❶ 試述紫外分光光度法測定維生素b12含量及定性鑒別實驗原理
紫外-可見分光光度計由5個部件組成:①輻射源。
必須具有穩定的、有足夠輸出功率的、能提供儀器使用波段的連續光譜,如鎢燈、鹵鎢燈(波長范圍350~2500納米),氘燈或氫燈(180~460納米),或可調諧染料激光光源等。
②單色器[1] 。
維生素B12又叫鈷胺素,是唯一含金屬元素的維生素。自然界中的維生素B12都是微生物合成的,高等動植物不能製造維生素B12。維生素B12是惟一的一種需要一種腸道分泌物(內源因子)幫助才能被吸收的維生素。
體內維生素B12的通常含量為2-5mg,大部分貯存於肝臟,約為體內總貯存量的80%,其餘存在於肌肉、皮膚和骨組織,少量存在於肺、腎、脾。維生素B12最重要的功能在於它是骨髓造血所需的重要物質。
ELISA用血清來檢測維生素B12,首先血液要經過至少半個小時的凝集,然後取血清。將酶復合物用稀釋液稀釋後,加血清及陰性、陽性對照,還有就是質控品(這是嚴格的要求,它的范圍必須在質控范圍內)。經過一個小時的孵育,然後洗板,加底物,半個小時避光反應後加終止液即完成反應部分,然後就是讀數。由數值來判斷結果的陰性或陽性。