① 乳酸菌的鑒定方法
1.形態和培養特徵觀察
採用牛肉膏蛋白腖培養基,將已純化後的甘油菌種活化後於37℃下培養20～24h ,並進行革蘭氏染色及菌體形態和菌落特徵的觀察。染色方法參照微生物鑒定實驗指導
2.生長條件試驗
(1)耐鹽性試驗(NaCl 濃度:0. 85 、1. 20 和1. 71) (mol/ L) ;
(2)耐酸鹼試驗(p H :4. 3 、5. 7 、6. 8 、8. 4 、8. 6 和8. 7) ;
(3)溫度梯度試驗(溫度: 10℃、30℃、40℃、50℃、55℃、60℃和65℃) 。
分別將參試菌接種於以上處理的液體培養基中培養48 h ,記錄生長狀況。
3.生理生化試驗
⑴過氧化氫酶測定
將實驗菌接種於PGY培養基斜面上,37℃培養20h—24h,取一環接種的培養物,塗於干凈的載玻片上,然後在其上滴加3%－—15%的過氧化氫,有氣泡則為陽性反應,無氣泡為陰性反應。
⑵葡萄糖產酸產氣實驗
在PY基礎培養基內加入30g葡萄糖和5%吐溫-80,1.6g/100mL的溴甲酚紫1.4mL作指示劑, 在培養基內放置一小倒管,分裝試管置37℃培養24h, 經培養後,指示劑變黃表示產酸,倒管內出現氣泡,表示產氣。
⑶澱粉水解實驗
接種新鮮的菌種於含有0.5g可溶性澱粉的PY基礎培養基中,取少許培養液於比色盤內,同時取未接種的培養液作對照,分別在其中加入盧哥氏碘液.不顯色表示澱粉水解,顯藍黑色或藍紫色時,表示澱粉未水解或水解不完全。
⑷明膠液化實驗
將實驗菌接種於明膠基礎培養基中,置37℃培養,以一支未接種的試管作為對照。將接種的和未接種的對照管置於冰箱或冷水中,等待對照管凝固後記錄實驗結果,反復觀察對比多次。如對照管凝固時,接種管液化為陽性反應,凝固為陰性反應
⑸甲基紅（M.R）試驗
接種實驗細菌於PYG培養基，於37℃培養2天後，於培養物中加入幾滴甲基紅酒精溶液，如呈紅色，表示陽性。
⑹乙醯甲基甲醇V-P實驗
接種新鮮的實驗菌種於培養基中, 37℃培養2天後,取培養液1mL在其中
加入1ml 10％的NaOH，混勻，再加入3－4滴2%氯化鐵溶液。數小時後，培養基表面的下層出現紅色者，為陽性
⑺檸檬酸鹽
取幼齡菌種接種於檸檬酸鹽斜面培養基上，適溫培養3－7天，培養基呈鹼性（藍色）者為陽性反應，不變者則為陰性
⑻酪素水解試驗
牛奶平板的制備：取5g脫脂奶粉加入50mL蒸餾水中（或用50mL脫脂牛奶），另稱1.5g瓊脂溶於50mL蒸餾水中，將兩液分開滅菌。待冷至45－50℃時，將兩液混勻倒平板，即成牛奶平板。將平板倒置過夜，使表面水分乾燥，然後將菌種點接在平板上，每皿可點接3－5株菌。適溫培養1、3、5天，記錄菌落周圍和下面酪素是否已被分解而呈透明。配製該培養基時，切勿將牛奶和瓊脂混合滅菌，以防牛奶凝固
⑼厭氧生長測定
將菌種接入營養肉湯平板後,用密封帶包好放入CO2培養箱37℃培養2天後,觀察生長情況,生長則為陽性
(10)厭氧硝酸鹽產氣
接種封油：以斜面菌種用接種環接種後，用凡士林油（凡士林和液體石蠟為1:1）封管，封油的高度約1厘米。必須同時接種不含有硝酸鉀的肉汁腖培養液作對照。
觀察結果：培養2－7d，觀察在含有硝酸鉀的培養基中有否生長和產生氣泡。如有氣泡產生，表示反硝化作用產生氮氣，為陽性反應。但如不含硝酸鉀的對照培養基也可產生氣泡，則只能按可疑或陰性處理。
(11)石蕊牛奶的反應
牛奶中主要含有乳糖和酪蛋白，在牛奶中加入石蕊是作為酸鹼指示劑和氧化還原指示劑。石蕊在中性時呈淡紫色，酸性時呈粉紅色，鹼性呈藍色，還原時則自上而下地褪色變白。觀察其產酸、產鹼、腖化、酸凝固、凝乳酶凝固、還原情況
(12)糖發酵實驗
將需要測定的糖或醇類等碳水化合物加入PY基礎培養基中,按表分裝含5mL培養基的試管.分別取0.2mL,被鑒定菌株接到滅菌後的碳水化合物培養基中37℃培養24h,振盪培養。檢測時取培養液少許置於比色盤內,同時取未加碳水化合物的PY培養液作為對照,滴加試劑比較顏色的變化,記錄產酸的強弱.
附一些培養基：
①PY培養基（100mL）：蛋白腖1.0g,酵母提取物1.0g,無機鹽溶液4.0mL[鹽溶液成分:無水CaCl2 0.2g,MgSO4 20.0g ,K2HPO4 1.0g, ,KH2PO4 1.0g,NaHCO3 10.0g,NaCl 2.0g](將CaCl2和MgSO4一起溶解於300mL蒸餾水中,再加500mL蒸餾水,一邊攪拌一邊緩慢加入其他鹽類.繼續攪拌直到全部溶解,加蒸餾水定容至1000mL,混合後貯備於4℃)
②PYG培養基:PY在基礎培養液內加入1.0g葡萄糖
③營養明膠 蛋白腖5g、牛肉膏3g、明膠120g、蒸餾水1000mL、pH6.8～7.0；加熱溶解、校正至pH7.4～7.6，分裝小管，121℃高壓滅菌10min，取出後迅速冷卻，使其凝固。復查最終pH應為6.8～7.0
④檸檬酸鹽斜面培養基：檸檬酸鈉 3g NH4H2PO4 1g MgSO4 0.2g
K2HPO4 1g NaCl 5g 瓊脂15—20g 水1000mL 加熱溶解後，調pH至7，再加入1.6%溴麝香草酚藍指示劑10mL,培養基呈綠色，分裝試管，每管5mL，121滅菌30min
⑤含硝酸鉀的營養肉湯 加入2g硝酸鉀入營養肉湯
4.16S rDNA 序列分析
這個LZ另外查好了，很多學問。
5.生長曲線
活菌計數方法：採用塗布法,進行菌落計數，每隔一段時間（2-4小時）測