微生物的分離有哪些方法

⑴ 微生物純種分離的方法有哪些

自然界中的微生物總是雜居在一起 即使一粒土或一滴水中也生存著多種微生物 要研究其中某一種微生物 首先必須將它分離出來 下面介紹幾種純種微生物的分離方法
平板劃線分離 將已經熔化的培養基倒入培養皿中製成平板 用接種環沾取少量待分離的材料 在培養基表面平行或分區劃線（圖5-5）然後 將培養皿放入恆溫箱里培養 在線的開始部分 微生物往往連在一起生長 隨著線的延伸 菌數逐漸減少 最後可能形成純種的單個菌落
液體稀釋法 將待分離的樣品經過大量稀釋後 取稀釋液均勻地塗布在培養皿中的培養基表面 培養後就可能得到單個菌落
利用選擇培養基進行分離 不同的微生物對不同的試劑 染料 抗生素等具有不同的抵抗能力 利用這些特點可配製出適合某種微生物生長而限制其他微生物生長的選擇培養基 用這種培養基來培養微生物就可以達到純種分離的目的
菌絲尖端切割 這種方法適於絲狀真菌 用無菌的解剖刀切取位於菌落邊緣的菌絲的尖端 將它們移到合適的培養基上培養後 就能得到新菌落

⑵ 試述常用的細菌分離方法及其用途

分離純化的目的，都是為了獲得特定的、純的微生物
方法有以下幾種，其實只要掌握簡單的固體培養基分離純化就夠你使用了，其他的可以了解一下，我是這樣認為
因為具體方法內容太多，所以只列出了方法名稱。

從混雜微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過程稱為微生物分離與純化。
1、用固體培養基分離和純化
1.1 稀釋倒平板法
1.2 塗布平板法
1.3 平板劃線法
1.4 稀釋搖管法
2、用液體培養基分離和純化
3、單細胞（孢子）分離
4、選擇培養分離
4.1 利用選擇平板進行直接分離
4.2 富集培養
5、二元培養物

⑶ 微生物的分離培養

微生物在自然界中呈混雜狀態存在，要獲得所需菌種，必需從中把它們分離出來。在保存菌種時不慎受到到污染也需予以分純。微生物分離和純化的方法很多扒則此，但基本原理卻是相似的，即將待分離的樣品進行一定的稀釋，並使微生物的細胞(或孢子)盡量以分散狀態存在，然後使其長成一個個純種單菌落。然而上述工作又離不開接種，即將一種微生物移到另一滅過菌的培養基上的過程。
微生物接種分類材料工具
1.恆溫培養箱
2.接種環、玻璃棒、吸管、酒精燈
3.培養基
4.大腸桿菌、枯草桿菌、金黃色葡萄球菌、酵母菌等 接種操作方法
斜面接種(接金黃葡萄球菌)
(1)操作前，先用75%酒精擦手，待酒精揮發後點燃酒精燈。
(2)將菌種管和斜面握在左手大拇指和其它四指之間，使斜面和有菌種的一面向上，並處於水平位置。
(3)先將菌種和斜面的棉塞旋轉一下，以便接種時便於拔出。
(4)左手拿接種環(如握鋼筆一樣)，以火焰上先將環端燒紅滅菌，然後將有可能伸入試管其餘部位也過火滅菌。
(5)用右手的無名指、小指和手掌將菌種管和待接斜面試管的棉花塞或試管帽同時拔出，然後讓試管口緩緩過火滅菌(切勿燒過燙)。
(6)將灼燒過的接種環伸入菌種管內，接種環在試管內壁或未長菌苔的培養基上接觸一下，讓其充分冷卻，然後輕輕刮取少許菌苔，再從菌種管內抽出接種環。
(7)迅速將沾有菌種的接種環伸入另一支待接斜面試管。從斜面底部向上作「Z」形來回密集劃線。有時也可用接種針僅在培養基的中央拉一條線來作斜面接春迅種，以便觀察菌種的生長特點。
(8)接種完畢後抽出接種環灼燒管口，塞上棉塞。
(9)將接種環燒紅滅菌。放下接種環，再將棉花塞旋緊。
液體接種
(1)由斜面培養基接入液體培養基，此法用於觀察細菌的生長特性和生化反應的測定，操作方法與前相同，但使試管口向上斜，以免培養液流出接入菌體後，使接種環和管內壁磨擦幾下以利洗下環上菌體。接種後塞好棉塞將試管在手掌中輕輕敲打，使菌體充分分散。
(2)由液體培養基接種液體培養基，菌種是液體時，接處除用接種環外尚用無菌吸管或滴管。接種時只需在火焰旁拔出棉塞,將管口通過火焰,用無菌吸管吸取菌液注入培養液內,搖勻即可。
平板接種
將菌在平板上劃線和塗布。
(1)劃線接種 見分離劃線法。
(2)塗布接種 用無菌吸管吸取菌液注入平板後，用滅菌的玻棒在平板表面作均勻塗布。
穿刺接種
把菌種接種到固體深層培養基中，此法用於嫌氣性細菌接種或為鑒定細菌時觀察生理性能用。
(1)操作方法與上述相同，但所用的接種針應挺直。
(2)將接種針自培養基中心刺入，直刺到接近管底，但勿穿透，然後尚原穿刺途徑慢慢拔出。
分離操作方法
稀釋分離法
通過不斷稀釋使被分離的樣品分散到最低限度，然後吸取一定量注入平板與溫度適合溶化了的瓊脂培養基混合，這樣分散的細菌被固定在原處而形成單菌落。
(1)將大腸桿菌或酵母菌用無菌水製作菌懸液。
(2)取若干支無菌試管，每支內盛9ml無菌水。
(3)吸取1ml制備好的菌懸液，置於第一支含有9ml無菌水的試管內，這樣就稀釋了10倍，也就是10-2。
(4)從第一支試管內(10-2)吸取1ml注入第二支含有無菌水的試管內，這樣就稀釋了100倍，也就是10-2。
(5)用同樣方法操作，直至稀釋至10-5-10-6。
(6)分別盯枝精確吸取10-5-10-6各稀釋度菌液0.2ml加入編好號的空無菌平皿中，同一稀釋度重復做三個平皿。
(7)將已溶化並冷卻至45℃的瓊脂培養基倒入上述各平皿內，輕輕旋轉使培養基與菌懸液充分混勻，凝固後倒置於37℃或38℃度恆溫箱中培養24-48小時，觀察平板上菌落生長和分布情況。
平板劃線分離法
平板劃線分離法是接種環在平板培養基表面通過分區劃線而達到分離微生物的一種方法。其原理是將微生物樣品在固體培養基表面多次作「由點到線」稀釋而達到分離目的。
(1)倒平板 溶化牛肉膏蛋白腖瓊脂培養基倒平板，水平靜置待凝。
(2)在酒精燈光焰上灼燒接種環，待冷，取一接種環金黃葡萄球菌、大腸桿菌混合菌液。
(3)左手握瓊脂平板稍抬起皿蓋，同時靠近火焰周圍，右手持接種環伸入皿內，在平板上一個區域作之形回劃線，劃線時例接種環與平板表面成30-40°角度輕輕接觸，以腕力在表面作輕快的滑動，勿使平板表面劃破或嵌進增基內。
(4)灼燒接種杯，以殺滅接種環上尚殘余的菌液，待冷卻後，再將接種環伸入皿內，在第一區域劃過線的地方稍接觸一下後，轉動90°，在第二區域繼續劃線。
(5)劃畢後再灼燒接種杯，冷卻後用同樣方法在其他區域劃線。
(6)全部劃線完畢後，在平皿底用特種蠟筆註明菌種、日期、組別、姓名。將整個培養皿倒置放入恆溫培養箱。
(7)37℃經過24-48小時培養後取出觀察。注意菌落的開關、大小、顏色、邊緣、表面結構、透明度等性狀。 (1)接種室應保持清潔，用煤粉酚皂液擦洗檯面及牆壁，定期用乳酸或甲醛熏蒸。每次使用前，均應用紫外燈滅菌。定期對接種室作無菌程度的檢查。
(2)進入接種室前，應先做好個人衛生工作，在緩沖間內要更換工作鞋帽、工作衣、戴口罩。工作衣、工作鞋、口罩只准在接種室內使用。不準穿到其它地方去，並要定期更換、消毒。
(3)接種的試管、三角並瓶等應做好標記，註明培養基、菌種的名稱、日期。移入接種室內的所有物品，均須在緩沖室用70%酒精擦試干凈。
(4)接種前，雙手用70%酒精或新潔爾消毒，操作過程不離開酒精燈火焰;棉塞不亂放;接種工具使用前後均需火焰滅菌。
(5)培養箱應經常清潔消毒。

⑷ 微生物分離的方法及評價請各位知識淵博的師兄弟幫幫忙。。。。。感激不盡

1.物理方法，如：離心慶瞎搜法、膜過濾法、空氣攪拌法。
2.化學方法，如：用CaCO3提高PH值進行培養。
3.誘餌法，如：用塗石蠟的棒置於碳源培養基中、花粉。
4.富集培養。
5.常規分離法（劃線、土神銀布）、生化反應分離法（透明圈法、變色圈法、抑菌圈法、生長圈法）、通過控制營養和培養條件譽歷進行分離。

⑸ 微生物的分離與純化的常用方法有哪些

分離：

稀釋倒平皿法

平板劃線法

單細胞挑取法

利用選擇培養基分離法

純化：

1、若是你不知道你所要純化的微生物的特徵，最簡單的不知道它的菌落特徵和形態大小，那現根據你要分離菌的特性，找適合的初篩培養基，找到你要純化的菌。如纖維素菌，你在培養基中加纖維素粉或CMC-Na作碳源，這樣就可以篩選出分解纖維素的菌。然後再用下面的方法繼續純化。

2、若你知道目標菌的形態，可以直接挑混合菌劃平板，直到長出當個菌落，並且在鏡下沒有雜菌即可；或者挑菌稀釋塗布得到當個菌落也行。

⑹ 分離純化微生物的方法有哪些各方法適用分離什麼菌種

主要有
1、稀釋倒平板法
首先把微生物懸液作一系列的稀釋（如1:10、1:100、1:1000、1:10000），然後分別取不同稀釋液少許，與已熔化並冷卻至50℃左右的瓊脂培養基混合，搖勻後，傾入滅過菌的培養皿中，待瓊脂凝固後製成可能含菌的瓊脂平板，保溫培養一定時間即可出現菌落。如果稀釋得當，在平板表面或瓊脂培養基中就可出現分散的單個菌落，這個菌落可能就是由一個細菌細胞繁殖形成的。隨後挑取該單個菌落，或重復以上操作數次，便可得到純培養。
2.、稀釋塗布平板法
將已熔化的培養基倒入無菌平皿，製成無菌平板，冷卻凝固後，將一定量的微生物懸液滴加在平板表面，再用無菌玻璃塗棒將菌液均勻分散至整個平板表面，經培養後挑取單個菌落。
3、平板劃線法
將微生物樣品在固體培養基表面多次作「由點到線」稀釋而達到分離。
4、稀釋搖管法
先將一系列盛無菌瓊脂培養基的試管加熱使瓊脂熔化後冷卻並保持在50℃左右，將待分離的材料用這些試管進行梯度稀釋，試管迅速搖動均勻，冷凝後，在瓊脂柱表面傾倒一層滅菌液體石蠟和固體石蠟的混合物，將培養基和空氣隔開。

⑺ 微生物分離方法

乳糖是還原性糖嗎
還原性糖種類：還原性糖包括葡萄糖、果糖、半乳糖、乳糖、麥芽糖等。
非還原性糖有蔗糖、澱粉、纖維素等，但它皮純們都可以通過水解生成相應的還原性單糖。
還原性糖概念：還原糖是指具有還原性的糖類。在糖類中，分子中含有游離醛基或酮基的單糖和含有游離醛基的二糖都具有還原性。
葡萄糖分子中含有游離醛基，果糖分子中含有游離酮基，乳糖和麥芽糖分子中含有游離的醛基，故它們都是還原糖。
還原性糖鑒定：
鑒定原理：生物組織中普遍存在的還原糖種類較多，常見的有葡萄糖、果糖、麥芽糖。它們的分子內都含有還原性基團（游離醛基或游離酮基）。用斐林試劑、班氏試劑、銀氨溶液等可以檢驗生物組織中還原糖存在與否。
（1）利用斐林試劑：斐林試劑由質量濃度為0.1g／mL的氫氧化鈉溶液和質量濃度為0.05g／mL的硫酸銅溶液配製而成，二者混合後，立即生成淡藍色的Cu(OH)2沉澱。Cu(OH)2與加入的葡萄糖在加熱的條件下，能夠生成磚紅色的Cu2O沉澱，而葡萄糖本身則氧化成葡萄糖酸。其反應式如下：
CH2OH—(CHOH)4—CHO＋2Cu(OH)2→CH2OH—(CHOH)4—COOH＋Cu2O↓＋2H2O
用斐林試劑鑒定還原糖時，溶液的顏色變化過程為：淺藍色→→棕色→磚紅色(沉澱)。
(2)利用班氏試劑：班氏試劑由A液(硫酸銅溶液)，B液(檸檬酸鈉和碳酸溶液)配製而成。將A溶液傾注人B液中，邊加邊攪，如有沉澱可過濾。實驗原理與斐林試劑相似，所不同的是班氏試劑可長期使用。班氏試劑A液中的硫酸銅溶液與B液中的無水硫酸鈉和檸檬酸鈉相遇，能產生可溶性的又略能離解出cu2+的檸檬酸銅。
(3)利用銀氨溶液：銀氨溶液是在2％的AgNO3溶液中逐滴滴人2％的稀液握畢氨水，至最初產生的沉澱恰好溶解為止，這時得到的溶液就是銀氨溶液。銀氨溶液中含有Ag(NH3)
20H(氫氧化二氨合銀)，這是一種弱氧化劑，能把醛基氧化成羧基，同時Ag+被還原成金屬銀。還原生成的銀附著在試管壁上，形成銀鏡。可見，銀鏡反應也可用於鑒定可溶性還原糖。鑒定的結果是出現銀鏡。
用班氏試劑鑒定可溶性還原糖，比用斐林試劑更簡便
斐林試劑要現配現用，否則實驗難以得到滿意結果，因為此反應利用的是斐林試劑中的Cu(OH)
2產物作為弱氧化劑參與與還原糖的反應，而我們知道，Cu(OH)
2是一種沉澱物質，放置過久沉澱過多則不利於反應，而班氏試劑是斐林試劑的改良，它利用檸檬酸作為Cu2+的絡合劑，使溶液穩定、靈敏度高且可以長期使用，故更簡便。
班氏試劑與斐林試劑比較
首先，兩者的配方不一樣。斐林試劑主要由質量濃度為0.1g•mL-1的NaOH溶液和質量濃度為0.05g•mL-1的CuSO2溶液配製而成。其中0.1gmL-1的NaOH溶液稱為斐林試劑甲，0.05g•mL-1的CuSO4溶液稱為斐林試劑乙鬧芹。而班氏試劑的配方為：①400mL水中加85g檸檬酸鈉和50g無水碳酸鈉；②50mL加熱的水中加入8.5g無水硫酸銅，製成CuSO4溶液；③把CuSO2溶液倒入檸檬酸鈉?Na2CO3溶液中，邊加邊攪，如產生沉澱可濾去。
??其次，兩者在反應原理上略有差別。利用斐林試劑鑒定時，斐林試劑甲和斐林試劑乙直接反應產生Cu（OH）2，Cu（OH）2和可溶性還原糖反應產生磚紅色沉澱。而班氏試劑中Cu（OH）2的產生卻是這樣的：檸檬酸鈉和碳酸鈉均為強鹼弱酸鹽，在水中它們均可水解產生OH-，與檸檬酸鈉?Na2CO3溶液和CuSO4溶液混合時，Cu2+和OH-結合，生成Cu（OH）2，Cu（OH）2與葡萄糖中的醛基反應產生磚紅色沉澱。

⑻ 微生物分離方法

微生物分離法是獲得微生物純培養物的一種分離方法。通過這個方法可實現一種微生物的培養，或獲得一個細胞的後代。其具體方法有：

1、稀釋倒平皿法。將待分離的材料作一系列稀釋，取不同稀釋度適量塗布於固體培養基平板上或與已熔化的固體培養基一起傾注入平板內，經過培養即有一個微生物細胞繁殖來的單個菌落。

2、劃線法。先將已熔化的固體培養基製成平板，待凝後，取分離材料在上面劃線，可作平行劃線、扇形劃線或其他形狀的連續劃線，使菌樣逐漸減少，最後得到單個孤立的菌落。

(8)微生物的分離有哪些方法擴展閱讀：

微生物分離技術的應用措施：

1、減少毒性氧物質的毒害作用：由於常規培養方法使用的高濃度營養基質不利於微生物生長，適當降低營養基質的濃度可以減弱這種不利影響。發現低濃度基質的培養基培養出的細菌在數量和種類上均多於高濃度基質的培養基，但營養濃度過低時會使培養出的微生物數量反而下降。

2、維持微生物間的相互作用：在培養基中加入微生物相互作用的信號分子就可簡單模擬微生物間的相互作用，滿足微生物生長繁殖的要求。

3、供應新型的電子供體和受體：不同微生物的代謝過程不同，因此對反應的底物要求也不盡相同。供應微生物需要的特有底物有助於新陳代謝反應的進行及微生物的正常生長。大量的研究表明，將新穎的電子供體和受體應用到微生物培養中，能夠發現未知的生理型微生物。

4、分散微生物細胞：自然界中很多微生物聚集生長，形成「絮體」和「顆粒」等，致使其內部的微生物不易被培養。對「絮體」和「顆粒」進行適度的超聲處理，將細胞分散再進行培養，可以使更多的微生物接觸培養基而得到培養。

5、延長培養時間：對「寡營養菌」的培養，可適當延長培養時間，使其能長至肉眼可見的尺度。當然培養時間不能無限增長，因為培養時間越長，對培養環境的無菌要求就越高[4]。

6、利用瓊脂替代物：瓊脂對某些微生物具有毒性作用，採用無害且凝結作用較好的替代物質作為培養基固化劑，可以增加微生物的可培養性。

⑼ 微生物分離的方法及其評價 急求

1、塗布法：制備菌懸液，進行塗布，選擇單菌落。一般是從混雜的菌群中，分離單菌落。
2、劃線法：用接種針（或接種鏟）進行劃線處理，具體方法有：分區劃線，之字劃線等。適用於分離單菌落。一般是後期使用。
3、點接法：在培養基點樣，培養。利於觀查。
4、 另外，可以在培養基上加入抗其他類菌落生長的試劑或化合物。來抑制其他不需要微生物的生長，進行分離。即選擇培養基的使用。

⑽ 微生物各種分離方法的優缺點

最常用的兩種方法：
1．平板劃線分離法
把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細胞用接種環在平板培養基，通過分區劃線稀釋而得到較多獨立分布的單個細胞，經培養後生長繁殖成單菌落，通常把這種單菌落當作待分離微生物的純種
優點：可以觀察菌落特徵，對混合菌進行分離。
缺點：不能計數，一般用於從菌種的分離純化。
例如：篩選大腸桿菌菌種。
2．稀釋塗布平板法
將菌液進行一系列的梯度稀釋，然後將不同稀釋度的菌液分別塗布到瓊脂固體培養基的表面，進行培養。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養基表面形成單個的菌落。
優點：可以計數，可以觀察菌落特徵。
缺點：吸收量較少，較麻煩，平板不幹燥效果不好，容易蔓延。一般用於平板培養基的回收率計數。
例如：測定純凈水中大腸桿菌的含量。