⑴ 常用的沉澱法
常用的有下列幾種方法:
等電點沉澱法不同蛋白質的等電點不同,可用等電點沉澱法使它們相互分離。
2. 鹽析法不同蛋白質鹽析所需要的鹽飽和度不同,所以可通過調節鹽濃度將目的蛋白沉澱析出。被鹽析沉澱下來的蛋白質仍保持其天然性質,並能再度溶解而不變性。
3. 有機溶劑沉澱法中性有機溶劑如乙醇、丙酮,它們的介電常數比水低。能使大多數球狀蛋白質在水溶液中的溶解度降低,進而從溶液中沉澱出來,因此可用來沉澱蛋白質。此外,有機溶劑會破壞蛋白質表面的水化層,促使蛋白質分子變得不穩定而析出。由於有機溶劑會使蛋白質變性,使用該法時,要注意在低溫下操作,選擇合適的有機溶劑濃度。
⑵ 常用蛋白質沉澱方法有哪些有哪些應用實例
一般最常見的是鹽析沉澱,就是在蛋白質溶液中加入一定量的硫酸銨,蛋白質便會沉澱下來,不同蛋白沉澱所需要的硫酸銨濃度不一樣,通過這個方法也可以對蛋白進行初步的純化分離。再有就是等電沉澱,通過調節蛋白溶液的pH,使其剛好達到目標蛋白的等電點,這時候蛋白分子將不帶有電荷,在相互碰撞聚集過程中沉澱下來。與之類似的有通過加沉澱劑或絮凝劑比如明礬之類的,也可以沉澱蛋白。另外還有就是親和沉澱,利用生物分子親和力,比如抗原抗體親和、酶與底物親和等性質,將配對的另一半固定在某些介質,比如小磁珠上,就能將溶液裡面的目的蛋白抓住沉澱下來。
⑶ 蛋白質沉澱有哪幾種方法哪些是可逆的沉澱反應
蛋白質沉澱 蛋白質在溶液中的穩定性是有條件的、相對的.如果條件發生改變,破壞了蛋白質溶液的穩定性,蛋白質分子則聚集成大的顆粒沉澱出來.
蛋白質溶液的穩定性與質點大小、電荷和水化作用有關,只要破壞這些條件,蛋白質自然會從溶液中沉澱出.
沉澱蛋白質有以下方法:
1、鹽析法
2、有機溶劑沉澱法
3、重金屬鹽沉澱法
4、生物鹼試劑和某些酸(三氯醋酸,磺基水楊酸,硝酸等)沉澱法
5、加熱變性沉澱法
蛋白質變性:蛋白質的天然構象遭到破壞導致其生物活性喪失的現象.蛋白質在受到光照、熱、有機溶劑以及一些變性劑的作用時,次級鍵受到破壞,導致天然構象的破壞,使蛋白質的生物活性喪失.
蛋白質分子凝聚從溶液中析出的現象稱為蛋白質沉澱(precipitation),變性蛋白質一般易於沉澱,但也可不變性而使蛋白質沉澱,在一定條件下,變性的蛋白質也可不發生沉澱.
蛋白質所形成的親水膠體顆粒具有兩種穩定因素,即顆粒表面的水化層和電荷.若無外加條件,不致互相凝集.然而除掉這兩個穩定因素(如調節溶液pH至等電點和加入脫水劑)蛋白質便容易凝集析出.
可以看出,如將蛋白質溶液pH調節到等電點,蛋白質分子呈等電狀態,雖然分子間同性電荷相互排斥作用消失了.但是還有水化膜起保護作用,一般不致於發生凝聚作用,如果這時再加入某種脫水劑,除去蛋白質分子的水化膜,則蛋白質分子就會互相凝聚而析出沉澱;反之,若先使蛋白質脫水,然後再調節pH到等電點,也同樣可使蛋白質沉澱析出.
⑷ 蛋白質沉澱了就變性了嗎用什麼方法能讓它溶解且有活性
變性作用是蛋白質受物理或化學因素的影響,改變其分子內部結構和性質的作用。一般認為蛋白質的二級結構和三級結構有了改變或遭到破壞,都是變性的結果。能使蛋白質變性的化學方法有加強酸、強鹼、重金屬鹽、尿素、乙醇、丙酮等;能使蛋白質變性的物理方法有加熱、紫外線及X射線照射、超聲波、劇烈振盪或攪拌等。
蛋白質在受到光照、熱、有機溶劑以及一些變性劑的作用時,次級鍵受到破壞,導致天然構象的破壞,使蛋白質的生物活性喪失。如果變性條件劇烈持久,蛋白質的變性是不可逆的。如果變性條件不劇烈,這種變性作用是可逆的,說明蛋白質分子內部結構的變化不大。這時,如果除去變性因素,在適當條件下變性蛋白質可恢復其天然構象和生物活性,這種現象稱為蛋白質復性(renaturation)。例如胃蛋白酶加熱至80~90℃時,失去溶解性,也無消化蛋白質的能力,如將溫度再降低到37℃,則又可恢復溶解性和消化蛋白質的能力。
⑸ 常用的沉澱方法有哪些
沉澱法,是指由於表面擴散脫氧法速度慢,故實際生產中使用並不廣泛,而常使用沉澱脫氧法。這種方法用磷、鋰作為脫氧劑,脫氧反應在整個熔池內進行,所以反應速度快。缺點是脫氧劑可能會殘留在合金液體中,影響合金的性能。
沉澱法,是包括製造固體催化劑的方法之一、水彩畫的特殊技法和溶劑萃取的方法。沉澱法,在水處理中,是利用水中懸浮顆粒的可沉降性能,在重力作用下產生下沉作用,以達到固液分離的一種過程。
催化劑方法
把沉澱劑加入到鹽溶液中反應後,將沉澱熱處理得到納米材料。其特點簡單易行,但純度低,顆粒半徑大,適合制備氧化物。
特殊技法
.水彩畫的特殊技法,水彩畫顏色中有些顏色干後會產生沉澱,這就需要在上色時,水份 要充足,讓顏色中的小顆粒流動後沉澱在紙面上。這種方法顏色淡容易出效果。如: 深藍、赭石等顏色。
溶劑萃取法
介紹
最常用的是鉛鹽法,可以用於除去雜質,也可用於沉澱有效成分。
沉澱法通常是在溶液狀態下將不同化學成分的物質混合,在混合液中加人適當的沉澱劑制備前驅體沉澱物,再將沉澱物進行乾燥或鍛燒,從而製得相應的粉體顆粒.
鉛鹽法是利用中性醋酸鉛或醋酸鉛在水或稀醇溶液中能與許多物質生成難溶的鉛鹽或絡鹽,而用於中葯成分。中性醋酸鉛可以沉澱有機酸、蛋白質、氨基酸、粘液質、鞣質、酸性皂甙、樹脂、部分黃酮甙和花色甙等。鹼式醋酸鉛沉澱范圍更廣,除了述被中性醋酸鉛沉澱的物質外,還可以沉澱某些中性皂甙、異黃酮甙、糖類和一些鹼性較弱的生物鹼等。通常將鉛鹽沉澱濾出,然後將沉澱懸於水或稀醇中,通硫化氫氣體或硫酸鈉等試劑進行脫鉛,即可回收提取物。
鉛鹽沉澱法
鉛鹽沉澱法為分離某些中草葯成分的經典方法之一。由於醋酸鉛及鹼式醋酸鉛在水及醇溶液中,能與多種中草葯成分生成難溶的鉛鹽或絡鹽沉澱,故可利用這種性質使有效成分與雜質分離。中性醋酸鉛可與酸性物質或某些酚性物質結合成不溶性鉛鹽。因此,常用以沉澱有機酸、氨基酸、蛋白質、粘液質、鞣質、樹脂、酸性皂甙、部分黃酮等。可與鹼式醋酸鉛產生不溶性鉛鹽或絡合物的范圍更廣。通常將中草葯的水或醇提取液先加入醋酸鉛濃溶液,靜置後濾出沉澱,並將沉澱洗液並入濾液,於濾液中加鹼式醋酸鉛飽和溶液至不發生沉澱為止,這樣就可得到醋酸鉛沉澱物、鹼式醋酸鉛沉澱物及母液三部分。然後將鉛鹽沉澱懸浮於新溶劑中,通以硫化氫氣體,使分解並轉為不溶性硫化鉛而沉澱。含鉛鹽母液亦須先如法脫鉛處理,再濃縮精製。硫化氫脫鉛比較徹底,但溶液中可能存有多餘的硫化氫,必須先通人空氣或二氧化碳讓氣泡考試,大收集整理帶出多餘的硫化氫氣體,以免在處理溶液時參與化學反應。新生態的硫化鉛多為膠體沉澱,能吸咐葯液中的有效成分,要注意用溶劑處理收回。脫鉛方法,也可用硫酸、磷酸、硫酸鈉、磷酸鈉等除鉛,但硫酸鉛、磷酸鉛在水中仍有一定的溶解度,除鉛不徹底。用陽離子交換樹脂脫鉛快而徹底,但要注意葯液中某些有效成分也可能被交換上去,同時脫鉛樹脂再生也較困難。還應注意脫鉛後溶液酸度增加,有時需中和後再處理溶液,有時可用新制備的氫氧化鉛、氫氧化鋁、氫氧化銅或碳酸鉛、明礬等代替醋酸鉛、鹼式醋酸鉛。例如在黃芩水煎液中加入明礬溶液,
黃芩甙就與鋁鹽絡合生成難溶於水的絡化物而與雜質分離,這種絡化物經用水洗凈就可直接供葯用。
試劑沉澱法
例如在生物鹼鹽的溶液中,加入某些生物鹼沉澱試劑(見生物鹼性質下),則生物鹼生成不溶性復鹽而析出。水溶性生物鹼難以用萃取法提取分出,常加入雷氏銨鹽使生成生物鹼雷氏鹽沉澱析出。又如橙皮甙、蘆丁、黃芩甙、甘草皂甙均易溶於鹼性溶液,當加入酸後可使之沉澱析出。某些蛋白質溶液,可以變更溶液的值利用其在等電點時溶解度最小的性質而使之沉澱析出。此外,還可以用明膠、蛋白溶液沉澱鞣質;膽甾醇也常用以沉澱洋地黃皂甙等。可根據中草葯有效成分和雜質的性質,適當選用。
⑹ 沉澱蛋白質的方法有哪些,各有和特點
沉澱蛋白質的方法有哪些?各有何特點?
答:(1)鹽析法,此方法並未破壞蛋白質天然狀態,沉澱出的蛋白質可不變性,所以鹽析法是分離制備蛋白質或蛋白類生物制劑的常用方法。
(2)有機溶劑沉澱法,通過破壞蛋白質的水化膜而使蛋白質沉澱,此方法在常溫下可使蛋白質變性,低溫下可使變性速度減慢。
(3)重金屬鹽沉澱法,可與蛋白質結合形成不溶於水的蛋白質鹽沉澱,引起蛋白質變性。臨床用於救重金屬鹽中毒。
⑺ 常用的沉澱法有哪幾種
等電點沉澱法和鹽析
一、等電點沉澱法
等電點沉澱法是利用蛋白質在等電點時溶解度最低而各種蛋白質又具有不同等電點的特點進行分離的方法。
在等電點時,蛋白質分子以兩性離子形式存在,其分子凈電荷為零(即正負電荷相等),此時蛋白質分子顆粒在溶液中因沒有相同電荷的相互排斥,分子相互之間的作用力減弱,其顆粒極易碰撞、凝聚而產生沉澱,所以蛋白質在等電點時,其溶解度最小,最易形成沉澱物。
等電點時的許多物理性質如黏度、膨脹性、滲透壓等都變小,從而有利於懸浮液的過濾。
二、鹽析
鹽析是指在蛋白質水溶液中加入中性鹽,隨著鹽濃度增大而使蛋白質沉澱出來的現象。中性鹽是強電解質,溶解度又大,在蛋白質溶液中,一方面與蛋白質爭奪水分子,破壞蛋白質膠體顆粒表面的水膜;另一方面又大量中和蛋白質顆粒上的電荷,從而使水中蛋白質顆粒積聚而沉澱析出。
向某些蛋白質溶液中加入某些無機鹽溶液後,可以降低蛋白質的溶解度,使蛋白質凝聚而從溶液中析出,這種作用叫作鹽析,是物理變化,可復原。向某些蛋白質溶液中加入某些重金屬鹽,可以使蛋白質性質發生改變而凝聚,進而從溶液中析出,這種作用叫作變性,性質改變,是化學反應,無法復原。
把動物脂肪或植物油與氫氧化鈉按一定比例放在皂化鍋內攪拌加熱,反應後形成的高級脂肪酸鈉、甘油、水形成混合物(膠體)。往鍋內加入食鹽顆粒,攪拌、靜置,使高級脂肪酸鈉與甘油、水分離,浮在液面。
(7)變性沉澱的方法有哪些擴展閱讀:
蛋白質的變性
1、物理因素包括:加熱、加壓、攪拌、振盪、紫外線照射、X射線、超聲波等
2、化學因素包括:強酸、強鹼、重金屬鹽、三氯乙酸、乙醇、丙酮等。
3、在熱、酸、鹼、重金屬鹽、紫外線等作作用下,蛋白質會發生性質上的改變而凝結起來。這種凝結是不可逆的,不能再使它們恢復成原來的蛋白質.蛋白質的這種變化叫做變性。蛋白質變性之後,紫外吸收,化學活性以及粘度都會上升,變得容易水解,但溶解度會下降。
4、蛋白質變性後,就失去了原有的可溶性,也就失去了它們生理上的作用,因此蛋白質的變性凝固是個不可逆過程。