不佔優勢的菌床集培養方法有哪些

⑴ 微生物的培養方法

1．平板劃線分離培養法

對混有多種細菌，採用劃線分離和培養，使原來混雜在一起的細菌沿劃線在瓊脂平板表面分離，得到分散的單個菌落，以獲得純種。平板劃線分離法通常有兩種方法：

①分區劃線分離法：此法常用於含菌量較多的細菌的分離。先用接種環挑取標本塗布於瓊脂平板1區（占培養基總面積的¼）並作數條劃線，再於2、3、4區依次劃線。每劃完一個區域，均將接種環燒灼滅菌1次，冷後再劃下一區域，每一區域的劃線均與上一區域的劃線交接1~3次。一個成功分區劃線的平板，培養後分別觀察1區形成菌苔，2區菌落連成線，3區和4區可分離到單個菌落。

②連續劃線分離法：此法常用於含菌量不多的標本或培養物中的細菌分離培養。方法是先將接種物在瓊脂平板上1/5處輕輕塗抹，然後再用接種環或拭子在平板表面曲線連續劃線接種，直至劃滿瓊脂平板表面。

2.瓊脂斜面接種法

主要用於菌落的移種，以獲得純種進行鑒定和保存菌種等。用接種環（針）挑取單個菌落或培養物，從培養基斜面底部向上劃一條直線，然後再從底部沿直線向上曲折連續劃線，直至斜面近頂端處止。生化鑒定培養基斜面接種，用接種針挑取待鑒定細菌的菌落，從斜面中央垂直刺入底部，抽出後在斜面上由下至上曲折劃線接種。

3．穿刺接種法

此法多用於半固體培養基或雙糖鐵、明膠等具有高層的培養基接種，半固體培養基的穿刺接種可用於觀察細菌的動力。接種時用接種針挑取菌落，由培養基中央垂直刺入至距管底0.4cm處，再沿穿刺線退出接種針。雙糖鐵等有高層及斜面之分的培養基，穿刺高層部分，退出接種針後直接劃線接種斜面部分。

4．液體培養基接種法

用於各種液體培養基如肉湯、蛋白腖水、糖發酵管等的接種。用接種環挑取單個菌落，傾斜液體培養管，在液面與管壁交界處研磨接種物（以試管直立後液體淹沒接種物為准）。此接種法應避免接種環與液體過多接觸，更不應在液體中混勻、攪拌，以免形成氣溶膠，造成實驗室污染。

5．傾注平板法

本法主要用於飲水、飲料、牛乳等標本中的細菌計數。取純培養物的稀釋或原標本1ml至無菌培養皿內，再將已融化並冷卻至45~50℃左右的瓊脂培養基15~20ml傾注入該無菌培養皿內，混勻，待凝固後置37℃培養，長出菌落後進行菌落計數，以求出每毫升標本中所含菌數。先數6個方格（每格為1cm2）中菌落數，求出每格的平均菌落數，並算出平皿直徑，然後按下列公式計數，求出每毫升標本中的細菌數。

全平板菌落數=每方格的平均菌落數×лr2

每ml標本中的細菌數=全平板菌落數×稀釋倍數

6．塗布接種法

本法多用於紙片擴散法葯敏試驗的細菌接種。將一定量或適量的菌液加到瓊脂培養基表面，然後用滅菌的L型玻璃棒或棉拭子於不同的角度反復塗布，使被接種液均勻分布於瓊脂表面，然後貼上葯敏紙片，或直接培養，本法經培養後細菌形成菌苔。

⑵ 細菌連續培養有哪些培養方式

細菌連續培養有哪些培養方式
分批培養（Batch Culture）分批培養是指在一個密閉系統內投入有限數量的營養物質後，接入少量微生物菌種進行培養，使微生物生長繁殖，在特定條件下完成一個生長周期的微生物培養方法。補料分批培養（Fed-batch Culture）分批補料式培養是指先將一定量的培養液裝入反應器，在適宜的條件下接種細胞，進行培養，使細胞不斷生長，產物不斷形成，而在此過程中隨著營養物質的不斷消耗，不斷地向系統中補充新的營養成分，使細胞進一步生長代謝，直到整個培養結束後取出產物。分
批補料式培養的特點就是能夠調節培養環境中營養物質的濃度：一方面，它可以避免在某種營養成分的初始濃度過
高時影響細胞的生長代謝以及產物的形成；另一方面，它還能防止某些限制性營養成分在培養過程中被耗盡而影響細胞的生長和產物的形成。同時在分批補料式培養
過程中，由於新鮮培養液的加入，整個過程的反應體積是變化的。根據分批補料控制方式
不同，有兩種分批補料式培養方式：無反饋控制流加和有反饋控制流加。無反饋控制流加包括定流量流加和間斷流加等；有反饋控制流加一般
是連續或間斷地測定系統中限制性營養物質的濃度，並以此為控制指標來調節流加速率或流加液中營養物質的濃度等。分批補料式培養的反應體積不斷變化。連續培養（Continuous Culture)連續培養又叫開放培養，是相對分批培養或密閉培養而言的。連續培養是採用有效的措施讓微生物在某特定的環境中保持旺盛生長狀態的培養方法。具
體地說，當微生物以單批培養的方式培養到指數期的後期時，一方面以一定速度連續流入新鮮培養基和通入無菌空氣，並立即攪拌均勻；另一方面，利用溢流的方
式，以同樣的流速不斷流出培養物。於是容器內的培養物就可達到動態平衡，其中的微生物可長期在指數期的平衡生長狀態和衡定的生長速率上，於是形成了連續生
長。微生物在一定條件下，如果不斷補充營養物質和排除有害的代謝產物，理論上，微生物都可保持恆定的對數生長.通常採用兩種方式：（1）恆濁培養，當微生物在恆濁器中培養進入對數期時，不斷從外界加入新鮮培養基，而同時又流出培養物，用光電池信號控制濁度，以維持恆定的細胞密度.（2）恆化培養，微生物在恆化器中培養，通過控制恆化器中微生物生長所必需營養物的濃度，以保證微生物持續生長.連續培養應用於工業發酵中稱連續發酵，並已實際應用，例如，連續發酵法生產酒精，半連續發酵法生產丙酮、丁醇等。

⑶ 細菌培養的方法有哪些

根據培養細菌的目的和培養物的特性培養方法分為一般培養法、二氧化碳培養法和厭氧培養法三種。

1、一般培養法：將已接種過的培養基,置37℃培養箱內18－24小時,需氧菌和兼性厭氧菌即可於培養基上生長。少數生長緩慢的細菌，需培養3－7天直至一個月才能生長。

為使培養箱內保持一定濕度，可在其內放置一杯水。培養時間較長的培養基，接種後應將試管口塞棉塞後用石臘凡士林封固，以防培養基乾裂。

2、二氧化碳培養法：某些細菌，如牛流產布氏桿菌和胎兒弧菌等需要在含有10％二氧化碳的空氣中才能生長，尤其是初代分離培養要求更為嚴格。將已接種的培養基置於二氧化碳環境中進行培養的方法即二氧化碳培養法，

3、厭氧培養法：常用的厭氧培養方法有厭氧罐法、氣袋法及厭氧箱三種。

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培養時應根據細菌種類和目的等選擇培養方法、培養基，制定培養條件（溫度、pH值、時間，對氧的需求與否等）。

一般操作步驟為先將標本接種於固體培養基上，做分離培養。再進一步對所得單個菌落進行形態、生化及血清學反應鑒定。培養基常用牛肉湯、蛋白腖、氯化鈉、葡萄糖、血液等和某些細菌所需的特殊物質配製成液體、半固體、固體等。

一般細菌可在有氧條件下，37℃中放18～24小時生長。厭氧菌則需在無氧環境中放2～3天後生長。個別細菌如結核菌要培養1個月之久。

通過日常管理、檢測、檢查，了解光合細菌的生長情況，就可以結合當時環境條件的變化進行分析，找出影響光合細菌生長繁殖的原因，採取相應的措施。影響光合細菌生長的原因很多，內因是菌種是否優良，外因是光照、溫度、營養、敵害和厭氣程度等。

溫度、光照和pH值都能影響著光合細菌的生長，而且溫度、光照和pH值之間是互相制約的，溫度與光照的強弱是對立統一的，所以光合細菌生長的最適條件應是互應的，即溫度高，光照應弱；溫度低，光照應強。

如果是溫度高，光照強，pH值就會迅速升高，培養基產生沉澱，抑制光台細菌的生長；如果溫度低，光照弱，光合細菌得不到最佳能源，生長速度也慢。經試驗得出光合細菌生長的最適條件是：

①溫度15～20℃時，光照30000～50000lx，培養基pH值為7.0；

②溫度25～30℃時，光照為3000～5000lx，培養基的pH值為7.0。

⑷ 菌種的培養方法

菌種製作菌液的方法（以一瓶為例）1、取10公斤無菌水裡面的2公斤燒開，然後加入1公斤的紅糖，把紅糖充分融化開，便於把紅糖裡面的有害菌消除。
2、把3公斤的紅糖水和剩下的8公斤無菌水裝到一個15公斤的容器里，混合均勻，等無菌水冷卻到30-40度的時候加菌種1瓶。
3、把菌種和紅糖水充分的攪拌均勻，口上蓋一層塑料薄膜，要密封發酵，不能漏氣。不要裝的太滿，要預留10-15%的緩沖空間，在發酵過程中會產生氣體，裝滿容易漲破塑料容器。
4、發酵7-12天天左右，溫度低要多發酵幾天，打開瓶口，有氣體產生。聞到酸香味夾雜酒糟味和紅糖水的刺激性氣味，到就證明發酵成功。（低於15度不能發酵；15-20度發酵20-15天；20-30度，發酵15-10天；30-40度發酵10-6天，發酵時間越長效果越好）；或者用PH試紙測試，PH值顯示4-5之間即表明發酵成功。如果溫度過低，強烈建議用取暖燈或者火爐等加熱設備升溫。
5、發酵成功後的菌液如果一次不能大量的使用完，就用小瓶子分裝密封保存。使用一瓶打開一瓶。如果沒有分裝。
保存方法：1、菌液宜在常溫下避光保存，底部稍有沉澱或浮有些微白沫均屬正常，若氣味不酸（PH應在4.5以下）或腐臭即已變質勿用。
2、每次用後蓋緊瓶蓋。保管得好，一年後無異味仍可使用，只是活性有所降低，需適當加大用量。
注意事項：1、製作菌液最好用深井水，若用自來水應放置24小時後用，水只需燒開1/5能夠融化開紅糖即可。
2、菌液不要與殺菌劑等葯物同時混用，要用此類葯物，相隔一天以上時間。
3、紅糖用熱水溶化後，水溫降到30-40度，才能投入農盛樂菌種。過高或者過低均影響發酵效果。
4、製作菌液的過程中，不要頻繁打開蓋子，以免進入雜菌，影響發酵效果。
5、如若遇到特殊問題，請撥打銷售電話詳詢，不要擅做主張，以免對你造成損失。

⑸ 微生物培養的方法有哪些

微生物培養法是在人為條件下繁殖微生物的方法。根據微生物的種類以及對養料、溫度、氧氣、水分、酸鹼度等環境條件的要求不同，並聯系生產和實驗上的具體要求，可有不同的培養方法。可分好氣培養法和厭氣培養法兩類。中海生物技術的培養基一是好氣微生物培養法，常用：
①搖床培養法，即將微生物接種於盛有液體培養基的三角瓶後，放在恆溫培養室中的搖床上作有節奏的振盪，使空氣不斷進入培養液中，促其良好生長;
②淺盤培養法，又稱表面培養法，在盤內放一淺層培養基，使微生物能夠充分接觸空氣，而有利於生長繁殖，但此法所需空間大，並且容易污染雜菌;
③深層培養法，適用於好氣微生物的大規模發酵培養，在大容積的液體培養基中，通入無菌空氣，並不斷攪拌，可使微生物充分接觸空氣，迅速繁殖並積累代謝產物。二是厭氣微生物培養法，實驗室常用化學還原劑或抽氣機吸除培養基中的分子氧，也有用靜止狀態的深層培養法。在生產中常用密封式發酵罐或不通風的固體發酵法。

⑹ 怎麼做細菌培養

細菌培養是一種用人工方法使細菌生長繁殖的技術。大多數細菌可用人工方法培養，即將其接種於培養基上，使其生長繁殖。培養出來的細菌用於研究、鑒定和應用。
具體培養步驟：
以光合細菌培養方法為例。光合細菌培養的方法，按次序分為容器、工具的消毒，培養基的制備，接種和培養管理四個步驟。
（一）容器、工具的消毒參考、此處從略。
（二）培養基的制備
1．培養用水
如果培養的光合細菌是淡水種，菌種培養可用蒸餾水，生產培養可用消毒的自來水（或井水）配製。如果培養的光合細菌是海水種，則用天然海水配製培養基，注意在海水中加入磷元素時，不能用磷酸氫二鉀，應用磷酸二氫鉀，不然會產生大量沉澱。
2．滅菌和消毒菌種培養用的培養基應連同培養容器用高壓蒸氣滅菌鍋滅菌。小型生產性培養可把配好的培養液用普通鋁鍋或大型三角燒瓶煮沸消毒。大型生產性培養則把經沉澱砂濾後的水用漂白粉（或漂白液）消毒後使用。
3．培養基配製根據所培養種類的營養需要選擇合適的培養基配方。按培養基配方把所需物質稱量，逐一溶解，混合，配成培養基。也可先配成母液，使用時按比例加入一定的量即可。
（三）接種培養基配好後，應立即進行接種。光合細菌生產性培養的按種量比較高，一般為20%～50%，即菌種母液量和新配培養液雖之比為1∶4～1∶1，不應低於20%，尤其是微氣培養，接種量更應高些，否則光合細菌在培養液中很難占絕對優勢，影響培養的最終產量和質量。
（四）培養管理光合細菌的培養過程中，管理工作包括日常管理操作和測試，生長情況的觀察、檢查以及出現問題的分析處理等三個方面。
日常管理和測試：
（1）攪拌和充氣：光合細菌培養過程中必須充氣或攪拌，作用是幫助沉澱的光合細菌上浮獲得光照，保持菌細胞的良好生長。小型厭氣培養常用人工搖動培養容器的方法使菌細胞上浮，每天至少搖動三次，定時進行。大型厭氣培養則用機械攪拌器或使用小水泵使水緩慢循環運轉，保持菌體懸浮。微氣培養是通過充氣幫助菌體上浮，因為培養液中溶解氧含量增加，光合細菌繁殖受到抑制，產量下降，所以必須嚴格控制充氣量。一般採用定時斷續充氣，充氣量控制在1～1.5升/（升·h）之間，溶解氧量保持在1×10-6以下。
（2）調節光照度：培養光合細菌需要連續進行照明。在日常管理工作中，應根據需要經常調整光照度。白天可利用太陽光培養，晚上則需要人工光源照明，或完全利用人工光源培養。人工光源一般使用碘鎢燈或白熾燈泡。不同的培養方式所要求的光照強度有所不同。一般培養光照強度應控制在2000～5000lx之間。如果光合細菌生長繁殖快，細胞密度高，則光照強度應提高到5000～10000lx。光照強度可通過調整培養容器與光源的距離或使用可控電源箱調節。
（3）調節溫度：光合細菌對溫度的適應范圍很廣，一船在23～39℃的范圍內均能正常生長繁殖，可不必調整溫度。在常溫下培養也可通過調整，將溫度控制在光合細菌生長繁殖最適宜的范圍內，使光合細菌更好地生長。
（4）酸鹼度的測定和調整：在培養光合細菌的過程中，必須注意酸鹼度的變化。由於光合細菌的大量繁殖，菌液的pH值上升，這意味著光合細菌正處於指數生長期。但當pH值超過最適范圍甚至生長的適應范圍時，光合細菌的生長達到頂點，隨後生長下降。如果能及時調整菌液的酸鹼度，使pH值保持在最適范圍，則光合細菌能繼續生長繁殖。為了延長光合細菌的指數生長期，提高培養基的利用率和單位水體的產量，測定和調整PH值是非常重要的。一船採用加酸的辦法來降低菌液的酸鹼度，醋酸、乳酸和鹽酸部可使用，最常用的是醋酸。在日常的管理工作中，必須每天或隔天測定菌液的pH值，當pH值上升超出最適范圍，即加酸調整。如果在培養過程中不測定、調整酸鹼度，當光合細菌的生長達到一定密度後pH值也上升到9以上，細菌生長受阻，此時應採收或再擴大培養。在培養過程中不調整PH值，獲得的最終產量低。

⑺ 食用菌栽培有哪幾種方法

微生物的培養方法有三種，即純培養法、選擇性培養法和優勢培養法。
一、 菌種製作的基本設備
1、 食用菌菌種製作的工藝流程 培養料的貯備和預處理------- 容器、工具的洗滌------ 配料、培養基製作------ 滅菌------ 冷卻------ 接種------ 培養------- 貯存 2、 基本設施 ① 廠房：② 原料庫③原料預處理場地④ 洗滌室：5配料室⑥ 滅菌室⑦ 接種室⑧ 化驗室 ⑨ 培養室⑩貯存室 二、 純種分離 菌種的分離方法主要有：孢子分離法、組織分離法、基內菌絲分離法和土中菌絲分離法。
1、 孢子分離法：屬有性繁殖。對於香菇、平菇異宗結合的菇類，為避免產生單孢不孕現象，必須採用多孢分離法。單孢分離法主要用於雜交育種的研究。
⑴ 種菇的選擇和處理 種菇選擇的標准：必須純正，具有本菌株性狀，發育健壯，無病蟲害，成熟度適當。種菇選定後，首先除去附著在菇體表面的雜物，如蘑菇、草菇可用0.1%升汞浸泡消毒2-3分鍾，然後用無菌水漂洗3次，以洗除表面附著的葯物，最後用無菌紗布吸干水分。香菇、平菇可用75%酒精進行表面消毒。
（2）多孢分離法 ① 整菇播種法② 鉤懸法③ 貼附法 4菌褶上抹取孢子法⑤ 孢子印分離法 ⑥ 空中孢子捕捉法
（3）單孢子分離法 一般採用方法：平板稀釋法、連續稀釋法、毛細管法等。
2、 組織分離法
（1） 子實體分離法
（2）菌核分離法
（3）菌索分離法：對一些不易找到子實體及菌核的菌類
3、基內菌絲分離法 對於子實體只有在特定的季節下出現，平時不易採到，或子實體小而薄或呈膠質狀態
（1）菇木（或耳木）分離法 在食用菌繁殖旺盛期
（2） 代料基質分離法 分離前，選擇一批子實體發生早、產量高、菇體尚幼嫩且生活力強而無病蟲害的栽培袋，待子實體將近成熟時，去掉子實體，然後用75%酒精將培養袋進行消毒後，在培養料下1.5cm處挑取0.3cm的培養料小方塊組織，接入試管培養基的中央，置於恆溫下培養。
3、 土中菌絲分離法： 用於採集生長在土中的菇類菌絲體
三、制種技術 採用孢子分離、組織分離和基內菌絲分離等方法分離培養而獲得的純菌絲，經過原種的擴大培養和母種、栽培種的製作，即可作為食用菌生產用的菌種。
1、 菌種的類型 母種、原種、生產種
2、 培養基的種類 天然培養基、合成培養基、半合成培養基
3、 原種製作 從擔孢子或菇體組織直接分離培養獲得的原種或引進的原種
4、 母種及生產種製作 將原種菌絲體移植到由糞、草、木屑、棉籽殼或麥粒等原料配製成的培養基上，而製成的菌種稱母種。將母種再擴大繁殖製成的菌種，稱栽培種或生產種。
5、 培養基滅菌
（1）高壓蒸汽滅菌法 瓊脂培養基採用1.05kg/cm2 壓力，溫度121℃ ，滅菌45-60分鍾；母種和栽培種固體培養基採用1.2-1.5kg/cm2 壓力，溫度123-129℃ ，滅菌1-1.5 小時。 （2） 常壓蒸汽滅菌
6、 接種室消毒滅菌 熏蒸消毒法：甲醛與高錳酸鉀混合熏蒸法
（2）紫外線消毒：（3）石碳
酸滅菌
7、 接種 在無菌條件下，將原種或母種菌種移接到經過嚴格滅菌的培養基上，稱為接種。 8、 菌種培養
四、菌種保藏方法及復壯技術
1、 菌種保藏方法 菌種保藏的基本手段是採用低溫、冷凍、乾燥、減少供氧量等方法，終止其繁殖，降低其代謝強度，使之處於休眠狀態。