❶ 分析化學中常用的分離和富集方法有哪些
通常分離和富集方法在分析化學中是共生的，如果要分開的話，就會有重復。
常用的經典分離方法有：沉澱分離、溶劑萃取分離、離子交換分離、層析分離、揮發分離、蒸餾分離等，新型分離方法有固相萃取分離、膜分離等。
常見的富集方法有：沉澱富集、液液萃取富集、交換富集、濃縮蒸發富集等，新型的富集方法有固相萃取富集、固相微萃取富集、分散萃取富集等。
❷ 糖鏈分析有哪些常規方法和步驟
蛋白質糖基化是人體中最重要的一種蛋白質翻譯後修飾方式,人體中超過50%的蛋白質是糖基化的。研究發現,寡糖在蛋白質結構構造、生物活性中起著至關重要的作用,人類許多疾病的發生和發展都與蛋白上N-糖鏈的結構和表達量的改變有關。因此,發展和建立分析N-糖鏈的方法,對生物和病理學研究具有積極現實意義。目前的研究方法主要是化學衍生法,其缺點是需要引入額外的化學試劑、操作步驟繁瑣以及有副反應發生。化學酶標記法由於沒有化學衍生法的特點,為研究糖蛋白中的N-糖鏈,提供了新的思路。首先,在本實驗室前人工作的基礎上,以Boc-Asn-GlcNAc為基礎結構單元物質合成了同位素標記糖基受體d0/d8-PDPZ-Boc-Asn-GlcNAc,優化了受體合成方法：以DMT-MM作為反應縮合劑,探索溫度、時間、反應物比例對受體產率的影響,合成受體反應產率達到95-98%。隨後,我們以標准糖肽SGP為反應底物,對比Endo-M酶、(?)Endo-M-N175Q酶的轉糖基活性和水解活性,結果表明Endo-M-N175Q酶的轉糖基活性幾乎是Endo-M酶的2倍,且Endo-M-N175Q酶幾乎喪失對轉糖基產物的水解能力。緊接著我們以標准糖蛋白牛胰核糖核酸酶B為研究對象,對比丙酮富集N-糖鏈和N-糖苷酶F釋放N-糖鏈兩種方法檢測糖鏈的效率,結果表明N-糖苷酶F釋放N-糖鏈簡便、高效。為了檢驗該方法的實用性,我們以卵清蛋白為實際樣品,成功、高效地檢測出一系列N-糖鏈(M5N2、M6N2、M7N2、M4N3、M5N3、M3N4、 M3N5、M4N4、M3N6),和文獻己報到的寡糖數量一致,正離子模式下這些寡糖都是以二價或三價的形式出現。相比於傳統的化學衍生化法,Endo-M-N175Q酶可以一步完成酶解和轉移兩個過程,避免了繁瑣的步驟以及副反應的發生。因此,我們提出的以含有Boc-Asn-G1cNAc結構單元的化學物質作為糖基受體、結合Endo-M-N-175Q酶的特性、以HPLC/ESI-MS為檢測手段,這一全新的分析方法,對分析糖蛋白中的N-糖鏈切實高效可行。…
❸ 請教關於糖基化程度的分析方法
糖基化程度的分析過程大致如下：首先是鑒定糖蛋白，即確定糖蛋白的存在；其次是富集糖蛋白，即糖蛋白的分離存化。
糖蛋白的檢測大致有以下幾種：放射性標記法、分子熒游標記法、電泳法、凝集素標記法、抗體標記法和化學酵素法。
獲得糖基化蛋白的方法主要是電泳法和層析法。電泳法即通過電泳的方法先得到糖蛋白條帶或蛋白點，再通過電洗脫或透析的方法得到糖蛋白。此方法較為費時，且在操作中易使蛋白變性。而層析法則具有快速、准確、解析度高、穩定性好等特點，是分析糖蛋白的理想手段。目前，利用抗體、凝集素進行親和層析已成為分離存化糖蛋白的主要方法。
糖基化氨基酸位點的鑒定中，Edman降解法冗長，需要高超的實驗技巧和較多的蛋白質，且無法處理N－端封閉的蛋白質。因此，隨著質譜技術的發展，此法已不在被廣泛使用。核磁共振技術也可用於糖基化氨基酸位點的鑒定。這種方法可在液態溶液中直接進行蛋白質結構測定。糖鏈結構的鑒定也採用質譜技術、毛細管電泳技術、氣相色譜技術及凝集素親和技術。