1. 多糖提取中水提法的具體步驟
水對植物組織的穿透力強,提取效率高,在生產上使用安全、經濟。用水作溶劑來提取多糖時,可以用熱水浸煮提取,也可以用冷水浸提。一般植物多糖提取採用熱水浸提法,該法所得多糖提取液可直接或離心除去小溶物,或者利用多糖不溶於高濃度乙醇的性質,沉澱提純多糖。但由於不同性質或不同相對分子質量的多糖沉澱所需乙醇濃度不同,它也可以用於樣品中不同多糖組分的分級分離。還可按不同性質在粗分階段利用混合溶劑提取法對植物中不同的多糖進行分離,其中,以乙醇沉澱最為普遍,但以根莖為主的植物體,細胞壁多糖含量高,熱水直接提取率不高,此時為破壞細胞壁,增加多糖的溶出,有兩種方法:一為酶解,二位弱鹼溶解。
純手打,望採納。
2. 多糖提取方法有哪些
溶劑提取法
溶劑提取法是從植物中提取多糖的常用方法,溶劑提取法首先要考慮的因素是選擇溶劑,一般應遵循相似相溶的原則,即極性強的有效成分選擇極性強的溶劑,極性弱的成分選擇極性弱的溶劑。多糖是極性大分子化合物,應選擇水、醇等極性強的溶劑。在所有溶劑中,水是典型的強極性溶劑,對植物組織的穿透力
強,提取效率高,在生產上使用安全。它能用於各種植物多糖,被廣泛應用。用水作溶劑來提取多糖時,可以用熱水浸煮提取,也可以用冷水浸提。水提取的多糖大多是中性多糖。一般植物多糖提取多數採用熱水浸提法,該法所得多糖提液可直接或離心除去肢高不溶物;或者利用多糖不溶於高濃度乙醇的性質,用高濃度乙醇沉澱提純多糖;但由於不同性質或不同相對分子質量的多糖沉澱所需乙醇濃度不同,它也可以用於樣品中不同多糖組分的分級分離;還可按多糖不同性質在粗分階段利用混合溶劑提取法對植物中不同的多糖進行分離;其中,以乙醇沉澱最為普遍。劉青梅等在紫菜粗多糖提取方式研
究中,熱水提取控制條件為:溫度為20~100℃,水與紫
菜的液固質量比為50:1,提取時間30~180min,經多次
試驗最終得率為2.05%。周峙苗得到熱水浸提羊棲菜
多糖的最佳因素:浸提溫度為煮沸(102℃),ph為3.0,
浸提時間為3h,液固質量比為40:1。李戰對三種紫球
藻的提取工藝研究表明,三種紫球藻的最佳提取工藝
各不相同。銅綠紫球藻的最優提取工藝為乙醇濃度
5%,乙醇用量為3倍體積,醇沉時間為1.5h。氯仿與正
丁醇的比例4:1,樣液與sevag試劑的比例1:2,作用時
間為15min。淡色紫球藻的最優提取工藝為乙醇濃度
75%,乙醇用量為2倍體積,醇沉時間為1h,氯仿與正
丁醇的比例3:1,樣液與sevag試劑的比例1:2,作用時
間為45min。血色紫球藻的最優提取工藝為乙醇濃度
50%。乙醇用量為1倍體積,醇沉時間為0.5h,氯歷陵尺仿與
正丁醇的比例4:1,樣液與sevag試劑的比例2:1,作用
時間為45min。
酸鹼提取法
有些多糖適合用稀酸或鹼溶液提取,才能得到更
高的提取率。但酸鹼提取法有其特殊性,因多糖類的不
同而異。只在一些特定的植物多糖提取中佔有優勢,而
且即使有優勢,在操作上還應嚴格控制酸鹼度。因為
某些多糖在酸性或者鹼性較強時,可能引起多糖中糖
苷鍵的斷裂。另外,稀酸、稀鹼提取液應迅速中和或迅
速透析,濃縮與醇析而獲得多糖沉澱。趙宇等對海篙
子多糖的提取方法研究發現,從硫酸根含量及粗多糖
產率看酸提方法好於水提方法。具體方法為:100g海
篙子乾粉,加入1000ml 0.1mo1/l hcl溶液提取。室溫
攪拌1h後過濾,重復操作三遍,合並濾液;濾液減壓濃
縮至總體積的1/5,再加入95%乙醇至乙醇濃度達
30%,沉澱,離心除去沉澱中的褐藻酸,繼續向上清液
中加入乙醇至乙醇濃度達7%。室溫放置過夜使沉澱
完全,離心,沉澱乾燥得海篙子粗多糖,多次試驗算得
平均產率為3.35%。
孟憲元等在茜草多糖提取研究中發現酸提相對
多於水提,以稀酸提取茜草多糖,產品純度較高。具體
方法如下茜草根粗粉1000g 5%hcl浸泡、離心、取上
清液加入etoh並調節至濃度為7%,靜置,2500rpm
離心,收集棕色沉澱物,95%etoh洗滌3次,用45%
hcl溶解。加1%活性炭脫色,真空抽濾,濾液4℃過
夜,棄去容器底部少許沉澱物。溶液置透析袋內,逆水
法透析3d,冷凍乾燥,得白色粉末狀多糖約10g。
hayashi katsuhiko發明了一種從綠色藻類中提取酸汪耐
性多糖的方法,而這種多糖用常規的熱水法是無法得到的。具體過程為:將乾燥的綠藻粉末製成懸浮液,熱
水浸泡提取或將含水綠藻直接用熱水提取後離心分
離,取粘稠的固狀物,加入鹼水,在ph≥10的條件下
再進行攪拌提取,鹼水提取液在攪拌的同時加入酸水
調節ph值為3.0~4.0,靜置沉降後離心得酸性多糖。
1.3生物酶提取法
酶技術是近年來廣泛應用到有效成份提取中的一
項生物技術,在多糖的提取過程中,使用酶可降低提取
條件,在比較溫和的條件中分解植物組織,加速多糖的
釋放或提取。此外,使用酶還可分解提取液中澱粉、果
膠、蛋白質等的產物,常用的酶有蛋白酶,纖維素酶,果
膠酶等。孟江研究不同酶對大棗渣多搪提取效果的
影響,根據多糖得率、多糖含量及蛋白質含量進行綜合
評分得到最適合的酶為復合酶2(先胰蛋白酶提取,後
木瓜蛋白酶提取),接下來依次是木瓜蛋白酶、復合酶、
(木瓜蛋白酶+胰蛋白酶)、胰蛋白酶、胃蛋白酶
(ph=7.0)、胃蛋白酶(ph=2.0)。復合酶2作用條件溫
和,多糖得率及含量較高,且蛋白含量較低,實為一種
理想的酶提取劑。通過進一步正交實驗考察得出最佳
工藝:先用胰蛋白酶3%,40倍體積在ph=7.0,65℃溫
浸1.5h後,再加木瓜蛋白酶2.5%,在ph=7.0,50℃水
溫浸1h,過濾殘渣加40倍體積水,迅速升溫至80℃,
然後溫浸1.5h。
此外,植物多糖的提取方法還有超濾法,超聲波強
化法,微波法等等。植物多糖的提取方法和技術在不斷
改進和創新,但對於同一種方法和技術又需在不同植
物多糖的提取中研究考察。在選取提取分離方法的同
時,應當根據目標多糖的特點、物理化學性質,綜合比
3. 粗多糖提純的方法有哪些
一、多糖的提取
1 熱水浸提法
其步驟為:原料→粉碎→脫脂→粗提(2-3次)→吸濾或離心→沉澱→洗滌→乾燥
2 微波輔助提取法
3超聲波輔助法與常規提取法相比,具有提取時間短、產率高、無需加熱等優點[17].
4 索氏提取法:(索氏提取器中,石油醚)
5 醇提法:(乙醇)
醇提法方法簡單,易於操作,但提取率較低,乙醇使用量大,不宜大規模提取使用.
6 其它方法:
多糖的提取方法還有稀鹼液浸提法、稀酸液浸提法、酶法等.但由於稀酸、稀鹼條件下,易使多糖發生糖苷鍵的斷裂,部分多糖發生水解而使多糖的提取率減少,因培好廳而很多試驗中避免採用稀鹼液浸提法和稀酸液浸提法.
二、多糖的純化
多糖中雜質除去方法 粗多糖中往往混雜著蛋白質、色素、低聚糖等雜質,必須分別除去.
1 除蛋白質常用的方法有
1) 沙維積法(Sevag法):
2) 三氟三氯乙烷法
3) 三氯醋酸法
4) 酶解法:在樣品溶液中加入蛋白質水解酶,如胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、鏈霉蛋白酶等,使樣品中的蛋白質降解.通常將其與Sevag法綜合使用除蛋白質效果較好.
5 )鹽酸法:取樣品濃縮液,用2mol/L鹽酸調節其PH至3,放置過夜,在3000r/min條件下離心,棄去沉澱,即脫去蛋白質.
6) 其它方法:可以加入5%ZnSO4溶液和飽和Ba(OH)2溶液,振盪後離心去蛋白.此法除蛋白不夠徹底,可結合Sevag法使用.還可在提取液中加入50%的TCA溶液至沉澱完全,在4000r/min的條件下離心10min,收集上清液,即為除蛋白液.
還有人使襪兄用4:1的氯仿-乙醇溶液除蛋白,將混合液清搖,再靜置,取上清液.此過程需重復多次方可除盡蛋白.
除去蛋白質的樣品用紫外分光光度計檢驗,觀察在280mm處是否有吸收,如果無吸收則表明蛋白質已經除盡.
2 除色素
1)活性炭
2)弱鹼性樹脂:對於植物來源的多糖,可能含有酚型化合物而顏色較深,這類色素大多呈負性離子,不能用活性炭吸收劑脫色,可用弱鹼性樹脂DEAE纖維素或DuoliteA-7來吸附色素.
3)氧化脫色:若糖和色素時結合的,易被DEAE纖維素吸附,不能被水洗脫,這類色素可進行氧化脫色:以濃氨水或NaOH液調至PH8.0左右,50℃以下滴加H2O2至淺黃色,保溫2小時.
4)乙醚和無水乙醇洗滌:依次用丙酮、無水乙醚和無水乙醇洗滌多糖,即可得到較為純凈的多糖.此法較為簡單,便於操作,多配隱糖損失也較小.
5)用4:1的氯仿-正丁醇除色素.操作簡單,多糖有一定損失.
6)發酵來源的多糖顏色一般較淺,色素含量較少,一般可不除色素.
3 除低聚糖等小分子雜質
1)採用逆向流水透析法.即准備好一桶蒸餾水,用一根導管將水通入透析袋的燒杯底部,另用一根導管將水引出,根據水量控制流速,使水緩慢流動48小時.這樣得到的就是多糖的半精品.
2)利用溶液濃度擴散效應,將分子量小的物質如無機鹽、低聚糖等從透析袋滲透到袋外的蒸餾水中,不斷換水即可保持濃度差,從而除盡小分子雜質.具體的做法是根據多糖溶液的體積截取相應長度的透析袋,用透析夾夾住一端,灌入多糖液,離液面2-3cm處夾緊透析袋,置於一大燒杯中,注入蒸餾水至完全浸沒透析袋後,用磁力攪拌器慢速攪拌,每12小時換一次水,重復3-4次.