A. 唾液澱粉酶活力的測定方法
實驗原理:
唾液澱粉酶能催化水解澱粉,生成分子較小的糊精和麥芽糖。本實驗利用碘的呈色反應來測定唾液澱粉酶水解澱粉作用的速度,從而測定唾液澱粉酶活力的大小。
實驗儀器和試劑:
1.儀器(1)多孔白瓷板(2) 50mL三角瓶(3)恆溫水浴鍋(4)燒杯(5) 500mL容量瓶(6) 100mL容量瓶(7)漏斗(8)吸管
2.試劑(1) 原碘液:稱取碘11g、碘化鉀22g,加少量蒸餾水完全溶解後,定容至500mL,於棕色瓶中保存。(2)稀碘液:吸取原碘液2mL,加碘化鉀20g,用蒸餾水溶解,定容至500mL,於棕色瓶保存。
(3) 標准「終點色」溶液
①准確稱取氯化鈷40.2439g、重鉻酸鉀0.4878g,加蒸餾水溶解並定容至500mL。
②准確稱取鉻黑T 40mg,加蒸餾水溶解並定容至100mL。取①液80mL與②液10mL混合,即為終點色。冰箱保存。
(4) 2%可溶性澱粉溶液:稱取烘乾可溶性澱粉2.00g,先以少許蒸餾水混勻,傾入80ml沸水中,繼續煮沸至透明,冷卻後用蒸餾水定容至100mL。(需新鮮配製)
(5)稀釋100倍的唾液用蒸餾水漱口,以清除食物殘渣,然後讓唾液流入量筒並稀釋100倍,混合備用。
(6) 0.02mol/L、 pH6.8磷酸氫= _鈉-檸檬酸緩沖溶液:稱取磷酸氫二鈉45.23g和檸檬酸8.07g,用蒸餾水溶解後定容至1000mL,配好後用酸度計或精密試紙校正pH。
操作步驟:
(1) 將「標准色」溶液滴於白瓷板的左.上角空穴內,作為比較終點色的標准。
(2)在50ml 的三角瓶中,加入2%可溶性澱粉溶液20mL,加緩沖液5mL在37°C水浴中平衡約10min,加入0. 5mL稀釋唾液,立即記錄時間,充分搖勻。定時用滴管取出反應液約0.25mL,滴於預先充滿此稀碘液(約0.75mL)的調色板空穴內,當空穴顏色由紫色變為棕紅色,與標准色相同時,即為反應終點,記錄時間T (min) 。
B. 澱粉酶活力的測定有幾種方法
第一種:相同條件下,分別將等物質的量的酶加入適宜條件的澱粉中,然後用碘液測定
第二種:相同條件下,分別將等物質的量的酶加入適宜條件的澱粉中,然後用斐林試劑進行還原糖的測定
C. 澱粉酶活力測定還有哪些方法
澱粉酶可以催化澱粉分解成葡萄糖,所以首先建立已知濃度的葡萄糖標准曲線(葡糖濃度為橫坐標、吸光度為縱坐標),然後令澱粉酶在一定條件下催化一定量澱粉反應,反應結束後檢測反應完成液的吸光度(一般需染色劑染色),對比標准曲線即可換算出產物葡糖的量,然後可以計算出澱粉酶的活力
D. 澱粉酶活力的測定
-澱粉酶活力測定 α-澱粉酶活力測定
Yoo改良法:兩份各5 ml 0.5%澱粉(用pH6.0 Na2HPO4-檸檬酸緩沖液配製) 分別標記為A、B,放入40℃恆溫水浴中保溫10分鍾,A中加0.5 ml酶液,B中加0.5 ml dH2O,反應5 min後,各加5 ml 0.1 mol/L H2SO4終止反應。分別從A、B取0.5 ml反應液加入到於5ml 0. 4mmol/L I2-KI溶液顯色,620nm處測光密度OD。活力單位定義:5 min內水解1mg澱粉的酶量。A(U/ ml) = ( R0-R)/ R0 ×50×D
A:酶活; R0:B對應的光吸收值;R:A對應的光吸收值; D:酶的稀釋倍數