凝血纖維蛋白原的測定方法有哪些

Ⅰ 什麼是凝血時間；簡述凝血時間的測定方法及臨床意義。

凝血時間(clottingtime，CT)測定是將靜脈血放入玻璃試管中，觀察自采血開始至血液凝固所需的時間。本試驗是反映內源凝血系統各凝血因子總的凝血狀況的篩選試驗。以前曾使用的玻片法和毛細血管法的敏感性和特異性均差，故已停止使用，用活化部分凝血活酶時間(APTT)或金血凝固時間(CT試管法)替代。CT試管法參考值為4～12分鍾。前法較後法敏感。
CT延長可見於較顯著的凝血因子Ⅶ、Ⅸ減少的血友病甲、乙，凝血因子Ⅺ缺乏症；血管性血友病；嚴重的凝血因子Ⅴ、Ⅹ、纖維蛋白原及凝血酶原缺乏；原發性或繼發性纖溶活力增強；循環血液中抗凝物質增加；等等。
CT縮短可見於血栓前狀態，DIC高凝期等；血栓性疾病如心肌梗死、不穩定心絞痛、腎病綜合征及高血糖、高血脂等。

Ⅱ 纖維蛋白原的測定方法

現有的方法大體上分三大類：即（1）基於凝血酶的作用，形成纖維蛋白的方法；（2）物理化學測定法和（3）免疫學測定法。
第一類方法是一種功能測定法，所形成的纖維蛋白，又可再分為測重法，酚試劑比色法和紫外光度法、測氮法、濁度法和凝血酶凝固時間法等。這類方法的優點是測定的是有凝血功能的纖維蛋白原，又稱為可凝固蛋白（clottable protein），故特異性較好。方法可簡可繁，常規使用中，多採用較簡便的Von Clauss法。根據這種方法設計的商品葯盒（kit），已在一些國家廣泛使用。據1975年美國CAP的調查，1939個臨床化驗室中，用此法者佔1824家，即94%用了本法，其中Tan等採用了速率法。這類方法中由Ratnoff 和 Menzzie改良的酚試劑比色法，其曾被提出作為參考方法。近幾年來，不少文獻推薦用Jocobsson的改良法作為纖維蛋白原標準的定值方法。這類方法的缺點是，從理論上講，有兩方面可引起誤差。一是所析出並測定的是纖維蛋白而非纖維蛋白原。已知纖維蛋白原變成纖維蛋白時會從α和β肽鏈上分別切下兩個短肽，即A肽（FpA）和B肽(FpB)。這樣纖維蛋白實際上比纖維蛋白原的質量少了10%。二是已知纖維蛋白旦形成，就會吸附一些凝血因子或纖溶因子，這樣又會增加所測纖維蛋白原的量。此外，本法在操作中在獲取纖維蛋白和洗滌（擠壓）除去其它蛋白成份時，不僅比較麻煩而且也難以完全徹底，會造成其它蛋白污染。
第二類方法（物理化學測定法）在我國應用最廣。這類方法又可分為鹽析法（包括用亞硫酸鈉、硫酸銨或氯化鈉鹽析，用蛋白質顯色或比濁法測定），熱變性沉澱法和電泳法等幾種。這類方法都比較簡單、快速，尤其適於急診檢驗，但缺點是本法的特異性不強。所測的不是有凝固功能的纖維蛋白原，可能包括部分的降解產物和/或其它蛋白。而電泳法又太繁瑣，不適於常規工作。
第三類方法（免疫學方法），是將純纖維蛋白原作為抗原免疫動物，製成多克隆或單克隆抗體。然後用免疫膠乳、被動血凝或反向血凝、單向免疫擴散、火箭電泳以及ELISA等方法測定。優點是大部分方法簡便，但缺點是所測的不僅是可凝固的纖維蛋白原，可能包括了它的降解產物（因為它們有共同抗原），也可能包括了障礙性纖維蛋白原（dysfibrinogens即N端谷氨酸γ位未羧化的無功能的纖維蛋白原,又稱缺維生素K引起的蛋白質，PIVKA）。但免疫法也有一個好處，就是可用來測定PIVKA。如果一個患者總纖維蛋白原（用免疫學測定結果）不低，甚至增高，而功能性（即可凝固性）纖維蛋白原卻明顯減少，即可判斷為存在PIVKA。肝病、維生素K缺乏等均可導致PIVKA升高，有臨床診斷價值。

Ⅲ 血液凝固分析儀檢測原理有哪些

不同類型的血凝儀採用的原理也不同，目前主要採用的檢測方法有：凝固法、底物顯色法、免疫法、乳膠凝集法等。由於在血栓/止血檢驗中最常用的參數，均可用凝固法測量，故目前半自動血凝儀基本上以凝固法測量為主，在全自動血凝儀中，也一定包括凝固法測量方式。
凝固法(生物物理法)
凝固法是通過檢測血漿在凝血激活劑作用下的一系列物理量 (光、電、機械運動等)的變化，再由計算機分析所得數據並將之換算成最終結果，所以也可將其稱作生物物理法。
a.電流法
電流法利用纖維蛋白原無導電性而纖維蛋白具有導電性的特點，將待測樣品作為電路的一部分，根據凝血過程中電路電流的變化來判斷纖維蛋白的形成。但由於電流法的不可靠性及單一性，所以很快被更靈敏、更易擴展的光學法所淘汰。
b. 光學法(比濁法)
光學法血凝儀是根據凝固過程中濁度的變化來測定凝血功能。
根據待驗樣品在凝固過程中光的變化來確定檢測終點的。當向樣品中加入凝血激活劑後，隨著樣品中纖維蛋白凝塊的形成過程，樣品的光強度逐步增加，儀器把這種光學變化描繪成凝固曲線，當樣品完全凝固以後，光的強度不再變化。通常是把凝固的起始點作為 0%，凝固終點作為100%，把50%作為凝固時間。光探測器接收這一光的變化，將其轉化為電信號，經過放大再被傳送到監測器上進行處理，描出凝固曲線。
光學法凝血測試的優點在於靈敏度高、儀器結構簡單、易於自動化 ; 缺點是樣品的光學異常、測試杯的光潔度、加樣中的氣泡等都會成為測量的干擾因素。
c.磁珠法
早期的磁珠法是在檢測杯中放入一粒磁珠，與杯外一根鐵磁金屬桿緊貼呈直線狀，標本凝固後，由於纖維蛋白的形成，使磁珠移位而偏離金屬桿，儀器據此檢測出凝固終點，這類儀器也可稱為平面磁珠法。早期平面磁珠法能有效克服光學法中樣品本底干擾問題，但存在靈敏度低等缺點。
現代磁珠法出現在 20世紀80年代末，90年代初進入商品化。現代磁珠法被稱為雙磁路磁珠法。雙磁路磁珠法的測試原理如下: 測試杯的兩側有一組驅動線圈，它們產生恆定的交變電磁場，使測試杯內特製的去磁小鋼珠保持等幅振盪運動。凝血激活劑加入後，隨著纖維蛋白的產生增多，血漿的粘稠度增加，小鋼珠的運動振幅逐漸減弱，儀器根據另一組測量線圈感應到小鋼珠運動的變化，當運動幅度衰減到50%時確定凝固終點。
底物顯色法(生物化學法)
底物顯色法是通過測定產色底物的吸光度變化來推測所測物質的含量和活性的，該方法又可稱為生物化學法。檢測通道由一個鹵素燈為檢測光源，波長一般為 405nm。探測器與光源呈直線，與比色計相仿。
血凝儀使用產色底物檢測血栓與止血指標的原理是 : 通過人工合成與天然凝血因子有相似的一段氨基酸排列順序、並還有特定作用位點的小肽，並將可水解產色的化學基因與作用位點的氨基酸相連。測定時由於凝血因子具有蛋白水解酶的活性，它不僅能作用於天然蛋白質肽鏈，也能作用於人工合成的肽鏈底物，從而釋放出產色基因，使溶液呈色。產生顏色的深淺與凝血因子活性成比例關系，故可進行精確的定量。目前人工合成的多肽底物有幾十種，而最常用的是對硝基苯胺(PNA)，呈黃色，可用405mm波長進行測定。
免疫學方法
在免疫學方法中以純化的被檢物質為抗原，制備相應的抗體，然後用抗原抗體反應對被檢物進行定性和定量測定。常用方法有 :
a.免疫擴散法。將被檢物與相應抗體在一定介質中結合，測定其沉澱環大小，與標准進行比較，計算待測物濃度。此法操作簡單，不需特殊設備，但耗時過長，靈敏度不高，僅適於含量較高凝血因子檢測。
b.箭電泳。在一定電場中，凝膠支持物內的被檢物與其相應抗體結合形成的一個個「火箭峰」，火箭峰的高度與其含量成正比，通過測定峰高並與標准比較進行定量測定。此法操作復雜，臨床應用較少。
c.雙向免疫電泳。 通過水平與垂直兩個方向進行電泳可將某些分子結構異常的凝血因子進行分離。
d.酶聯免疫吸附試驗(ELISA法)。用酶標抗原或抗體和被檢物進行抗原結合反應，經過洗滌除去未結合的抗原或抗體及標本中的干擾物質，留下固定在管壁的抗原抗體復合物，然後加入酶的底物和色原性物質，反應產生有色物質，用酶標儀進行測定，顏色深淺與被檢物濃度呈比例關系。該法靈敏度高，特異強，目前已用於許多止血、血栓成分檢測。
e.免疫比濁法。 將被檢物與其相應抗體混合形成復合物，從而產生足夠大的沉澱顆粒，通過透射比濁或散射比濁進行測定。此法操作簡便，准確性好，便於自動化。

Ⅳ 凝血檢驗的知識

凝血檢驗的知識

你知道應該如何檢驗凝血嗎?你知道凝血檢驗的技巧嗎?下面是我為大家帶來的關於凝血檢驗的知識，歡迎閱讀。

(一)PT和/或APTT延長

1. 了解患者有否家族出血史、個人出血史、肝病史、病人服葯情況(醫療史)。病人如有瘀點、紫癜、黏膜出血多提示血管或血小板異常;若為關節出血、胃腸道出血常提示單個因子缺乏。若病史陽性，必須請檢驗科做混合試驗等項目以便進一步查明原因。

2. 若家族出血史、個人出血史、肝病史、病人服葯情況(醫療史)等均陰性，第一步就是重新採集標本。因為標本凝固，或放置時間太長，或從用肝素的靜脈采血均可影響凝血試驗結果。若重新採集標本不影響結果，應進一步做混合試驗。

(二)凝血酶時間(TT)延長 TT延長，除以上兩點外，還應注意以下幾點：

1. 注意纖維蛋白原結果：因纖維蛋白原水平高或低，或有異常纖維蛋白原均可直接導致凝血酶時間延長，所以需做纖維蛋白原定量試驗。

2. FDP/fdp測定：血液中出現纖維蛋白原/纖維蛋白降解產物(FDP/fdp)。因FDP/fdp具有凝血酶抑制物樣作用，使TT延長，所以需做FDP/fdp半定量試驗。

3. 排除肝素：若標本為肝素污染，或病人體內存在肝素，凝血酶試驗結果異常。用硫酸魚精蛋白中和肝素後，再做TT將正常。

問：什麼是混合試驗

混合試驗是將病人血漿和正常人血漿做50:50混合進一步試驗。混合血漿試驗有助於鑒別PT與APTT結果異常的原因。

1. 若50:50混合試驗糾正了異常結果，說明病人多數為因子缺乏，應進一步檢測是哪個因子缺乏。但也不能排除出現低濃度抑制物。

2. 若50:50混合試驗不能糾正或僅部分糾正APTT結果，可能出現抑制物。若抑制物為抗體，通常是輸血、葯物、或某些疾病所致，有時無明顯原因。在大多數病例中，這些抗體只抗單個因子。

問：衛生部[2000]412號文件規定，停止使用出血時間測定項目的Duke法，必要時可使用出血時間測定器法檢測出血時間(BT)。請對後者進行介紹。

出血時間測定器法檢測BT是用一次性的出血時間測定器在前臂皮膚造成一“標准”創口(成人切口通常長5mm，深1mm)，記錄出血自然停止所需的時間即為BT。該法為有創性檢查，不作為手術前的常規，僅在懷疑有毛細血管和血小板方面的疾病，需用此項目進行鑒別診斷時才考慮進行。

BT的臨床意義：

1. 出血時間延長：血小板數量異常如血小板減少症;血小板質量缺陷如先天性和獲得性血小板病和血小板無力症等;某些凝血因子缺乏，如血管性血友病(vWD)、低(無)纖維蛋白原和彌散性血管內凝血(DIC)等;血管疾病，如遺傳性出血性毛細血管擴張症、單純性紫癜、過敏性紫癜等。阿斯匹林、非類固醇抗炎葯及其它抗血小板葯物、抗菌素如青莓素和頭孢類葯物等也可使BT延長。

2. 出血時間縮短：見於某些嚴重的高凝狀態和血栓形成。

Ⅳ 醫學檢驗，APTT、TT、PT、分別是用什麼檢測的

APTT是活化部分凝血活酶時間；主要是檢測身體血液中內源性凝血因子是否缺乏。

TT是血漿凝血酶時間；指受檢血漿中加入「標准化」的凝血酶後，血漿纖維蛋白原轉化成纖維蛋白所需的時間。

PT是血漿凝血酶原時間；通過檢測PT可以反映外源性凝血系統功能。

(5)凝血纖維蛋白原的測定方法有哪些擴展閱讀

APTT時間延長主要見於血友病、DIC、肝病、大量輸入庫存血等；APTT縮短主要見於DIC、血栓前狀態及血栓性疾病；APTT可作為肝素治療的監護指標。

TT延長見於低或無纖維蛋白原血症和異常纖維蛋白原血症、DIC、血中有肝素和類肝素物質存在。

PT延長主要見於先天性凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ減少及纖維蛋白原缺乏、獲得性凝血因子缺乏；PT縮短主要見於先天性凝血因子V增多、DIC早期、血栓性疾病、口服避孕葯等；監測PT可作為臨床口服抗凝葯物的監護。

這幾項屬於凝血功能測定，可以在術前了解患者有無凝血功能的異常，有效防止在術中及術後出現出血不止等意外情況，從而獲得最佳的手術效果。

Ⅵ 內源凝血系統最常見的篩選試驗有哪些

1、PT測定是外源性凝血系統較理想和常用的篩選試驗。也可作為外源性途徑及共同途徑凝血因子的定量試驗，同時，也可用於口服抗凝劑治療的監控。
PT延長：見於先天性凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ缺乏症，低（無）纖維蛋白原血症，DIC，原發性纖溶症，VitK缺乏，肝病，口服抗凝劑、肝素和FDP等。
PT縮短：見於先天性凝血因子Ⅴ增多，口服避孕葯，高凝狀態，血栓疾病等。2、APTT用於體外人血漿中活化部分凝血活酶時間（APTT）測定。APTT測定是內源性凝血系統較敏感和常用的篩選試驗，也可作為內源性途徑凝血因子的定量試驗，可檢測除Ⅶ因子外的其他血漿凝血因子，特別是用於Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ和前激肽釋放酶的測定。同時，APTT測定可用於肝素治療監控。
APTT延長：見於凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ減低，纖維蛋白原缺乏症，纖溶活力增強，抗凝物質存在（如血內肝素含量增加及口服抗凝劑），是監控肝素治療的重要指標。
APTT縮短：見於高凝狀態，血栓性疾病，如心肌梗塞、不穩定性心絞痛、腦血管病變、肺梗死、深靜脈血栓形成、妊娠高血壓綜合症和腎病綜合症等。3、FIB用於體外人血漿中纖維蛋白原（FIB）含量的測定。
FIB含量增高：見於糖尿病及其酸中毒，動脈粥樣硬化，急性傳染病，急性腎炎尿毒症，骨髓瘤，休克，外科術後及輕度肝炎等。
FIB減低：見於DIC，原發性纖溶症，重症肝炎，肝硬化等。4、TT用於體外人血漿中凝血酶時間（TT）測定。該實驗系檢查受試者血漿纖維蛋白原轉變為纖維蛋白能力的過篩試驗。
TT延長：見於肝素增多或類肝素物質存在，SLE，腎病，低（無）纖維蛋白原血症，異常纖維蛋白原血病（纖維蛋白原機能不良血症），FDP增多，異常球蛋白血症或免疫球蛋白增多等疾病。

Ⅶ 凝血酶時間測定和凝血酶原時間測定的區別

凝血酶原時間（PT）測定和膽鹼酯酶（ChE）活力檢測各有什麼臨床意義？

凝血酶原是由肝臟合成的一種蛋白質。凝血酶原試驗是一種了解血液凝固情況的試驗，它可以反映肝臟的凝血功能。凝血酶原時間（PT）和凝血因子Ⅰ、Ⅴ、Ⅶ和Ⅹ有關，而這些因子也均在肝臟合成。凝血酶原時間的正常值為11～15秒（奎氏法）。當肝臟出現病變、肝功能不良、上述凝血因子因合成障礙而含量降低時，即可引起凝血酶原時間延長而發生凝血障礙。如重型肝炎時，凝血酶原時間明顯延長，患者容易出血，預後較差；慢性活動性肝炎與肝硬變時，凝血酶原時間可輕度延長；肝外阻塞而無明顯肝細胞損害時，凝血酶原時間可正常。長期肝外阻塞、膽汁淤積、影響維生素K的吸收時，也可導致凝血酶原時間延長；若給患者注射維生素K時，則凝血酶原時間可恢復正常。

此外, 由於凝血酶原半衰期短，在急性重型肝炎發病後的短時間內即有凝血酶原時間的改變，故測定凝血酶原時間，對重型肝炎的診斷，病情和預後的判定，具有重要的臨床意義。

血清膽鹼酯酶，又稱「假性」或「非特異性」膽鹼酯酶，是由肝臟合成的一種特異性較差的，既可作用於乙醯膽鹼，又能作用於其他膽鹼酯類的酶。其正常值為0.80～1.00或40單位以上。

由於血清膽鹼酯酶的半衰期短，所以它是肝內損害時的一種極為敏感的、反映肝臟酶合成障礙的試驗。其活性降低的程度往往與肝病的嚴重程度相一致。如重型肝炎患者膽鹼酯酶活性值一般都較正常降低，且降低程度與病情輕重密切相關；約80％的病人，其血清膽鹼酯酶活性可降至正常值的60％，重危病人甚至下降至10％以下，此類患者多很快死亡。因此，血清膽鹼酯酶活性的測定，有助於對重型肝炎的診斷及對病情和預後的判定。此外，重度慢性肝炎和晚期肝硬變患者，血清膽鹼酯酶亦有不同程度的降低。

血栓與止血實驗室檢查的臨床重要性與日俱增，檢驗內容不斷擴大，工作量也日益增多；不斷出現的方法更新和試劑商品化、操作自動化，改變了以往靠手工操作、自配試劑、工作效率低的局面。與此同時，方法標准化和質量控制也顯得格外重要。然而，由於血栓與止血試驗的特殊性 ......

有關（凝血酶原時間（PT）、活化的部分凝血活酶時間（APTT）和纖維蛋白原(FIB)測定等三項實驗）

摘要：對ICSH、ICTH或美國國家臨床生物化學委員會（NCCLS）等國際以文件形式公布的有關凝血酶原時間（PT）、活化的部分凝血活酶時間（APTT）和纖維蛋白原測定等三項實驗的標准化及其重要性作了簡單敘述。

關鍵詞： 凝血酶原時間 活化的部分凝血活酶時間 纖維蛋白原 標准化

由於血栓與止血實驗的特殊性，因此迄今僅有凝血酶原時間（prothrombin time,PT）、活化的部分凝血酶時間（activated partial thromboplastin time,APTT）和纖維蛋白原（fibrinogen,Fg）等三項實驗有了標准化的試劑（如PT）、標准品（如Fg）、質控品和統一的報告形式等；其他，如血小板功能、抗凝因子和纖溶成分等檢測尚缺乏成熟的標准化方案。本文僅就經國際血液學標准化委員會（ICSH）國際血栓與止血委員會（ICTH）或美國國家臨床生物化學標准委員會（NCCLS）等國際組織以文件形式公布的有關PT、APTT和Fg三項實驗的標准化問題作一簡介。

一、標准化和質量控制的重要性
所謂血栓與止血檢測方法的標准化和質量控制，是指採用統計學原理，運用規范的物理、化學、生物學的方法，對血栓與止血實驗的技術、操作、儀器、試劑和標本等項的質量水平，進行合理的管理、檢測和評價，以標准化和質量控制來堵絕誤差，提高實驗的精密度、准確性和可靠性。標准化和質量控制的重要性在於：

1、為臨床診治提供可靠的依據：實驗結果的可靠性是臨床診治疾病的重要依據和條件。實驗結果若為假陽性就會造成誤診、誤治；若為假陰性就會造成漏診、漏治；實驗結果偏高或偏低都會影響患者的診斷、鑒別診斷以及影響醫師對病情和療效的判斷。

2、提高血栓與止血基礎研究的效率和價值：血栓與止血基礎研究的形式就是進行各種實驗。實驗可靠性好，就能揭示血栓與止血的客觀規律，甚至可帶來重大理論突破及（或）社會、經濟效益；若實驗可靠性差或有錯誤，則會造成假象或錯誤理論。

3、有助於人群健康調查和建立血液學參數的正常范圍：為了解一定人群的健康水平，建立具有廣泛意義的血液學參考值的范圍須進行較大規模人群的健康調查，健康調查必須要有實驗結果的可靠性作保障，不然會導致不準確或錯誤的結果，故質量控制對群體醫學也有重要意義。

總之，血栓與止血實驗室的質量控制，從一定程度上反映一個國家，一個地區，一個單位血栓與止血醫療水平和研究水平的高低。因此，應倍加重視。

二、 凝血酶原時間（PT）的標准化
自1935年Quick創建凝血酶原時間（prothrombin time,PT）測定方法以來，迄今仍然 是檢查外源凝血系統諸因子及相關抑制物的重要篩選試驗，PT也是目前口服抗凝劑治療的主要手段。但是，PT測定受多種因素影響，必須對它進行標准化和質量控制，以提高PT檢測的精密度、准確度和可靠性。

（一）凝血酶原時間（PT）的標准化問題

1、組織凝血活酶標准化：應用的國際參考品（international reference preparation IRP），有下列幾種：
（1）單一組織凝血活酶國際參考品：是一種組織提取物的生理鹽水懸液制劑。WHO在英國使用的統一標準的"英國比較凝血活酶"（British comparative thromboplastin,BCT）為基礎，制備WHO的原級凝血活酶參考品（primary reference preparation），如人腦組織凝血活酶，編號67/40。同時又以BCT67/40為基礎標化了次級參考品（secondary reference preparation）。如牛腦組織凝血活酶，編號為68/434；兔腦為70/178。後來WHO還公布了一些次級組織凝血活酶參考品，如人腦或胎盤制劑，如BCT/253；兔或兔、猴組織混合制劑，如RBT/79等。

（2）復合組織凝血活酶國際參考品：它是組織提取物的生理鹽水懸液中加入適量的纖維蛋白原、因子V 和氯化鈣組成的制劑，如牛組織凝血活酶OBT/79等。

目前世界各國都廣泛應用WHO的這些參考品來校正本國或本地區制備或生產的組織凝血活酶參考物。這樣使世界范圍內有了多種組織凝血活酶參考品。

2、組織凝血活酶工作制劑（working preparation,WP）的國際敏感度指數（international sensitivity index,ISI）
由於不同組織凝血活酶對凝血因子的敏感性不同。為了使不同敏感性的組織凝血活酶在檢測PT中能得到同樣的結果，必須要制定一個共同的敏感性指標。這就需要通過自製的試劑與國際參考品（IRP）進行比較，然後得出一個校正值。具體的方法如下：

（1）用國際參考品（IRP）標定國家、地區或本實驗室的參考制劑（reference preparation,RP）。
（2）用實驗室參考制劑（RP）標定工作制劑（WP）。

1）標本：2份正常人血漿和6份口服抗凝劑達6周的患者血漿，連收10天，共60份標本。

2）測定：按一定順序進行測定，每份標本重復測定2次。將PT測定的結果（秒）點在雙 對數坐標紙上，橫坐標代表WP的PT測定結果，縱坐標代表RP的PT測定結果，畫出最佳的各點擬合直線，得出定標曲線，通過WP/RP比值，或回歸方程求出斜率b。

3）計算WP的ISI值：ISI值愈接近於1.0，表明組織凝血活酶試劑愈敏感，因此，生產和出售組織凝血活酶試劑的廠商，必須在產品上標有ISI。

3、PT測定結果的報告方式：理論上，無論何種組織凝血活酶，只要標有ISI，就可與國際參考製品進行對比校正，並可用同一種計量單位報告。1985年ICSH和ICTH推薦以PT監測口服抗凝劑的報告方式是國際正常化比率（international normalizde ratio,INR）。

INR的計算公式如下： 在用INR後，各種敏感性不同的組織凝血活酶均可得到相同的INR值。

4、儀器特有有ISI：上述PT根據報告方式適用於手工法（試管傾斜法）測定PT。但是手工法與儀器法以及儀器法與儀器法測定PT的INR之間，仍有差異。研究表明，在ACL、Cobas Fibro和Coaga-Pet三台自動化儀器上，使用同一種ISI為1.12的Thromborel S試劑，測定PT的均值分別為10.7秒、12.1秒和11.1秒。但若以同一ISI值計算INR，得出的數值也存在著不同程度的差異。為此，專家們提出建議：同一組織凝血活酶試劑用於不同儀器時，可用所謂的"儀器特有的ISI"（instrument specific ISIs）或稱區域性ISI（Local ISI）來計算INR。每台儀器所使用的凝血活酶試劑都應該有特定的ISI值，重新標定ISI值的做法是購買標有INR的凍干血漿，然後在自己的儀器上再標定所使用凝血活酶試劑的ISI值，這樣才可使病人的INR具有可比性。

（二）凝血酶原時間（PT）的推薦方法

[原理]
將組織凝血活酶（主要含組織因子和脂質）和鈣離子，加到枸櫞酸抗凝血漿中，在37℃保溫，測定血漿凝固時間，即為PT。PT主要用於篩選檢測外源凝血系統的因子Ⅶ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅹ和相關因子的抑制物的試驗。

[標本來集和處理]
1、標本採集：用硅化或塑料注射器抽取空腹靜脈血，按9:1比例加入含0.109mol/L的枸櫞酸鈉抗凝劑的硅化或塑料試管中，輕輕混合均勻。
2、標本處理：以2000～2500g，離心15分鍾，分離乏血小板血漿，並在24小時內完成試驗。
3、正常對照血漿：選擇正常健康男性和女性各lO名以上，年齡在18～45歲。但不能是妊娠、月經期、哺乳期和口服避孕葯的婦女，採取的血漿冰凍乾燥保存或-80℃保存。

[試劑]
1、抗凝劑：109mmol/L枸櫞酸鈉液（相當於含二分子結晶水的枸櫞酸鈉32g/L）。
2、凝血活酶試劑：市售商品，應標有ISI、批號及有效期。凍干者應按說明書加指定的緩沖稀釋劑復溶。
3、氯化鈣（CaCl2）溶液：為25mmol/L。（目前有些商品試劑已將凝血活酶液與氯化鈣液混合好，可不必另配CaCl2液）。
4、質控物：正常及異常對照血漿
5、配製試劑用水必須符合1級純水的標准。

[儀器]
1、手工法：秒錶，保持37℃±1℃的恆溫水浴箱或電熱塊。水深能浸試管3cm以上，表面無劃痕的10×mm拭管。經標準的0.1mL移液管。經校正的秒錶。
2、儀器法：各種自動或半自動血凝儀，嚴格按說明書操作。

[操作步驟]
1、手工法
（1）測定溫度36.5～38.5℃，上述各試劑及被測血漿，均應預溫至此一溫度，但凝血活酶試劑預溫不可超過30分鍾，血漿預溫一般不宜超過10分鍾。

（2）所用試管及加樣器等接觸血漿的器具均為塑料或硅化玻璃管。

（3）吸取枸櫞酸抗凝血漿0.1mL，加入一小試管中：加入凝血活酶試劑0.1mL混勻後置37℃水浴中。再加入25mmol/L CaCl2液0.1mL，（也可先將凝血活酶試劑與CaCl2溶液等量混合，加入0.2mL）。立即混勻並開動秒錶：試管仍浸於水浴中，至約10秒鍾時，自水浴中取出，在紗布上迅速擦去試管外水滴，在明亮處不斷傾斜試管，在流動狀態下觀察有無纖維蛋白形成。一旦見到纖維蛋白（同時將出現液體流動減慢），立即停表，記錄時間。每次測定二管，按平均數報告。本試驗的最後混合液其pH應為7.2～7.3，大部分商品凝血活酶試劑均用含緩沖液的溶液配製。

（4）每批均同時做正常和異常對照，方法應與測定標本完全相同。

[報告方式]
1、以PT的秒（S）數報告（最接近的0.5秒）
2、以患者血漿（S）/正常對照PT（S）的比率（PRT）報告。
3、在口服華法令類抗凝葯物治療監控時，應報告國際正常化比率（INR）。大部分自動化儀器可根據所測的PTR和凝血活酶試劑的ISI，自動算出INR。手工法可根據下列公式，用一計算器直接計算：

Poller設計了一個簡便的列線圖，在取得PTR和ISI值後，即可從圖上直接查找出INR值，十分便利，國內已有介紹。
ICSH規定，不再用稀釋曲線或百分比（活動度）報告。

[參考值]
因儀器/試劑不同，會得出不同結果，故很難統一規定參考值。各實驗室應根據自己的儀器、試劑等條件，自行測定一批健康人，建立參考值。此後至少每年或當條件有變化時，根據新的條件，重新建立。參考值PT測定的一切條件均應與患者血漿PT測定相同（包括采血、容器、抗凝劑等）。健康供血者應選至少20個18～55歲的男性和非妊娠、月經期女性，不可服葯，在平靜休息狀態采血、以減少個體差異（有條件時，可測一批老年人和小兒，分開統計）。同時應分開幾天采血和測定，以減少天間差異。測定結果經統計學處理，計算標准差：以兩個標准差（2SD）或95%可信限作為參考范圍。對於三個標准差是正常還是異常，需結合具體情況進行評估。從統計學上講，其中有些人是正常的。用以上標准，病人（PT異常）則很少會遺漏。

三、活化部分凝血活酶時間(APTT)的標准化
（一）活化部分凝血活酶時間(APTT)的標准化
APTT是檢測內源凝血系統諸凝血因子缺陷和相關抑制物的篩選試驗，也是當前用於凝血因子、肝素抗凝治療以及狼瘡抗凝物質檢測的主要手段。
與PT測定一樣，不同的部分凝血活酶、不同的活化劑和不同的激活時間對各種凝血因子缺陷、對肝素和對狼瘡抗凝物質的敏感性相差很大。例如，檢測APTT的試劑中，所用活化劑（白陶土、硅藻土、鞣花酸）不同，他們對檢測肝素、狼瘡抗凝物質和因子Ⅷ、Ⅸ的敏感性不同。

迄今，ICSH和ICTH尚未有APTT檢測方法標准化或試劑標准化的可行方案問世，僅NCCLS於1992年，提出一個編號為H29-T的暫行方案。

（二）活化的部分凝血活酶時間（APTT）的推薦方法

[原理]
將一種磷脂和激活劑加到血漿中，經過孵育後，加入適當濃度的鈣離子。其纖維蛋白凝塊形成的時間（以秒計），即為APTT。本法主要用於過篩測定內源途徑凝血因子的缺陷，如因子Ⅶ、Ⅺ、Ⅷ、Ⅸ、激肽釋放酶原（PK）、高分子量激肽原（HMWK）以及纖維蛋白原等。同時也用於上述因子的抑制物測定、肝素治療的監測以及狼瘡抗凝因子的檢查。

[儀器]
本實驗所用儀器、設備（包括采血、貯血容器、加樣裝置和標本的處理等）以及對它們的要求完全與PT相同。PT所用自動化儀器同樣適於本實驗。

[試劑]
1、部分凝血活酶試劑：由商品供應。一般已與檄活劑按比例配在一起（或分開配製）常用的激活劑由硅藻土（商品名Celite）、白陶土、二氧化硅微粒、鞣化酸（ellagic acid）或其它可用的激活劑，由廠方配套供應。
APTT試劑/儀器結合，應能使因子Ⅷ、Ⅸ或Ⅺ活性低於0.3μ/mL（或＜30%）的血漿，出現異常延長的結果。
2、氯化鈣溶液（25mmol/L）以及其它試劑與PT所用者相同。

[操作步驟]
1、樣品的採取、貯存、輸送與PT測定相同。注意，應用清潔的塑料或硅化玻璃采血器采血及貯血。
2、標本（去血小板的血漿）的制備與PT相同。注意、應用去血小板血漿測定。
3、水浴箱或電熱板的溫度為37℃±1℃，要經常檢查是否正確。
4、接觸活化時間：加激活劑活化因子Ⅻ的時間要保持一致；各儀器和試劑生產廠家的規定可能不一樣，應嚴格按說明書要求進行。手工操作時，應用秒錶或類似的定時裝置計時。
5、操作：預溫（不超過30分鍾）APTT試劑一份與預溫（不超過10分鍾）的侍測血漿一份混合，立即開動秒錶計時；至規定的接觸活化時間終點時，加人預溫37℃的CaCl2液一份，混勻，同時開動秒錶。至出現血漿凝固時，停表，記錄血漿凝固時間（以秒計）。手工測定時應同時測定兩管，按平均數報告。一些精密度已有很大改進的自動或半自動凝血儀，如果有適當的質控標准也可只測定一次。應同時測定正常和異常對照血漿。

[參考值]參照PT

[特殊解釋]
1、對肝素的敏感性：APTT常用於肝素治療的監測，通常以患者APTT與正常血漿APTT的比率在1.5～2.5作為治療控制范圍：但不同的試劑/儀器系統對肝素的敏感性不同。其試劑/儀器系統對肝素的敏感性可進行測定。體外的敏感性（in vitro sensitlvity）是指將臨床在使用的同類型釣肝素按其治療濃度，加到正常血漿中，測定APTT。體外敏感性與體內敏感性（in vivo sensitivity）不等同，但可作參考。
2、浪瘡抗凝因子：狼瘡抗凝因子是一種抗磷脂的自身抗體，由於它抗凝血的重要成分磷脂，故能幹擾凝血。血中如存在狼瘡抗凝因子，APTT將延長。但APTT試劑對狼瘡抗疑因子的敏感性有很大差別，試劑製造廠家應提供足夠的說明，有關的國家機構也可提供對狼瘡抗凝因子的資抖。但要知道，病人個體之間也有很大差異，沒有一種試劑能測出所有狼瘡抗凝因子。

四、纖維蛋白原測定（Fg）的標准化
（一）纖維蛋白原測定（Fg）的標准化問題
纖維蛋白原（死）由肝合成，存在於血漿和體液中，其結構和功能基本已搞清，但迄今仍無理想的臨床檢測方法；文獻報道的測定方法多至10餘種，有的精密度、准確信較好，但過於復雜、煩瑣；有的雖然簡便、快速，但精密度、准確性較差。
1992年，英國國家生物標准及控制研究所（NIBSC）、研究完成了一個纖維蛋白原標准品，編號為89/644，向WHO的生物標准專家委員會（ECBS）推薦，[15]並被ECBC批准為國際參考品（IRP）。從此，各國均引進這一標准品來標化本國或廠家生產的次極標准品（我國衛生部臨床檢驗中心亦已在引進）。使纖維蛋白原測定的標准化工作，走出了關鍵的一步。因此根據調查，各家標准品纖維蛋白原含量差別很大。

（二）纖維蛋白原（Fg）測定的推薦方法
各家用IRP來標化自己的標准時，推薦採用Jacobsson的改良法，現將該法介紹如下。

[試劑]
1、緩沖液：Na2O·2H2O 0.882g；KH2PO4 2.77gl升，此為貯存緩沖液；將貯存緩沖液l份，加生理鹽水2份即為應用緩沖液，pH為6.35。
2、生理鹽水：0.15mol/L
3、人或牛凝血酶：500IU/mL，生理鹽水溶液。
4、凝塊溶解劑：尿素400g溶於少量蒸溜水中，200mL 1.Omol/L NaOH，再加水至l升。

[操作步驟]
將纖維蛋白原凍干（標准）品（源於89/644）加lmL蒸餾水復溶，加到含有2mL應用緩沖液的有機玻璃淺盤或其他容器中，再加入凝血酶液50μL，迅速混勻，在室溫中靜制置2小時。將容器倒扣於吸水的布上（其下可墊吸水紙），再用適當物質（加濾紙）將凝塊吸干。將凝塊取下，置於5OmL生理鹽水中洗滌2次，每次洗滌後均應將凝塊吸干（可用玻璃擠壓凝塊），盡量除去含於凝塊中的液體，以免液體中的其它血漿蛋白殘留。必要時可在清潔棉布上擠壓。
小心將凝塊加人含凝塊溶解劑7.5mL的容器中，搖勻，直至凝塊完全溶解。倒人光徑為1cm的比色杯中，以凝塊溶解劑為空白，在280nm和315nm波長讀取吸光度（A）。

（三）適用的纖維蛋白原（Fg）測定（Clauss法）

[原理]
將凝血酶加到血漿中，使纖維蛋白原變成纖維蛋白，血漿便出現凝固。在有足量的凝血酶時，與不同含量的纖維蛋白原作用，其出現血漿凝固的時間與纖維蛋白原含量呈負相關。

[試劑]
1、牛凝血酶l00NIHU/mL
2、纖維蛋白原標准品（IRP次級標准）
3、緩沖液（下列兩種任選一種）：
（1）巴比妥緩沖液（PH7.5）；巴比妥2.5g，巴比妥鈉2.75g，璐氯化鈉7.3g溶於750mL去離子水中，校正至PH7.5，加水至1L。
（2）咪唑（Imidazole，或Glyoxaline）緩沖液：咪唑3.4g（0.05mol/L），氯化鈉5.85g，加於約500mL水中；加O.1mol/L鹽酸186mL，調PH至7.3-7.4，最後加蒸餾水至1升。

[操作步驟]
1、手工法
（1）用上述緩沖液先將標准品稀釋成0.8，1.6，2.4，和4.0g/L纖維蛋白原濃度，各濃度再用緩沖液作1:10稀釋。
（2）患者血漿及質控物用緩沖液作1:10稀釋。
（3）將含100NIHU/mL，牛凝血酶，混勻後室溫保存。如用儀器法測定，則用100NIHU/mL，牛凝血酶，不必稀釋。
（4）在一試管中，加稀釋血漿0.2mL，置37℃水浴中4分鍾。
（5）加入預溫37℃的lOONIHU/mL凝血酶液O.2mL，搖勻並立即開動秒錶，不斷觀察凝固時間。至出現凝固時停表。
（6）每份標本測定兩次，求平均數。同時測定各標准管和對照（質控）管，方法相同，准確記錄時間。
（7）計算：用雙對數紙作圖，以凝固時間為縱坐際、纖維蛋白原濃度為橫坐標，將各相應濃度的標准管對凝固時間，在圖上標出相應的點並連成直線，製成標准曲線。然後根據患者和質控血漿所測得的凝固時間。在圖上查到纖維蛋白原含量。
如血漿纖維蛋白原含量大於4g/L，應稀釋血漿後重測，結果乘以稀釋倍數。如血漿纖維蛋白原含量低於O.8g/L，需將原血漿改為1:2或1:5稀釋，在標准曲線上查得結果後除以5或除以2。
2.儀器法：本法可用自動或半自動凝血儀按凝血酶時間（TT）測定法測定。可自動列印出結果。一般儀器法比手工法精密度高。