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表面活性劑的定性鑒定方法有哪些

發布時間:2023-11-18 18:32:55

⑴ 簡述蛋白質分離純化與鑒定的主要方法有哪些其特點是什麼

①濁點萃取法(CPE): 濁點萃取法(cloud point extraction,CPE)是近年來出現的一種新興的液—液萃取技術,它不使用揮發性有機溶劑,不影響環境。它以中性表面活性劑膠束水溶液的溶解性和濁點現象為基礎,改變實驗參數引發相分離,將疏水性物質與親水性物質分離。目前該法已成功地應用於金屬螯合物、生物大分子的分離與純化及環境樣品的前處理中。
CPE 法除了利用增溶作用外,還利用了表面活性劑另一個重要性質——濁點現象。溶液靜置一段時間(或離心)後會形成兩個透明的液相:一為表面活性劑相(約占總體積的5%);另一為水相(膠束濃度等於CMC)。外界條件(如溫度)向相反方向變化,兩相便消失,再次成為均一溶液。溶解在溶液中的疏水性物質如膜蛋白,與表面活性劑的疏水基團結合,被萃取進表面活性劑相,親水性物質留在水相,這種利用濁點現象使樣品中疏水性物質與親水性物質分離的萃取方法就是濁點萃取。圖1顯示了由溫度變化引發的這種相分離現象。溫度的改變,引起水化層的破壞,增強了表面活性劑的疏水性。
②置換色譜法:置換色譜(displacement chromatography)作為一種非線性色譜技術,是指樣品輸入色譜柱後,用一種與固定相作用力極強的置換劑(displacer)通人色譜柱,去替代結合在固定相表面的溶質分子。樣品在置換劑的推動下沿色譜柱前進,使樣品中各組分按作用力強弱的次序,形成一系列前後相鄰的譜帶,並在置換劑的推動下流出色譜柱。置換色譜的分離行為與樣品組分和置換劑在實驗條件下的吸附等濕線有直接的聯系。置換色譜要求樣品組分及置換劑的吸附等濕線應為Langmuir 型,而且置換劑相對於被分離的各組分應有最強的吸附能力,其吸附等溫線位於所有組分的吸附等溫線的上方。

③親和層析法(aflinity chromatography)是分離蛋白質的一種極為有效的方法,它經常只需經過一步處理即可使某種待提純的蛋白質從很復雜的蛋白質混合物中分離出來,而且純度很高。這種方法是根據某些蛋白質與另一種稱為配體(Ligand)的分子能特異而非共價地結合。其基本原理:蛋白質在組織或細胞中是以復雜的混合物形式存在,每種類型的細胞都含有上千種不同的蛋白質,因此蛋白質的分離(Separation),提純(Purification)和鑒定(Characterization)是生物化學中的重要的一部分,至今還沒的單獨或一套現成的方法能移把任何一種蛋白質從復雜的混合蛋白質中提取出來,因此往往採取幾種方法聯合使用。
④電泳法:各種蛋白質在同一pH條件下,因分子量和電荷數量不同而在電場中的遷移率不同而得以分開。值得重視的是等電聚焦電泳,這是利用一種兩性電解質作為載體,電泳時兩性電解質形成一個由正極到負極逐漸增加的pH梯度,當帶一定電荷的蛋白質在其中泳動時,到達各自等電點的pH位置就停止,此法可用於分析和制備各種蛋白質。

⑵ 氣相色譜定性分析中化學方法定性法具體內容是

在氣相色譜分析中,當操作條件確定後,將一定量樣品注入色譜柱,經過一定時間,樣品中各組分在柱中被分離,經檢測器後,就在記錄儀上得到一張確定的色譜圖。由譜圖中每個組分峰的位置可進行定性分析,由每個色譜峰的峰高或峰面積可進行定量分析。
氣相色譜的定性分析就是要確定色譜圖中每個色譜峰究竟代表什麼組分。因此必須了解每個色譜峰位置的表示方法及定性分析的方法。
常用的定性分析方法
(1)純物質對照法 對組成不太復雜的樣品,若欲確定色譜圖中某一未知色譜峰所代表的組分,可選擇一系列與未知物組分相接近的標准純物質,依次進樣,當某一純物質的保留值(可為tr'、ris、Vg、I)與未知色譜峰的保留值相同時,即可初步確定此未知色譜峰所代表的組分。
嚴格的講,僅在一根色譜柱上利用純物質和未知組分的保留值相同,作為定性的依據是不完善的,因為在一根色譜柱上,可能有幾種物質具有相同的保留值。如果可能,應在兩根極性不同的色譜柱上進行驗證,如在兩根極性不同的柱上純物質和未知組分的保留值皆相同,就可確證未知物與純物質相同。
(2)利用保留值的經驗規律定性 大量實驗結果已證明,在一定柱溫下,同系物的保留值對數與分子中的碳數成線性關系,此即為碳數規律,可表示為:
logtr'=an+b
式中 n——碳數;
a——直線斜率;
b——直線在logtr'軸上的截距。
另外同一族的具有相同碳數的異構體的保留值對數與其沸點成線性關系,此即為沸點規律,可表示為:
logVg=a1Tb+b1
式中 Tb——沸點;
a1——直線斜率;
b1——直線在logVg軸上的截距。
當已知樣品為某一同系列,但沒有純樣品對照時,可利用上述兩個經驗規律定性。
(3)利用其它方法定性
① 利用化學方法配合進行未知組分定性:有些帶官能團的化合物能與一些試劑起化學反應從樣品中除去,從比較處理前後兩個樣品的色譜圖,就可以認出那些組分屬於某族化合物。
還可在柱後把流出物通入有選擇性的化學試劑中,利用顯色、沉澱等現象對未知物進行定性。只要在柱後更換裝有不同試劑的試管,就有可能對混合樣中各組分進行鑒定。
② 結合儀器進行定性:氣相色譜是比較高效的分離分析工具,但對復雜的混合物單靠色譜定性鑒定存在很大的困難,而紅外光譜、質譜、核磁共振等儀器分析方法對化合物的定性鑒定是很有特徵的,但對復雜混合物的分析有困難,因此如果用氣相色譜法將復雜混合物分成單個或簡單的組成,然後用質譜、光譜鑒定則有助於解決許多問題。早期用質譜、光譜定性都是把色譜分離後的有關餾分分別收集,再用質譜儀或光譜儀逐個鑒定,近年來發展了氣相色譜與質譜或紅外光譜在系統上直接聯用的色譜-質譜儀和色譜-紅外光譜儀,分離和定性同時進行,當色譜分析完畢時,質譜或光譜的譜圖也就全部得到。

⑶ 通常有哪幾種色譜定性分析方法

色譜定性分析是確定色譜圖上每個色譜峰所代表的物質組分及性質的分析方法。通常有:①利用保留值(描述色譜峰位置或相應體積值,在一定的固定相和操作條件下,任何物質都有其確定的保留值)特性定性;②結合質譜、紅外光譜、紫外光譜和核磁共振等其他物理化學方法定性;③利用預處理或柱上處理等化學反應或物理吸附原理定性;④利用鑒定器對某類化合物的選擇性(如火焰光度檢測器判別含硫、磷化合物;氮磷檢測器判別含磷、氮化合物)定性等。

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