作流動相進，稱為過濾凝膠色譜（HFC），而用有機溶劑為流動相時，稱為凝膠滲透色譜（GPC）。

2．固定相
凝膠色譜的固定相凝膠，是含有大量液體（一般是水）的柔軟而富於彈性的物質，是一種經過交聯而具有立柱網狀結構的多聚體。根據凝膠的交聯程度和含水量的不同，分了軟質、半硬質和硬質三種。軟質凝膠（如葡聚糖凝膠、瓊脂糖凝膠等）交聯度低，膨脹度大，容量大，可壓宿，不能用於高壓（使用壓力低於3.5kg/㎝2或更低），主要用於含水體系的常壓凝膠色譜，半硬質凝膠（如苯乙烯一二乙烯基苯交聯共聚凝膠），容量中等，滲透性較高，壓力可用到70kg/㎝2。適用於非水溶劑流動相；硬質凝膠（如多孔硅膠、多也玻球等），膨脹度小，不可壓縮，滲透性好，可耐高壓，適於高流速下操作。

3．流動相
在凝膠色譜中，為提高分率效率，多採用低粘度、與樣品折光指數相差大的流動相。常用的流動相有苯、甲苯、鄰二氯苯、二氯甲烷、1，2一二氯乙烷、氯仿、水等。

③ 島津高效液相無法進樣怎麼辦 機器顯示已有批處理隊列待機，但是點不開隊列視圖怎麼辦呢

島津自動進樣器是電腦控制，完全自動進樣的,包括洗針、取樣、進樣、啟發記錄這些動作。

以下為可能出現的問題及解決方法，可視情況進行選擇測試

1. 自動檢測樣品架按鈕點擊後，不一定出現的就是他找到的樣品架。可能是虛的檢測樣品架。可以將方法中檢測樣品架下拉菜單拉到任意一個其他樣品架後，再次點擊檢測樣品架，看是否有改成正確的樣品架顯示。

2. 如果1中沒有自動修改成正確的樣品架，可議看下進樣器面板屏幕左上角顯示的左邊的樣品架類型字母L後面是不是正確的樣品架，還是none，如果是none，可嘗試將樣品架重新推到底。

島津自動進樣器

④ 楂樻晥娑茬浉鑹茶氨媯嫻嬪櫒娉㈤暱閫夋嫨闂棰

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⑤ 高效液相色譜法常出現的故障及解決的方法

高效液相色譜儀使用中常見故障及解決方法 高效液相色譜儀使用中常見故障及解決方法 高效液相色譜儀使用中常見故障及解決方法
1 概述。高效液相色譜儀系統液相色譜儀主要由貯液瓶、泵、進樣器、柱子、柱
溫箱、檢測器、數據處理系統組成。對於整個系統而言，柱子、泵和檢測器是核
心部件同時也是易出問題的主要部位。
2 常見問題及解決方法。高效液相作為一種高精密儀器，如果在使用過程中不按
照正確操作的話，就容易導致一些問題。其中最常見的就是柱壓問題、漂移問題、
峰型異常問題。
2.1 柱壓問題。柱壓問題是使用高效液相色譜過程中需要密切注意的地方，柱壓
的穩定與色譜圖峰形的好壞、柱效、分離效果及保留時間等密切相關。所謂柱壓
穩定並不是指壓力值穩定於一個恆定值而是指壓力波動范圍在50PSI（3.3 Bar）
之間（在使用梯度洗脫時，柱壓平穩緩慢的變化是允許的）。壓力過高、過低都
屬於柱壓問題。
2.1.1 壓力過高。這是高效液相在使用中最常見的問題，指的是壓力突然升高，
一般都是由於流路中有堵塞的原因。此時，我們應該分段進行檢查。(1).首先斷
開真空泵的入口處，此時PEEK管里充滿液體，使PEEK管低於溶劑瓶，看液體是否
自由滴下，如果液體不滴或緩慢滴下，則是溶劑過濾頭堵塞。處理方法：用30%
的硝酸浸泡半個小時，在用超純水沖洗干凈。如果液體自由滴下，溶劑過濾頭正
常，在檢查； (2).打開Purge閥，使流動相不經過柱子，如果壓力沒有明顯下降，
則是過濾白頭堵塞。處理方法：將過濾白頭取出，用10%的異丙醇超聲半個小時。
如果壓力降至100PSI (6.7 Bar)以下，過濾白頭正常，在檢查； (3).把色譜柱
出口端取下，如果壓力不下降，則是柱子堵塞。處理方法：如果是緩沖鹽堵塞，
則用95%的水沖至壓力正常。如果是一些強保留的物質導致堵塞，則要用比現在
流動相更強的流動相沖至壓力正常。假如按上面的方法長時間沖洗壓力都不下
降，則可考慮將柱子的進出口反過來接在儀器上，用流動相沖洗柱子。這時，如
果柱壓仍不下降，只有換柱子入口篩板，但一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，
所以盡量少用。
2.1.2 壓力過低。壓力過低的現象一般是由於系統泄漏，處理方法：尋找各個接
口處，特別是色譜柱兩端的介面，把泄漏的地方旋緊即可。當然還有一個原因就
是泵里進了空氣，但此時表現的往往是壓力不穩，忽高忽低，更嚴重一點會導致
泵無法吸上液體。處理方法：打開Purge閥，用3~5ml/min的流速沖洗，如果不行，
則要用專用針筒在排空閥處借住外力將氣泡吸出。
2.2．漂移問題主要包括基線漂移和保留時間漂移。
2.2.1基線漂移。一般說來，機器剛起動時，基線容易漂移，大概要半個小時的
平衡時間，如果你用了緩沖溶液或緩沖鹽，還有就是在低波長下（220nm）平衡
時間相對會比較長，但如果你在實驗過程中發現基線漂移，則你要考慮下面的原
因： 1、柱溫波動。解決方法：控制好柱子和流動相的溫度，檢查是否有打開的
窗戶或空調對著柱溫箱。2、流通池被污染或有氣體。解決方法：用甲醇或其他
強極性溶劑沖洗流通池（最好斷開柱子）。如有需要，可以用1N的硝酸（不要用
鹽酸）。3、紫外燈能量不足。解決方法：更換新的紫外燈4、流動相污染、變質
或由低品質溶劑配成。解決方法：檢查流動相的組成，使用高品質的化學試劑及
HPLC級的溶劑。5、樣品中有強保留的物質（高K』值）以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現出一個逐步升高的基線。解決方法：使用保護柱，如有必要，在進樣之間。
在分析過程中，定期用強溶劑沖洗柱子。6、檢測器沒有設定在最大吸收波長處。
解決方法：將波長調整至最大吸收波長處7、流動相的PH值沒有調節好。解決方
法：加適量的酸或鹼調至最佳PH值
2.2.2 保留時間漂移。保留時間重現是液相性能好壞的一個重要標志，同一種東
西，兩次的保留時間相差不要超過 15s，超過了半分鍾可看做保留時間漂移，就
無法進行定性，你要考慮以下原因： 1、溫控不當。解決方法：調好柱溫，檢查
是否有打開的窗戶或空調對著柱溫箱。2、流動相比例變化。解決方法：檢查四
元泵的比例閥是否有故障 3、色譜柱沒有平衡。解決方法：在每一次運行之前給
予足夠的時間平衡色譜柱 4、流速變化。解決方法：重新設定流速 5、泵中有氣
泡。解決方法：、 從泵中除去氣泡 2.3 峰型異常問題峰型問題是液相的主要問題，
在做液相過程中，我們就是要變換不同的條件來改善不好的峰型，對於各種各樣
的異常峰，要區別對待，從主要問題出發，一個一個加以解決。1、色譜圖中未
出峰。解決方法：系統未進樣或樣品分解；泵未輸液或流動相使用不正確；檢測
器設置不正確；針對以上情況成因作相應調整即可。2、一個峰或幾個峰是負峰。
解決方法：流動相吸收本底高；進樣過程中進入空氣；樣品組分的吸收低於流動
相。 3、所有峰均為負峰。解決方法：信號電纜接反或檢測器輸出極性設置顛倒；光
學裝置尚未達到平衡。
4、所有峰均為寬峰。解決方法：系統未達到平衡；溶解樣品的溶劑極性比流動
相差很多；色譜柱尺寸及類型選擇不正確；色譜柱或保護柱被污染或柱效降低；
溫度變化造成的影響。
5、所出峰比預想的小。解決方法：樣品黏度過大；進樣品故障或進樣體積誤差；
檢測器設置不正確．定量環體積不正確；檢測池污染；檢測器燈出現問題。
6、出現雙峰或肩峰。解決方法：進樣量過大；樣品濃度過高；保護柱或色譜柱
柱頭堵塞；保護拄或色譜柱污染或失效；柱塌陷或形成短通道。
7、前伸峰。解決方法：進樣量或樣品濃度高；溶解樣品的溶劑較流動相極性強；
保護柱或色譜柱污染或失效。
8、拖尾峰。解決方法：柱超載，降低樣品量；增加柱直徑採用較高容量的固定
相；峰干擾，對樣品進行清潔過濾；調整流動相；硅羥基作用，加入三乙胺，用
鹼致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動相 pH 值；柱內燒結不銹鋼失效，更
換燒結不銹鋼；加在線過濾器，對樣品進行過濾；死體積或柱外體積過大，將連
接點降至最低；盡可能使用內徑較細的連接管；柱效下降，更換柱子；採用保護
柱，對柱子進行再生。
9、出現平頭峰。解決方法：檢測器設置不正確；進樣體積太大或樣品濃度太高。
10、出現鬼峰。解決方法：進樣閥殘余峰，在每次進完樣後用充足的時間來平衡
和清洗系統；樣品中存在未知物，改進樣品的預處理；流動相污染，更換新流動
相，盡可能現配現用，隔夜的流動相再次使用時要過濾；盡可能使用 HPLC 級試
劑；流路中有小的氣泡，打開 Purge 閥，加大流速排除。
11、 結語。以上內容只是對液相色譜中出現的常見的問題進行了分析，在故障
排除時要遵守以下原則：一次只改變一個因素，確定假定因素與問題之間的聯系；
如果通過更換組件來排查故障時要注意將拆下的完好組件裝回原位，避免浪費；
這是成功進行故障排除的關鍵。總之，在使用高效液相色譜時一定要注意樣品的
前處理與儀器的正確操作和保養。