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去除血樣中的蛋白採用哪些方法

發布時間:2023-05-08 09:01:29

1. 除蛋白都有哪些方法

目前已有很多去蛋白方法可供使用,但使用各種方法之前應了解該方法是否會導致生物樣品中的葯物發生分解或影響葯物的提取等。
通常除蛋白的方法是在含蛋白樣品中加入適當的沉澱劑或變性劑,使蛋白質脫水而沉澱(如有機溶劑、中性鹽),有的是由於蛋白質形成不溶性鹽而析出(如高氯酸),離心後取上清液用於分析。甲醇、乙腈、丙酮和乙醇是沉澱蛋白常用的有機溶劑,中性鹽可用氯化銨等。無機鹽沉澱蛋白是可逆的,即將蛋白稀釋後仍具有生理活性,而有機溶劑和酸類沉澱的蛋白是不可逆的。也可用透析法與超濾法除去樣品中蛋白。
當然還可以熱沉澱,強酸強鹼變性沉澱,或者蛋白酶處理

2. 除蛋白都有哪些方法

啤酒和酒精濃度高的飲料中的泡沫,其苦味成分中能去除腦內積聚的蛋白質「Aβ」。啤酒泡沫本身的苦味成分「異α-酸」能激活腦內的免疫細胞——「小神經膠質細胞」, 有除去Aβ的作用。服食過異α-酸餌料的老鼠和普通的老鼠相比,Aβ約減少5成,認知功能也得到提高。

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引起尿蛋白的原因

腎小球性蛋白尿,無論是原發還是繼抓腎小球損害,是臨床上最常見的蛋白質。腎小球濾過膜有病變,基底膜增厚,孔隙增大,蛋白漏出增加,甚至分子量更大的球蛋白亦可漏出。

腎小管性蛋白尿 是指腎小球濾過正常,腎小管重吸收障礙,最常見各種原因引起的間質性腎炎,腎靜脈血栓形成,腎動脈栓塞,重金屬鹽類中毒等。此類尿蛋白量較腎小球性蛋白量少。

腎組織性蛋白尿又稱分泌性蛋白尿。腎小球濾過功能和腎小管重吸收功能均正常,由於尿液形成過程中,腎小管代謝產生的蛋白質滲入尿液中所致,如腎小管拌和遠曲腎小管產生的Tamm-Horsfall蛋白以蛋白(一種大分子糖蛋白),此種蛋白易形成管型和結石核心。

參考資料:人民網-啤酒苦味能有效預防老年痴呆症 可去除多餘蛋白質

3. 如何從血液中分離純化清蛋白請舉出兩種分離純化的方法

一.血清ǐ-球蛋白的初步提取
1. 血細胞與血清分離:
取人血液 1000ml,放置10min, 1000rpm離心20min .棄沉澱,留上清備用(沉澱為血細胞,上部為血清).
2. 乳糜粒分離:4000rpm 10°C離心10分鍾,採用密度梯度離心
梯度液配置:離心管下部3/4容積加血漿,上部1/4容積加0.5MnaCl+0.3MEDTA,PH7.4 乳糜粒上浮,將乳糜粒吸出,留其餘液體備用.
3. 血清蛋白分離:除去球蛋白,白蛋白及其它蛋白質.

4. 去除血漿中蛋白質可釆用的方法

加水混溶的有機溶劑脫水比如甲醇
加中性鹽析比如硫酸鈉
加強酸生成不溶性鹽
加重金屬鹽類沉澱
加熱使蛋白質變性
還有酶解法

5. 消除血漿蛋白乾擾的方法有哪些各有什麼特點

(1)鹽析法,此方法並未破壞蛋白質天然狀態,沉澱出的蛋白質可不變性,所以鹽析法是分離制備蛋白質或蛋白類生物制劑的常用方法

(2)有機溶劑沉澱法,通過破壞蛋白質的水化膜而使蛋白質沉澱,此方法在常溫下可使蛋白質變性,低溫下可使變性速度減慢。

(3)重金屬鹽沉澱法,可與蛋白質結合形成不溶於水的蛋白質鹽沉澱,引起蛋白質變性。臨床用於救重金屬鹽中毒。

(5)去除血樣中的蛋白採用哪些方法擴展閱讀:

溶劑沉澱法:上清液弱鹼性。

中性鹽析法:上清液近中性,但中性鹽易污染柱。

強酸沉澱法:上清液酸性,可用HPLC不能直接用LC-MS。

熱凝固法:只能去除熱變性蛋白。

最初用鹽析法只是將血漿蛋白分為白蛋白和球蛋白,後來用分段鹽析法可細分為白蛋白、擬球蛋白、優球蛋白和纖維蛋白等組分。用醋酸纖維薄膜電泳法可分為白蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白等5條區帶,而用分辨力較高的聚丙烯醯胺凝脈電泳法則可分為34條區帶。

6. 如何去除血清中的蛋白質,保留DNA

採用異丙醇,可以將蛋白變性,通過離心後,蛋白就會沉在下面的有機相,DNA在上面的水相。

7. 生物樣品中蛋白質的處理方法有哪些

一。蛋白質沉澱方法
1.中性鹽鹽析法
⑴在一定的
ph值及溫度條件下,改變鹽的濃度(即離子強度)達到沉澱的目的,稱為「ks」分級鹽析法。
(ks鹽析:固定ph,
溫度,改變鹽濃度)
⑵在一定的離子強度下,改變溶液的ph值及溫度,達到沉澱的目的,稱為「β」分級鹽析法。
(β鹽析:固定離子強度,改變ph及溫度。)
2.等電點沉澱法
蛋白質等電點沉澱法是基於不同蛋白質離子具有不同等電點這一特性,依次改變溶液ph值的辦法,將雜蛋白沉澱除去,最後獲得目標產物。
3.有機溶劑沉澱法
許多能與水互溶的有機溶劑如乙醇、丙酮、甲醇和乙腈,常用於低鹽濃度下沉澱蛋白質。
4.非離子型聚合物沉澱法
20世紀60年代非離子型聚合物開始用於分離血纖維蛋白原和免疫球蛋白,從此高相對分子質量非離子聚合物沉澱蛋白質的方法被廣泛使用,如:聚乙二醇(peg)、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、葡聚糖等。
5.金屬沉澱法
能與羧基、胺基等含氮化合物以及含氮雜環化合物強烈結合的金屬離子,如:mn2+、fe2+、co2+、ni2+、cu2+、zn2+、cd2+;
能與羧酸結合而不與含氮化合物結合的金屬離子,如:ca2+、ba2+、mg2+、pb2+;
與巰基化合物強烈結合的金屬離子,如:hg2+、ag+、pb2+。
實際使用時,金屬離子的濃度常為0.02
mol/l。
6.親和沉澱
初始階段:將一個目標蛋白質與鍵合在可溶性載體上的親和配體絡合成沉澱;
所得沉澱物用一生中適當的緩沖溶液進行洗滌,洗去可能存在的雜質;
用一種適當的試劑將目標蛋白質從配體中離解出來。
7.選擇性變性沉澱法
(1)例如對於α-澱粉酶等熱穩定性好的酶,可以通過加熱進行熱處理,使大多數雜蛋白受熱變性沉澱而被除去。
(2)根據欲分離物質所含雜質的特性,通過改變ph值或加進某些金屬離子等使雜蛋白變性沉澱而被除去。
8.反膠束萃取蛋白質
菌體細胞提取
固液分離是生物產品生產中的重要單元操作。培養基、發酵液、某些中間產品和半成品等都需進行固液分離。發酵液由於種類多、粘度大及成分復雜,其固液分離最為困難。
固液分離的方法很多,生物工業中常規的方法有分離篩、重力沉降、浮選分離、離心分離和過濾等,其中用於發酵液固液分離的方法主要是離心分離和過濾。
二。超濾膜濾去。

8. 去除蛋白質常採用的方法有哪些

去除蛋白質常採用的方法就是透析法,因為蛋白質是大分子物質,他不能透過半透膜,所以利用半透膜就可以把蛋白質除掉。

9. 如何去除血清中的蛋白,急急急

取新鮮血清2ml,加入等量PBS和飽和硫酸銨溶液,混勻後靜止30min,3
000
rpm離心10min,沉澱物即是γ?球蛋白。該步驟可重復1?2次,以保證純度銀明。
將γ?球蛋白通過SephadexG?25層析作用,用PBS洗脫,除去蛋白質中的小分子銨鹽,從而達到γ?球蛋白純化的目的。洗脫鋒芹告下來的收集液可以用磺基水楊酸檢測蛋白質的存在,用奈氏試劑檢測是否除凈NH4+,然後把含有γ?球蛋白的樣品合並收集。
用磺基水楊酸沉澱蛋白質
產生化學反應啦,蛋白質裡面含的成份是鈣,水楊酸裡面喊有首槐CO3離子,兩者結合行成CACO3為白色沉澱物
從而達到去處血清中的蛋白的目的

10. 體內葯物分析的樣品處理

體內樣品的預處理方法的選擇需要綜合考慮多種因素,包括體內樣品的種類、被測葯物的性質和濃度、以及所採用的測定方法等三方面。
如血漿或血清需除蛋白,使葯物從蛋白結合物中釋出;尿液樣品則常採用酸或酶水解使葯物從綴合物中釋出;唾液樣品主要採用離心去除黏蛋白沉澱。
被測定葯物的結構、性質、存在形式與濃度范圍等,均直接影響到樣品前處理方法的選擇與應用。例如,葯物的酸鹼性(pKa)與溶解性影響到葯物的萃取分離條件的選擇,葯物的極性、穩定性、官能團性質和光譜特性影響到其色譜測定條件的優化選擇。不同葯物在樣品中的濃度相差懸殊,濃度大的樣品對前處理要求稍低,濃度越低則樣品前處理要求越高。
體內樣品前處理的方法以及分離純化的程度,均取決於測定要求和所採用的測定方法。測定方法的耐受污染程度和抗干擾能力越強、專屬性越好、靈敏度越高,則對前處理的要求越低。通常,免疫測定法由於具有較高的靈敏度和抗干擾能力,體內樣品只需經離心分離即可直接用於測定。而高效液相色譜和色譜-質譜聯用等方法,為防止蛋白質等在色譜柱上沉積、內源性干擾、或基質效應影響,色譜分析前均需對體內樣品進行去除蛋白、溶劑萃取、甚至制備衍生物等前處理。
1.去除蛋白質法
在測定血樣及組織勻漿等樣品中的葯物時,首先應去除蛋白質。去除蛋白質既可使蛋白結合型的葯物釋放出來以便測定葯物的總濃度,又可避免進一步的溶劑萃取過程中乳化的形成,並可消除內源性干擾,同時保護儀器性能(如保護HPLC柱不被蛋白污染),延長使用壽命。去除蛋白質常用的方法包括蛋白沉澱法和蛋白分解法。
2.綴合物水解法
葯物在體內經二相代謝可以形成葡糖醛酸苷或硫酸酯綴合物,並經尿液或膽汁排泄。為了准確測定體內樣品中葯物的含量,首先需將綴合物水解釋放出綴合的葯物或其代謝物後,再進行進一步的處理測定。常用的綴合物水解方法包括酸水解和酶水解。
酸水解通常使用無機酸,如鹽酸或磷酸溶液等。酸的濃度、水解時間和溫度等條件,應根據具體葯物進行優化確定。酸水解的優點是簡便、快速,但是專屬性較差,並需注意避免葯物的進-步降解。對於遇酸及受熱不穩定的葯物,可採用酶水解法。
酶水解法常用葡糖醛酸苷酶或硫酸酯酶,或二者的混合物。酶解時應當注意控制反應的pH、酶試劑用量、孵育溫度、酶解時間,並在厭氧條件下進行。尿液樣本進行酶解時,需要首先隱蔽會抑制酶活力的陽離子。
雖然酶水解法存在水解時間長、酶試劑帶人的黏液蛋白可能導致乳化及色譜柱污染等缺點,但酶水解法具有較高的選擇性,很少使被測葯物或共存物發生降解,所以常被優先選用。
3.分離純化與濃集法
對於濃度較高的樣品,或檢測方法具有足夠靈敏度時,體內樣品在經去除蛋白質或綴合物水解等前處理步驟後即可直接用於測定。但當葯物濃度較低或分析方法的特異性或靈敏度不夠高時,體內樣品需進行分離、純化與濃集處理,或在去除蛋白質或綴合物水解的基礎上進一步進行處理。
萃取法是應用最多的分離、純化方法。萃取的目的是為了從大量共存的內源性物質中分離出所需要的微量組分一葯物及其代謝物,並通過溶劑的蒸發使樣品得到濃集,殘留物採用適宜的溶劑復溶後再進行分析測定。萃取法包括液-液萃取法和液-固萃取法。
4.化學衍生化法
治療葯物監測的體內樣品色譜分析時,可根據待測物的化學結構和檢測方法的要求,通過化學衍生化方法,特異性地引入功能基團後再進行分析。通常對葯物分子中含有活潑H的極性基團,如含-COOH、-0H、-NH2、-NH-和-SH等,進行化學衍生化。化學衍生化的目的包括:改變待測葯物的色譜行為;增強葯物的穩定性;改善(手性拆分)分離能力;提高檢測靈敏度等。
GC分析中常對待測物進行硅烷化(silylation)、醯化(acylation)、烷基化(alkylation)或酯化(esterification)等。硅烷化應用最廣泛。硅烷化試劑有:三甲基氯硅烷(TMCS)、雙-三甲基硅烷乙醯胺(BSA)、雙-三甲基硅烷三氟乙醯胺(BSTFA)、三甲基硅烷咪唑(TMTS)等。醯化試劑有:乙酸酐、丙酸酐、五氟苯甲酸酐等。烷基化及酯化試劑有:五氟碘乙烷、重氮甲烷、對溴苄基溴、三氟化硼-甲醇等。
化學衍生化HPLC分析包括柱前和柱後衍生化兩種方法。柱前衍生化分析中,衍生化胺、氨基酸和氨基醇類化合物的試劑有:丹醯氯、熒光胺、9-芴甲氧羰醯氯、鄰苯二醛等;衍生化羰基化合物的試劑有:2,4-二硝基苯肼、丹醯肼等;衍生化羧酸常用的試劑為2,4'-二溴苯乙酮;衍生化醇類化合物常用的試劑為3,5-二硝基苯甲醯氯、五氟苯甲醯氯等。
由於柱前衍生化法是在分離前使葯物與衍生化試劑反應。故與葯物具有相同官能團的干擾物質也同樣會生成衍生物,並有可能妨礙葯物的檢測。如果幹擾物質含量高時,甚至會影響待測成分的衍生化效率。因此,應盡可能將樣品進行分離純化後再衍生化。
柱後衍生化是葯物經色譜分離後在流出液中進行衍生化,以形成對檢測器具有高靈敏度響應的衍生物,從而提高檢測靈敏度。如氨基酸分析儀中的柱後茚三酮衍生化。
具有光學異構體的葯物,由於R(-)與S(+)構型的不同,使之具有不同的葯效和葯動學特性。因此,異構體的分離檢測十分重要。光學異構體的分離可採用不對稱試劑衍生化,使其生成非對映異構體衍生物,再進行色譜分離測定。常用的不對稱衍生化試劑有:(-)-1-(9-芴基)乙基氧甲醯氯、(+)-樟腦磺醯氯、2,3,4,6-四-O-苯甲醯-β-D-葡萄吡喃糖基異硫氰酸酯、(R)-(+)-1-(1-萘基)乙胺等。

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