山葯多糖純化方法有哪些

❶ 多糖的純化方法與哪些

ctab即十六烷基三甲基溴化銨，是一種陽離子去污劑，具有從低離子強度的溶液中沉澱核酸和酸性多聚糖的特性，在這種條件下，蛋白質和中性多聚糖仍留在溶液里，在高離子強度的溶液里，ctab與蛋白質和大多數酸性多聚糖以外的多聚糖形成復合物，只是不能沉澱核酸。因此，ctab可以用於從大量產生粘多糖的有機體如植物以及某些革蘭氏陰性菌（包括e.coli的某些株）中制備純化dna
去垢劑(表面活性劑)是一類即具有親水基又具有疏水基的物質，一般具有乳化、分散、和增溶作用，可分陰離子、陽離子和中性去垢劑等多種類型，中性去垢劑在蛋白提取鍾應用的較多。
a．中性去垢劑
又稱非離子表面活性劑，對蛋白質的變性作用影響較少，宜於蛋白質或酶提取之用。一般市售中性去垢劑有聚乙二醇類，如peg200；多元醇類表面活性劑，如山梨醇、司盤類和吐溫類；聚氧乙烯脂肪醇醚，如苄澤類、平平加類；聚氧乙烯烷基苯酚醚，如igepal
co、乳化劑op、triton、pluronic(用作消泡劑、潤濕劑、增溶劑)、泡敵。中性去垢劑作用後可通過sephadex
lh-50柱除去；也可直接上deae-sephadex柱層析分離目的蛋白，不必先除去去垢劑。
b．陰離子去垢劑
常見的有十二烷基硫酸鈉和十二烷基璜酸鈉。前者可促進核蛋白的溶解，將核酸釋放出來，並對核酸酶有一定抑製作用，常用於核酸的提取。
c．陽離子去垢劑
如潔爾滅、新潔爾滅、ctab、cpc、zeph、克菌定、消毒凈（tmpb）、杜滅芬等，消毒滅菌類居多。
d．天然表面活性劑
又稱為生物表面活性劑，包括種類較為廣泛，如各種樹膠（阿拉伯膠、杏膠、桃膠、果膠）、明膠、皂甙、卵磷脂、豆磷脂、瓊脂、海藻酸鈉、酪蛋白、膽甾醇、膽酸類、多糖類（如環糊精）等。
e．兩性表面活性劑
在鹼性水溶液中呈陰離子表面活性劑的性質，起泡性好，去污力也強；在酸性溶液中則呈現陽離子表面活性劑特徵，其殺菌性很強。
蛋白質變性劑的作用是破壞蛋白質的次級鍵，如氫鍵、鹽鍵和疏水力，引起天然構象的解體；它們並不破壞共價鍵，如肽鍵和二硫鍵，故不涉及一級結構的改變。變性劑有溶解型和沉澱型兩類，sds、尿素和胍鹽是有效的溶解型變性劑，而三氯乙酸、甲醇、和氯仿/異戊醇是有效的沉澱變性劑。一般而言，變性劑應用時常大大過量，破壞氫鍵的變性劑用量至少兩倍於氨基酸的克分子數，如1克蛋白質可可結合1.4g。
sds溶於水可達25%，對溫度敏感，w/v貯存液最為方便。需要注意的是sds的鉀鹽是不溶性的，所以sds溶液中要避免混入鉀鹽。
尿素極易溶於水，可達10mol/l,在8mol/l以上要注意溫度以防止沉澱。尿素在水中緩慢分解形成氨及高度活性的氰酸離子，故要防止高溫。
三氯乙酸與過氯酸（tca，pca）都是極好的沉澱劑，能沉澱蛋白質和核酸，前者應用更為廣泛。

❷ 粗多糖提純的方法有哪些

一、多糖的提取
1 熱水浸提法
其步驟為：原料→粉碎→脫脂→粗提（2－3次）→吸濾或離心→沉澱→洗滌→乾燥
2 微波輔助提取法
3超聲波輔助法與常規提取法相比,具有提取時間短、產率高、無需加熱等優點[17].
4 索氏提取法：（索氏提取器中,石油醚）
5 醇提法：（乙醇）
醇提法方法簡單,易於操作,但提取率較低,乙醇使用量大,不宜大規模提取使用.
6 其它方法：
多糖的提取方法還有稀鹼液浸提法、稀酸液浸提法、酶法等.但由於稀酸、稀鹼條件下,易使多糖發生糖苷鍵的斷裂,部分多糖發生水解而使多糖的提取率減少,因培好廳而很多試驗中避免採用稀鹼液浸提法和稀酸液浸提法.
二、多糖的純化
多糖中雜質除去方法 粗多糖中往往混雜著蛋白質、色素、低聚糖等雜質,必須分別除去.
1 除蛋白質常用的方法有
1) 沙維積法（Sevag法）：
2) 三氟三氯乙烷法
3) 三氯醋酸法
4) 酶解法：在樣品溶液中加入蛋白質水解酶,如胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、鏈霉蛋白酶等,使樣品中的蛋白質降解.通常將其與Sevag法綜合使用除蛋白質效果較好.
5 )鹽酸法：取樣品濃縮液,用2mol/L鹽酸調節其PH至3,放置過夜,在3000r/min條件下離心,棄去沉澱,即脫去蛋白質.
6) 其它方法：可以加入5%ZnSO4溶液和飽和Ba(OH)2溶液,振盪後離心去蛋白.此法除蛋白不夠徹底,可結合Sevag法使用.還可在提取液中加入50%的TCA溶液至沉澱完全,在4000r/min的條件下離心10min,收集上清液,即為除蛋白液.
還有人使襪兄用4:1的氯仿-乙醇溶液除蛋白,將混合液清搖,再靜置,取上清液.此過程需重復多次方可除盡蛋白.
除去蛋白質的樣品用紫外分光光度計檢驗,觀察在280mm處是否有吸收,如果無吸收則表明蛋白質已經除盡.
2 除色素
1)活性炭
2)弱鹼性樹脂:對於植物來源的多糖,可能含有酚型化合物而顏色較深,這類色素大多呈負性離子,不能用活性炭吸收劑脫色,可用弱鹼性樹脂DEAE纖維素或DuoliteA－7來吸附色素.
3)氧化脫色:若糖和色素時結合的,易被DEAE纖維素吸附,不能被水洗脫,這類色素可進行氧化脫色：以濃氨水或NaOH液調至PH8.0左右,50℃以下滴加H2O2至淺黃色,保溫2小時.
4)乙醚和無水乙醇洗滌：依次用丙酮、無水乙醚和無水乙醇洗滌多糖,即可得到較為純凈的多糖.此法較為簡單,便於操作,多配隱糖損失也較小.
5）用4:1的氯仿-正丁醇除色素.操作簡單,多糖有一定損失.
6）發酵來源的多糖顏色一般較淺,色素含量較少,一般可不除色素.
3 除低聚糖等小分子雜質
1）採用逆向流水透析法.即准備好一桶蒸餾水,用一根導管將水通入透析袋的燒杯底部,另用一根導管將水引出,根據水量控制流速,使水緩慢流動48小時.這樣得到的就是多糖的半精品.
2）利用溶液濃度擴散效應,將分子量小的物質如無機鹽、低聚糖等從透析袋滲透到袋外的蒸餾水中,不斷換水即可保持濃度差,從而除盡小分子雜質.具體的做法是根據多糖溶液的體積截取相應長度的透析袋,用透析夾夾住一端,灌入多糖液,離液面2－3cm處夾緊透析袋,置於一大燒杯中,注入蒸餾水至完全浸沒透析袋後,用磁力攪拌器慢速攪拌,每12小時換一次水,重復3－4次.

❸ 多糖類的提取方法

一、提取與純化動植物中存在的多糖或微生物胞內多糖，因其細胞或組織外大多有脂質包圍，要使多糖釋放出來，第一步就是去除表面脂質，常用醇或醚迴流脫脂。第二步將脫脂後的殘渣以水為主體的溶液提取取多糖 （即冷水，熱水，熱或冷的0.1-1.0mol/L NaOH，熱或冷的1%醋酸或1%苯酚等），這樣提取得到的多糖提取液含有許多雜質，主要是無機鹽，低分子量的有機物質及高分子量的蛋白質、木質素等。第三步則要除去這些雜質，對於無機鹽及低分子量的有機物質可用透析法、離子交換樹脂或凝膠過濾法除去；對於大分子雜質可用酶消化 （如蛋白酶．木質素酶） ，乙醇或丙酮等溶劑沉澱法或金屬絡合物法。多糖提取液中除去蛋白質是一個很重要的步驟，常用的方法有Sevag法、三氟三氯乙烷法、三氯乙酸法，後者較為劇烈，對於含呋喃糖殘基的多糖由於連接鍵不穩定，所以不宜使用。但該法效率較高，操作簡便，植物來源的多糖常採用該法。上述三種方法均不適合於糖肽，因為糖肽也會像蛋白質那樣沉澱出來。除去蛋白質後，應再透析一次，選用不同規格的超濾膜和透析袋進行超濾和透析，可以將不同分子大小的多糖進行分離和純化，該法在除去小分子物質十分實用，同時能滿足大生產的需要。具有廣闊的應用前景。至此，得到的提取液基本上是沒有蛋白質與小分子雜質的多糖混合物。一般來講，通過上述方法所得到的是多糖的混合物，如果要得到單一的多糖，還必須對該混合物進行純化。柱層析在多糖的純化較為常用，常分為兩類：一是只有分子篩作用的凝膠柱層析， 它根據多糖分子的大小和形狀不同而達到分離目的，常用的凝膠有葡聚糖凝膠及瓊脂糖凝膠，以及性能更佳的Sephacryl等。洗脫劑為各種濃度的鹽溶液及緩沖液，其離子強度不應低於0.02mol/L。二是離子交換層析，它不僅根據分子量的不同，同時也具有分子篩的作用，常用的交換劑有DEAE-纖維素、DEAE-葡聚糖和 DEAE-瓊脂糖等，此法適合於分離各種酸性，中性多糖和粘多糖。多糖的純化還可用其他方法，如制備性高效液相層析、制備性區帶電泳，親和層析等，這些方法有時對制備一些小量純品供分析用是很有用處的。