『壹』 臨床上的生化指標主要有哪些
1.谷丙轉氨酶、丙氨酸氨基轉移酶（ALT） 谷丙轉氨酶顧名思義是谷氨酸和丙酮酸之間的轉氨酶，主要存在於肝臟、心臟和骨骼肌中。肝細胞或某些組織損傷或壞死，都會使血液中的谷丙轉氨酶升高，臨床上有很多疾病可引起轉氨酶異常。 ALT升高的原因很多，包括急性軟組織損傷及嚴重的創傷、劇烈運動及運動過度、感染性疾病如肺炎和結核等、心臟疾病如心力衰竭和心肌炎等、膽囊炎、應用一些葯物等非肝臟因素。所以臨床上生化檢查到ALT的輕度升高不應只懷疑肝臟的問題，要綜合考慮病情及全面分析化驗單。 ALT主要大量存在於肝臟細胞的細胞漿中，其濃度高於血清的1000——3000倍。故肝細胞的輕度損傷就可使其升高，及其敏感，有資料報道1%的肝細胞損傷可造成ALT升高一倍。所以可以說明只要肝臟的輕微損傷就能引起ALT的變化，而因黃疸懷疑早期及中期的肝病，沒有ALT的升高是不成立的。 ALT 的降低沒有臨床意義的。2.穀草轉氨酶，門冬氨酸氨基轉移酶（AST）AST存在於各組織細胞中，肌肉組織中含量很高，其中心肌細胞中的含量要明顯高於肝臟細胞，所以AST伴隨CK（肌酸激酶）的明顯升高往往提示骨骼肌損傷或心臟疾病。另外，能引起ALT升高的非肝臟因素均能引起AST升高，近期大量食用高動物性脂肪也能引起ALT升高。 肝內的AST有兩種同工酶，分別為存在於肝細胞胞漿內的(sAST)和存在於肝細胞線粒體內（mAST）。所以當肝臟輕度損傷時，肝細胞只是胞漿破裂，這時胞漿中的ALT和sAST都進入血液，引起血清中ALT及AST同時基本等比例升高。當肝臟嚴重損傷時，細胞線粒體破裂，mAST釋放入血，引起血清中AST的數值為sAST與mAST的總和，故AST升高的比例要高於ALT，升高的比例越高，證明肝損傷的程度越重。3.總膽紅素（T.Bili）總膽紅素是直接膽紅素和間接膽紅素的總和，正常血清中的膽紅素基本是來源於衰老的紅細胞破碎後產生出來的血紅蛋白衍化而成，在肝內經過葡萄糖醛酸化的叫做直接膽紅素，未在肝內經過葡萄糖醛酸化的叫做間接膽紅素。 總膽紅素升高的原因包括溶血性疾病、微生物感染引起間接膽紅素過多，來不及被肝臟轉化為直接膽紅素及膽汁而引起單純因間膽升高而導致直膽升高。肝臟發生病變時，膽紅素不能轉化為膽汁或因為肝細胞腫脹而導致肝內膽汁淤積引起直膽和間膽同時升高造成肝細胞性黃疸。發生膽囊炎、總膽管阻塞時，因膽汁排入十二指腸障礙而引起阻塞性黃疸。 因犬貓的被毛長度及皮膚顏色不同，所以一般通過眼結膜、瞬膜和口腔粘膜的顏色來判斷。一般30mmol/L以下的黃疸不宜用肉眼察覺，被稱為隱形黃疸。在隱形黃疸時，可通過尿液化驗來判斷是否懷疑黃疸。 肝細胞性黃疸直膽和間膽都升高。當懷疑發生肝細胞性黃疸時，要結合ALT、AST、ALP指標及各項臨床症狀做出診斷。要知道犬貓的肝臟疾病在一半以上的病例中是不引起黃疸的。總膽紅素數值的高低在肝細胞性黃疸時一定程度上是與肝病的程度成正比，當總膽紅素數值顯示為重度黃疸時，如果ALT、AST的數值升高不多時稱為膽酶分離。膽酶分離的原因是肝細胞嚴重受損，間膽不能被轉化，膽汁大量在肝內淤積，而具有活性的肝細胞數量減少，受損後釋放的酶也相應減少，往往提示極嚴重的肝損傷、肝硬化中晚期、肝衰期。 梗阻性黃疸是指肝細胞具備將建膽紅素結合為直接膽紅素及產生膽汁的能力，但膽汁的排出受阻。所以直膽升高，間膽正常或輕度升高。膽石、寄生蟲、肝臟腫瘤、膽囊結石、一線腫瘤造成的膽管阻塞及壓迫是主要原因。此時，ALT一般為輕度升高，AST輕度升高或正常，ALP明顯升高。
總膽紅素降低一般提示為缺鐵性貧血、缺鋅或儀器誤差。4.乳酸脫氫酶(LDH)乳酸脫氫酶是一種糖酵解酶。乳酸脫氫酶幾乎存在於所有組織細胞的細胞質內，催化乳酸和丙酮酸的相互轉化。在厭氧酵解時，催化丙酮酸接受由3-磷酸甘油醛脫氫酶形成的氫，形成乳酸。LDH由5種同工酶組成，同工酶的分布有明顯的組織特異性，所以可以根據其組織特異性來協助診斷疾病。由於LDH幾乎存在於所有體細胞中，而且在機體組織中的活性普遍很高，所以血清中LDH的增高對任何單一組織或器官都是非特異性的，無明確診斷意義。在國內獸醫臨床上還未開展利用電泳法或酶聯免疫法測定同工酶，故不進一步介紹。 5.鹼性磷酸酶(ALP)鹼性磷酸酶是由6種同工酶組成，廣泛存在於機體各組織中，肝臟、骨骼、腎臟、腸道、胎盤及某些腫瘤組織內都有存在，但主要存在於肝臟和骨骼中。 在犬貓幼齡階段的骨骼發育期、骨折的癒合期、妊娠期均可造成ALP的輕度生理性升高。骨軟化症、佝僂症、骨質疏鬆、骨腫瘤、肝膿腫、肝硬化、肝腫瘤、甲亢時ALP輕到中度升高。 肝外膽道阻塞、膽囊疾病、膽汁淤積型肝炎時肝細胞過度製造ALP,經淋巴道和肝竇進入血液，同時由於膽汁排泄障礙，反流入血，引起血清中的鹼性磷酸酶明顯高。 在犬貓臨床上，ALP的升高所提示的臨床意義不完全相同。在犬提示有肝臟疾病、庫興氏綜合征、糖皮質激素或抗癲癇葯物治療。在貓提示糖尿病、膽管炎、膽管性肝炎、肝脂變、甲亢。在犬的甲亢時，ALP有可能輕度下降。 6.肌酸激酶（CK）CK可在機體內催化肌酸和磷酸肌酸之間的相互轉化，廣發存在與心肌和骨骼肌中，腦、胃腸道、前列腺、肺等組織中也有分布。 CK有三種同工酶。人醫用CK-MB的濃度來診斷心肌疾病，但在獸醫臨床上還沒開展。在獸醫臨床上CK的明顯升高主要提示心肌、骨骼肌或腦組織的病變。 7.r-谷氨醯胺轉肽酶（GGT） GGT是將其他氨基酸轉化為谷氨酸的酶，廣泛分布在機體的各組織中。腎臟、胰腺、肝臟中均勻較多的分布。GGT的輕中度升高提示各種情況的肝炎、脂肪肝、胰腺炎（犬）、胰腺癌、糖皮質激素或巴比妥類葯物的使用。GGT重度升高提示膽囊炎、膽道阻塞、膽汁淤積性肝炎引起的阻塞性黃疸，原發性和繼發性肝癌。GGT高於正常值4倍以上的要考慮肝癌或嚴重的肝膽感染，尤其在犬。8.總蛋白(TP) TP是由肝臟產生的白蛋白和含量極少的纖維蛋白原、αβ球蛋白、凝血酶原、凝血因子，漿細胞產生的r球蛋白共同組成的復雜混合物。 TP的升高常見於各種原因的脫水、中毒、休克、慢性感染、淋巴肉瘤、漿細胞瘤、多發性骨髓瘤等。 9.白蛋白（ALB） 白蛋白是機體維持血漿膠體滲透壓的主要力量，它能轉運膽紅素、長鏈脂肪酸、膽汁酸鹽、前列腺素、類固醇和部分葯物及重金屬離子，還具有一定的保護球蛋白的功能。ALB升高主要見於急性重度脫水和休克。但在臨床上並不常見，因為ALB的升高引起血漿膠體滲透壓升高，擴容的血漿使ALB的數值降為正常。 ALB的降低分為兩種原因。第一為合成不足，長期飢餓、營養不良、腸道吸收不良等原因
引起的原料不足及嚴重的肝臟疾病導致的哦工廠減產或停工；第二為流失過度，腎小球病變、腎病、蛋白丟失性腸病、大量炎症性胸腹腔滲出液均能導致ALB的丟失性降低。 10.球蛋白（GLOB）機體的球蛋白包括α球蛋白、β球蛋白和r球蛋白，其中以r球蛋白為主，另外兩種球蛋白的含量極低。因為纖維蛋白原、凝血酶原和凝血因子所佔的比例太小，所以獸醫臨床上血清球蛋白的數值是由TP減去ALB所得。 球蛋白的升高在犬常見於全身性感染，如全身性膿皮症、艾利希氏體、心絲蟲、蠕形蟎、慢性跳騷過敏等；還可見於淋巴肉瘤、漿細胞瘤、多發性骨髓瘤等巨蛋白血症及自身免疫病。在貓較為常見，機體攜帶非自限性病毒時均能引起球蛋白不同程度的升高。
『貳』 常用生化檢測項目分析方法舉例及參數設置
常用生化檢測項目分析方法舉例及參數設置
常用生化檢測項目有哪些你知道嗎?你對常用生化檢測項目了解嗎?下面是我為大家帶來的關於常用生化檢測項目分析方法舉例及參數設置的知識，歡迎閱讀。
一、常用生化檢測項目
1.終點法檢測常用的有總膽紅素(氧化法或重氮法)、結合膽紅素(氧化法或重氮法)、血清總蛋白(雙縮脲法)、血清白蛋白(溴甲酚氯法)、總膽汁酸(酶法)、葡萄糖(葡萄糖氧化酶法)、尿酸(尿酸酶法)、總膽固醇(膽固醇氧化酶法)、甘油三酯(磷酸甘油氧化酶酶法)、高密度脂蛋白膽固醇(直接測定法)、鈣(偶氮砷Ⅲ法)、磷(紫外法)、鎂(二甲苯胺藍法)等。以上項目中，除鈣、磷和鎂基本上還使用單試劑方式分析因而採用一點終點法外，其它測定項目都可使用雙試劑故能選用兩點終點法，包括總蛋白、白蛋白測定均已有雙試劑可用。
2.固定時間法苦味酸法測定肌酐採用此法。
3.連續監測法對於酶活性測定一般應選用連續監測法，如丙氨酸氨基轉移酶、天冬氨酸氨基轉移酶、乳酸脫氫酶、鹼性磷酸酶、γ谷氨氨醯基轉移酶、澱粉酶和肌酸激酶等。一些代謝物酶法測定的項目如己糖激酶法測定葡萄糖、脲酶偶聯法測定尿素等，也可用連續監測法。
4.透射比濁法透射比濁法可用於測定產生濁度反應的項目，多數屬免疫比濁法，載脂蛋白、免疫球蛋白、補體、抗"O"、類風濕因子，以及血清中的其他蛋白質如前白蛋白、結合珠蛋白、轉鐵蛋白等均可用此法。
二、分析參數設置
分析儀的一些通用操作步驟如取樣、沖洗、吸光度檢測、數據處理等，其程序均已經固化在存儲器里，用戶不能修改。各種測定項目的分析參數(analysisparamete)大部分也已設計好，存於磁碟中，供用戶使用;目前大多數生化分析儀為開放式，用戶可以更改這些參數。生化分析儀一般另外留一些檢測項目的空白通道，由用戶自己設定分析參數。因此必須理解各參數的確切意義。
一、分析參數介紹
(一)必選分析參數
這類參數是分析儀檢測的前提條件，沒有這些參數無法進行檢測。
1.試驗名稱 試驗名稱(test code)是指測定項目的標示符，常以項目的英文縮寫來表示。
2.方法類型(也稱反應模式) 方法類型(assay)有終點法、兩點法、連續監測法等，根據被檢物質的檢測方法原理選擇其中一種反應類型。
3.反應溫度 一般有30℃、37℃可供選擇，通常固定為37℃。
4.主波長 主波長(primary wavelength)是指定一個與被測物質反應產物的光吸收有關的波長。
5.次波長 次波長(secondary wavelength)是在使用雙波長時，要指定一個與主波長、干擾物質光吸收有關的波長。
6.反應方向 反應方向(response direction)有正向反應和負向反應兩種，吸光度增加為正向反應，吸光度下降為負向反應。
7.樣品量 樣品量(sampling volum)一般是2μl～35μl，以0.1μl步進，個別分析儀最少能達到1.6μl。可設置常量、減量和增量。
8. 第一試劑量 第一試劑量(first regengt volum)一般是20～300μl，以1μl步進。
9. 第二試劑量 第二試劑量(second regengt volum)一般也是20～300μl，以1μl步進。
10.總反應容量 總反應容量(total reacting volum)在不同的分析儀有一個不同的規定范圍，一般是180～350μl，個別儀器能減少至120μl。總反應容量太少無法進行吸光度測定。
11.孵育時間 孵育時間(incubate time)在終點法是樣品與試劑混勻開始至反應終點為止的時間，在兩點法是第一個吸光度選擇點開始至第二個吸光度選擇點為止的時間。
12.延遲時間 延遲時間(delay time)在連續監測法中樣品與反應試劑(第二試劑)混勻開始至連續監測期第一個吸光度選擇點之間的時間。
13.連續監測時間 連續監測時間(continuous monitoring time)在延遲時間之後即開始，一般為60～120s，不少於4個吸光度檢測點(3個吸光度變化值)。
14.校準液個數及濃度 校準曲線線性好並通過坐標零點的，可採用一個校準液(calibrator);線性好但不通過坐標零點，應使用兩個校準液;對於校準曲線呈非線性者，必須使用兩個以上校準液。每一個校準液都要有一個合適的濃度。
15.校準K值或理論K值 通過校準得到的K值為校準K值(calibrate coefficient)或由計算得出的K值為理論K值。
16.線性范圍 即方法的線性范圍(linearity range)，超過此范圍應增加樣品量或減少樣品量重測。與試劑/樣品比值有關。
17.小數點位數 檢測結果的小數點位數(decimal point digit)。
(二)備選分析參數
這類分析參數與檢測結果的准確性有關，一般來說不設置這類分析參數，分析儀也能檢測出結果，但若樣品中待測物濃度太高等，檢測結果可能不準確。
1.樣品預稀釋 設置樣品量、稀釋劑量和稀釋後樣品量三個數值，便可在分析前自動對樣品進行高倍稀釋。
2.底物耗盡值 底物耗盡值(substrate exhaust limit)在負反應的酶活性測定中，可設置此參數，以規定一個吸光度下降限。若低於此限時底物已太少，不足以維持零級反應而導致檢測結果不準確。
3.前區檢查 免疫比濁法中應用，以判斷是否有抗原過剩。將終點法最後兩個吸光度值的差別(ΔA)設置一個限值，如果後一點的吸光度比前一點低，表示已有抗原過剩，應稀釋樣品後重測。
4.試劑空白吸光度范圍 超過此設定范圍表示試劑已變質，應更換合格試劑。
5.試劑空白速率 連續監測法中使用，是試劑本身在監測過程中沒有化學反應時的變化速率。
6.方法學補償系數 用於校準不同分析方法間測定結果的一致性，有斜率和截距兩個參數。
7.參考值范圍 對超過此范圍的測定結果，儀器會列印出提示。
(三)某些參數的特殊意義
1.最小樣品量 最小樣品量是指分析儀進樣針能在規定的誤差范圍內吸取的最小樣品量。一般分析儀的最小樣品量是2μl，目前也有小至1.6μl的。在樣品含高濃度代謝產物或高活性酶濃度的情況下往往需採用分析儀的最小樣品量作為減量參數，從而使分析儀檢測范圍(與線性范圍不同)的上限得以擴大。
2.最大試劑量 方法靈敏度很高而線性上限低的檢測項目，如血清白蛋白的溴甲酚氯法測定，以往手工法操作時樣品量10μl，試劑量4ml，這樣試劑量/樣品量比例(R/S)為200，線性上限則為60g/L。此法移植到分析儀上後，R/S卻很難達到200，致使線性上限變低。因此對這類檢測項目最大試劑量非常重要。
3.彈性速率 在酶活性測定中，當酶活性太高，在連續監測期中已不呈線性反應時，有些儀器具有彈性速率(flexrate)功能，能自動選擇反應曲線上連續監測期中仍呈線性的吸光度數據計算結果，使酶活性測定的線性范圍得以擴大。如AST可從1000U/L擴展至4000U/L，從而減少稀釋及重測次數、降低成本。
4.試劑空白速率 當樣品中存在膽紅素時，膽紅素對鹼性苦味酸速率法或兩點法測定肌酐有負干擾。因為膽紅素在肌酐檢測的波長505nm有較高光吸收，而且膽紅素在鹼性環境中可被氧化轉變，因而在肌酐反應過程中膽紅素的光吸收呈下降趨勢。若在加入第一試劑後一段時間內設置試劑空白速率，因為此段中苦味酸尚未與肌酐反應，而膽紅素在第一試劑的鹼性環境中已同樣被氧化轉變，因而以第二試劑加入後的速率變化，減去試劑空白速率變化，便可消除膽紅素的負干擾，見圖7-8。
二、單波長和雙波長方式
(一)概念
採用一個波長檢測物質的光吸收強度的`方式稱為單波長(mono-wavelength)方式。當反應液中含有一種組分，或在混合反應液中待測組分的吸收峰與其它共存物質的吸收波長無重疊時，可以選用。在吸光度檢測中，使用一個主波長和一個次波長的稱雙波長方式。當反應液中存在干擾物的較大吸收、從而影響測定結果的准確性時，採用雙波長方式更好。
(二)雙波長的作用
雙波長(di-wavelength)測定優點是①消除噪音干擾;②減少雜散光影響;③減少樣品本身光吸收的干擾。從光源，到比色杯、單色器、檢測器的整個光路系統中，均存在著隨時間發生變化的不穩定的檢測信號，即噪音，而雙波長檢測是同時進行的，兩種波長檢測產生的噪音基本上相同，因而能消除噪音干擾。當樣品中存在非化學反應的干擾物如甘油三酯、血紅蛋白、膽紅素等時，會產生非特異性的光吸收，而干擾測定結果的准確性。採用雙波長方式測定可以部分消除這類干擾，提高檢測的准確性。
(三)次波長的確定方法
當被測物的主波長確定之後，再選擇次波長。如根據甘油三酯等干擾物吸收光譜特徵，選擇次波長，使干擾物在主、次波長處有盡可能相同的光吸收值，而被測物在主、次波長處的光吸收值應有較大的差異。一般來說，次波長應大於主波長100nm。以主波長與次波長吸光度差來計算結果。
(四)雙波長的具體應用
對於某些反應速度快且無法設置為兩點終點法的分析項目，尤其是單試劑分析中，可以利用雙波長的方式來部分消除樣品本身的光吸收干擾。目前用單試劑法測定的項目應用雙波長的為血清總蛋白(雙縮脲法)主波長500nm，次波長576nm;血清白蛋白(溴甲酚氯法)主、次波長分別為600和700nm;鈣(偶氮砷Ⅲ法)主、次波長分別為 660、770nm;磷(紫外比色法)主、次波長為340、405nm，鎂(二甲苯胺藍法)主、次波長為505和 600nm。
三、單試劑和雙試劑方式
反應過程中只加一次試劑稱單試劑方式，加兩次試劑便為雙試劑方式。目前的生化分析儀大多可用雙試劑方式分析，其優點是：①可提高試劑的穩定性，多數雙試劑混合成單一工作試劑時，其穩定時間縮短;②能設置兩點終點法，來消除來自樣品本身的光吸收干擾;③在某些項目檢測時能消除非特異性化學反應的干擾。如血清ALT測定，血清中的內源性丙酮酸及其它酮酸也可與試劑中的指示酶(乳酸脫氫酶)起反應，使結果偏高。若先加入缺乏α-酮戊二酸的第一試劑，使其它酮酸與指示酶反應之後再加入含有α-酮戊二酸的第二試劑，啟動真正的ALT酶促反應生成丙酮酸，而丙酮酸與乳酸脫氫酶的反應消耗的NAD+能真正反映ALT的活性，從而消除以上副反應的影響。
四、測定過程的自動監測
各種自動生化分析儀或多或少都具有對測定過程進行各種監測的功能，以便在沒有人"監督"化學反應的情況下提高檢測的准確性。高檔分析儀的監測功能更強。
1.試劑空白監測 每種試劑都有一定的空白吸光度范圍，試劑空白吸光度的改變往往提示著該試劑的變質：如利用Trinder反應為原理的檢測試劑會因酚被氧化為醌而變為紅色;鹼性磷酸酶、γ-谷氨醯轉移酶、澱粉酶等檢測試劑會因基質分解出硝基酚或硝基苯胺而變黃;有些試劑久置後變渾濁。這些情況均可使空白吸光度升高。丙氨酸氨基轉移酶、天冬氨酸氨基轉移酶等負反應檢測項目，其試劑在放置過程中空白吸光度會因NADH自行氧化為NAD+而下降等。
試劑空白的測定方法有兩種：①每瓶試劑在使用前通過對試劑空白校準來確定試劑空白吸光度，這種方式適用於先取樣品後加試劑的分析儀。②每個樣品測定前均檢測試劑空白吸光度，適用於先加試劑後取樣品的分析儀。
2.試劑空白變化速率監測 一些酶試劑在反應溫度下不穩定，其空白吸光度可隨著時間逐漸發生變化，這種變化的主要原因與工具酶或輔酶的純度有關，且因試劑的組成和生產廠家的不同而不同。這種變化會影響測定結果的准確性，一般使結果偏高。如果設置此項監測，分析儀在結果計算時會自動減去試劑空白變化速率。在以監測NAD(P)H減少為指示反應的酶活性測定中，空白速率可監測並消除由NADH自身氧化所造成的吸光度下降;在色素原為底物的酶活性測定中，空白速率可監測並消除底物自身分解造成的吸光度升高。有關空白速率監測在膽紅素對鹼性苦味酸速率法測定肌酐負干擾消除中的作用，已如前述。
3.樣品信息監測 由於樣品的溶血、脂濁、黃疸會對測定結果產生非化學反應的干擾。根據溶血、脂濁、黃疸的光譜吸收特性，用雙波長或多波長檢測其性質和程度，一般是測定樣品在600nm/570nm、700nm/660nm和505nm/480nm吸光度比值的大小來分別判斷樣品溶血、脂濁和黃疸程度。然後在結果計算時自動減去這部分干擾，這將有利於提高分析結果的可靠性。
4.結果可靠性監測
(1)終點監測：終點法測定要判斷所選的測光點是否到達終點或平衡點。一些分析儀在所選終點後再選一個測光點，比較這兩點吸光度的差異來判斷反應是否到達終點。
(2)線性期監測：連續監測法選擇時間-吸光度反應曲線上的線性期來計算酶活性或被測物濃度，因此儀器要確定此連續監測期是否呈線性。其監測方法為①將連續監測到的各吸光度值進行線性回歸，計算出各點的方差，根據方差值的大小來判斷是否呈線性;②取連續監測期開始若干點的變化速率與連續監測期最後若干點的變化速率進行比較，來判斷是否為線性期。
5.底物消耗的監測 在連續監測法測定酶活性時，如果在監測期內吸光度上升或下降超過其底物耗盡值，則說明該樣品酶活性非常高，底物將被耗盡，監測期的吸光度將偏離線性，使測定結果不可靠。此時不列印結果或列印結果同時也列印出底物耗盡提示，該樣品應稀釋一定的倍數重新測定。此監測對於採用負反應分析酶活性的方法甚為重要。見圖7-9
6.方法線性范圍監測 每種待測物分析都有一個可測定的濃度或活性范圍，樣品結果若超過此范圍，分析儀將顯示測定結果超過線性范圍的提示，多數分析儀會自動將樣品減量或增量重新測定。
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