❶ 細胞在液氮罐里怎麼儲存
細胞可以放在凍存管里,吊在液氮罐里,如果存放的數量多,可以選擇使用液氮罐提籃(大口徑液氮罐另配)
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❸ 動物細胞培養中細胞如何凍存
細胞凍存的原則是:凍存緩慢降溫,復甦快速升溫。不同的動物細胞稍微有點不同,下面是一般的方法:
(一)細胞凍存
1. 配製含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血清的凍存培養液;
2. 取對數生長期的細胞,用胰蛋白酶把單層生長的細胞消化下來,懸浮生長的細胞則直接將細胞移至15ml離心管中、;
3. 離心1000rpm,5min;
4. 去除胰蛋白酶及舊的培養液,加入適量配製好的凍存培養液,用吸管輕輕吹打使細胞均勻,計數,調節凍存液中細胞的最終密度為5×106/ml~1×107/ml;
5. 將細胞分裝入凍存管中,每管1~1.5 ml;
6. 在凍存管上標明細胞的名稱,凍存時間及操作者;
7. 凍存:標準的凍存程序為降溫速率-1~-2℃/ min;當溫度達-25℃以下時,可增至-5℃~-10℃/
min;到-100℃時,則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ,然後放入-70℃冰箱中過夜,取出凍存管,移入液氮容器內。
(二) 細胞復甦
1. 從液氮容器中取出凍存管,直接浸入37℃溫水中,並不時搖動令其盡快融化。
2. 從37℃水浴中取出凍存管,打開蓋子,用吸管吸出細胞懸液,加到離心管並滴加10倍以上培養液,混勻;
3. 離心, 1000rpm,5min;
4. 棄去上清液,加入含10%小牛血清培養液重懸細胞,計數,調整細胞密度,接種培養瓶,37℃培養箱靜置培養;
5. 次日更換一次培養液,繼續培養。