Ⅰ 底物法和速率法的區別
速率法a通常用在酶活性測定時,反應曲線上肯定有成線性的區域,而兩點速率法又稱固定時間法或一級動力學法,利用的是一級反應,在儀器上的區別主要是前者會有一個檢測線性區線性度,利用最小二乘法擬合直線,計算速率;而兩點速率法沒有線性度檢測,直接用吸光度差除以時間計算。固定時間法又被稱為一級動力學法(first order kinetic)、初速率法(initial rate)、二點動力學法(two point rate)等。在一定的反應時間內,反應速度與底物(被測物)濃度的一次方成正比,由於底物(被測物)在不斷的消耗,因此整個反應速度在不斷的減小,表現為吸光度的增加(或降低)速度越來越小,這類反應達到平衡的時間很長,理論上可以在任意時間段進行監測,但由於血清成份復雜,反應剛啟動時反應較復雜,雜反應較多,經過一段延遲時間才能進入穩定反應期,必需在特定時間段內進行監測。
Ⅱ 谷丙轉氨酶活性測定的實驗報告怎麼寫
谷丙轉氨酶活性測定的實驗報告要從以下幾個方面入手:實驗方法原理、實驗材料、儀器、耗材、實驗步驟。具體模板如下:
實驗方法原理
血清谷丙轉氨酶(SGPT)能催化丙氨酸與酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸,丙酮酸在酸性條件下與2,4-二硝基苯肼可縮合成丙酮酸二硝基苯腙,該腙在鹼性條件下呈現出橙紅色,呈色深淺符合比爾定律,在520 nm處有最大吸收。
SGPT 在肝臟中含量最高,由於肝細胞損害,該酶逸出血液,可使 SGPT 含量明顯增高。因此測定血清谷丙轉氨酶的活性可作為肝中毒肝病的重要指標。
實驗材料
丙酮酸、丙酮、α-酮戊二酸、dl-丙氨酸、2,4——二硝基苯肼、氫氧化鈉
儀器、耗材
恆溫水浴鍋、分光光度計、吸量管、試管、試管架
實驗步驟
1、標准曲線的繪制:取乾燥潔凈試管6支,編號。每管加0.5ml 2,4—二硝基苯肼,再保溫20 min,分別向各管加入0.4 mol/L氫氧化鈉溶液5 ml,室溫下靜置10 min後,用蒸餾水調零點。
於520nm處測光密度,以各管光密度減去空白管光密度為縱坐標,丙酮酸微克數為橫坐標作標准曲線。
2、SGPT活力測定:取潔凈乾燥試管4支,即測定管、對照管各2支。各管反應完畢,混勻,室溫下靜置10 min後,再以蒸餾水調零點測定光密度。由標准曲線上查得丙酮酸微克數,根據下式計算SGPT 的活力:SGPT 活力(單位)=(測定管微克數-對照管微克數)/2.5×0.1。
(2)血清alt活性測定都有哪些方法擴展閱讀:
谷丙轉氨酶活性測定的注意事項
1、在呈色反應中,2,4-二硝基苯肼可與有酮基的化合物作用形成苯腙,底物中α-酮戊二酸可與之發生反應,生成α-酮戊二酸苯腙。故製作標准曲線時,需要加入一定量的底物以抵消α-酮戊二酸的影響。
2、在測定 SGPT 活力時,應事先將底物、血清在37 ℃水浴中恆溫,然後在血清管中加入底物,准時計時。
3、標准曲線上數值在20~100 U是准確可靠的,超過200 U 時,需將樣品稀釋。
4、丙氨酸應使用 DL-型,不使用 D-型。如使用 L-型,用量減半。
5、溶血標本不宜使用,因血細胞內轉氨酶活力較高,會影響測定結果。
Ⅲ ALT是什麼意思
1、「ALT」是「Alanine aminotransferase」的簡稱,即谷丙轉氨酶。
谷丙轉氨酶(ALT)主要存在於各種細胞中,尤以肝細胞為最,整個肝臟內轉氨酶含量約為血中含量的100倍。正常時,只要少量釋放人血中,血清中其酶的活性即可明顯升高。
在各種病毒性肝炎的急性期、葯物中毒性肝細胞壞死時,ALT大量釋放入血中,因此它是診斷病毒性肝炎、中毒性肝炎的重要指標。肝細胞內谷丙轉氨酶的濃度比血清高1000~3000倍。只要有1%的肝細胞壞死,便可使血中酶活性增高1倍,因此轉氨酶(尤其是ALT)是急性肝細胞損害的敏感標志。
(3)血清alt活性測定都有哪些方法擴展閱讀:
檢測ALT時的注意事項:
1.測定血清谷丙轉氨酶時,應事先將底物、血清放在37℃水浴中保溫,然後血清中加入底物,准確計時。
2.血清標本宜迅速與血塊分離,及時測定,如不能立即測定,應置於冰箱內,但不能超過3天。溶血標本不宜測定,因細胞內酶的活性較高,會影響測定結果。
3.操作時應准確掌握作用時問、溫度、pH值、試劑濃度以及試劑加入量,以免影響測定結果。
電腦「Alt」鍵的使用技巧:
在不同的應用程序中,「Alt」鍵也同樣有著不同的使用技巧。
比如在IE中:按「Alt+←」鍵可以實現「後退」功能,而按「Alt+→」則相當於「前進」按鈕,「Alt+D」可選擇地址欄中的文字等。
在Word中選擇文本時,如果先按下「Alt」鍵再拖動滑鼠,則為列選擇方式(否則為行選擇方式),在這種方式下可以定製一個列塊;在定製工具欄時,也可以先按下「Alt」鍵,再用滑鼠直接拖動各個按鈕;在表格中按下「Alt+Num5」(數字鍵盤上的5,需先關閉Num Lock指示燈)可以快速選定整個表格,先按下「Alt」再按「Home」。
Ⅳ 丙氨酸底物法原理
丙氨酸氨基轉移酶活性的測定方法有丙氨酸底物法、丙氨酸底物-丙酮酸氧化酶法和2,4-二硝基苯肼法等[1]。
丙氨酸氨基轉移酶活性的測定方法目前主要為丙氨酸底物法。本法採用的原理是在ALT的催化下,L-丙氨酸的氨基轉移至α-酮戊二酸,生成丙酮酸和L-谷氨酸。丙酮酸與NADH在LDH的催化下反應生成乳酸和NAD+。NADH在特定波長(如:340nm處)有特異吸收峰,其氧化的速率與血清中ALT的活性成正比,在此波長處測定NADH吸光度下降的速率,即可計算出ALT活性。
丙氨酸底物-丙酮酸氧化酶法採用的原理為[2]:
2,4-二硝基苯肼法採用的原理為:
丙氨酸氨基轉移酶催化丙氨酸與α-酮戊二酸之間的氨基轉移反應,二硝基苯肼與α-酮酸反應,生成相應的二硝基苯腙,在鹼性條件下,二硝基苯腙的吸收光譜有差異,通過酶標儀檢測在500-520nm處差異最大,以等摩爾濃度計算出丙酮酸的生成量,進而計算酶的活性。
Ⅳ 醫學里ALT是什麼
ALT(谷丙轉氨酶)一般指谷丙轉氨酶。
谷丙轉氨酶(ALT)主要存在於各種細胞中,尤以肝細胞為最,整個肝臟內轉氨酶含量約為血中含量的100倍。正常時,只要少量釋放入血中,血清中其酶的活性即可明顯升高。
在各種病毒性肝炎的急性期、葯物中毒性肝細胞壞死時,ALT大量釋放入血中,因此它是診斷病毒性肝炎、中毒性肝炎的重要指標。
肝細胞內谷丙轉氨酶的濃度比血清高1000~3000倍。只要有1%的肝細胞壞死,便可使血中酶活性增高1倍,因此轉氨酶(尤其是ALT)是急性肝細胞損害的敏感標志。
(5)血清alt活性測定都有哪些方法擴展閱讀:
注意事項:
1、測定血清谷丙轉氨酶時,應事先將底物、血清放在37℃水浴中保溫,然後血清中加入底物,准確計時。
2、血清標本宜迅速與血塊分離,及時測定,如不能立即測定,應置於冰箱內,但不能超過3天。溶血標本不宜測定,因細胞內酶的活性較高,會影響測定結果。
3、操作時應准確掌握作用時問、溫度、pH值、試劑濃度以及試劑加入量,以免影響測定結果。