製造小白鼠疼痛模型有哪些方法

『壹』 怎樣構建小鼠模型

6月10日，在鍾南山院士指導下，廣州醫科大學附屬第一醫院/呼吸疾病國家重點實驗室趙金存教授團隊與另外四家中美科研團隊合作，在國際頂級學術期刊《細胞》雜志在線發表了題為「可廣泛應用於新冠肺炎發病機制研究、疫苗研發和治療方法評價的動物模型建立」的研究成果，應用表達新冠病毒受體人ACE2的腺病毒轉導小鼠，快速建立首個新冠肺炎非轉基因小鼠模型，該項目負責人趙金存教授在接受總台央廣記者獨家采訪時表示，此動物模型可應用於新冠治療葯物效果評價、疫苗效果測試及新冠致病機制等多方面研究。
趙金存教授在實驗室
參與該項研究的另外四家中美科研機構為：廣州海關技術中心國家生物安全檢測重點實驗室(P3實驗室)、美國愛荷華大學、廣州再生醫學與健康廣東省實驗室、中國科學院廣州生物醫葯與健康研究院。
據了解，新型冠狀病毒SARS-CoV-2入侵受體為 human angiotensin-converting enzyme 2(hACE2)，而小鼠同源受體mouse ACE2由於氨基酸關鍵位點差異，不能介導病毒入侵。疫情早期，雖然我國毒株已分離，但由於國際和國內hACE2轉基因小鼠保有量有限，繁育耗時長，臨床症狀不典型，造成我國COVID-19肺炎診療方案、葯物、疫苗和致病機制體內驗證嚴重滯後。
在這項研究中，研究團隊利用腺病毒載體，在小鼠肺臟轉導表達hACE2，成功解決上述科學難題，建立國際首個非轉基因新冠肺炎小鼠動物模型。小鼠在SARS-CoV-2感染後，肺臟中可檢測到高滴度新冠病毒，每克組織中病毒滴度可達10^7 PFU，並出現體重下降和類似新冠肺炎病人的臨床病理表現。
動物模型模式圖
隨後，通過對比野生型小鼠與I型干擾素受體缺陷小鼠和干擾素通路關鍵基因STAT1敲除小鼠在新型冠狀病毒感染後的差異，發現I型干擾素在新冠病毒感染中起到保護作用。此外，在此模型中，新冠病毒感染可誘導機體產生強烈的病毒特異性T細胞應答及體液免疫應答。更為重要的是該研究團隊利用此小鼠模型評價了新冠感染康復者血漿和瑞德西韋對新冠病毒感染的治療作用。結果顯示，給予血漿治療和葯物組的小鼠肺臟病毒滴度均明顯降低，且病理損傷減輕。
過繼轉移新冠康復者血漿和瑞德西韋治療組，小鼠肺臟病毒滴度下降、肺臟病理損傷減輕。
本模型相比傳統受體轉基因小鼠模型，構建周期短(2-3周)，不需要特殊繁育，可用於多種基因修飾小鼠動物模型構建;且技術方法簡單，易於重復，適宜大規模推廣，有利於我國抗病毒葯物、抗體、疫苗的應急驗證及致病機制研究，並已給我國多家單位廣泛共享，有效緩解了我國COVID-19肺炎動物模型缺乏的難題。
值得一提的是，來自華盛頓大學醫學院等單位的研究人員同樣在Cell雜志背靠背發表了類似的研究成果。
（據央廣網）

『貳』 求助：如何建立小鼠免疫抑制模型

• 免疫抑制動物模型的制備（三個制模方法選其一即可，造模後進入第二步實驗檢測造模是否成功。）
  動物的選取：成年C57BL雄性小鼠，或成年BALB/c雄性小鼠。無論選取哪一類小鼠，都要控制鼠齡、性別和體重，以減少個體差異。
  實驗動物的分組：分為實驗組、對照組、陽性對照組、陰性對照組、假手術組五組。
  1.由免疫抑制劑誘發的免疫功能低下模型
  造模原理：免疫抑制劑是對機體的免疫反應具有抑製作用的葯物，能抑制與免疫反應有關細胞（T細胞和B細胞等巨噬細胞）的增殖和功能，能降低抗體免疫反應。
  操作方法：
  可以選用下列方法之一誘發免疫功能低下模型：
  1.環磷醯胺 80-100mg/kg 體重，皮下注射，5d。
  2.氫化可的松 50-100mg/kg 體重，每天皮下注射，6~8d。
  3.抗淋巴細胞血清 每隻鼠腹腔注射抗淋巴細胞血清0.2ml，5~6d
  造模方法評價：以上三種免疫抑制劑方法均可造出相應的模型，但是他們各有利弊，實驗時應該根據具體實驗情況選擇相應的試劑。制備抗淋巴細胞血清法比較復雜，而且抗體成分可能因為分離不徹底而發生交叉反應，但是此法特異性高，不會對動物造成大的損傷，環磷醯胺和氫化可的松會一定程度上造成動物機體的損傷，在研究中，在同等條件下，分別以常規劑量的氫化考的松（HY）和環磷醯胺（CY）復制免疫抑制動物模型，結果發現：HY模型的各項免疫指標均處於高度抑制狀態；CY模型在IL-2的產生水平上處於高度抑制狀態，在巨噬細胞吞噬率和血清溶菌酶含量方面呈明顯抑製作用，但程度上低於HY模型，然而在巨噬細胞吞噬指數和IL-1產生水平上未呈現明顯抑製作用；結果提示：用HY可復制出穩定、典型較為理想的免抑制動物模型。
  2.由輻射誘發的免疫功能低下模型
  操作方法：使用X射線6~8Gy1次照射，4d後可檢測。
  造模方法評價：此法制備的動物模型見效快，但是動物存活時間短，對長期實驗不利，短期實驗使用。
  3.由強電刺激引起的免疫功能低下模型
  條件允許的話，此法應用成年雄性的NIH小鼠。NIH小鼠對應激性疾病的抵抗力較強。
  操作方法：將多用電針儀（電壓U=0.2V，電流強度I=4~5μA，連續密波）正電極連接小鼠陰莖根部腹部皮膚，負電極連接陰莖背側部皮膚，每天刺激兩次，每次刺激10Min,連續刺激10d。
  造模方法評價：此法原理是造成小鼠進入應激狀態，使其糖皮質激素分泌增加，導致胸腺萎縮免疫功能低下，故造模過程中應該注意預防應激性疾病如胃潰瘍、應激性心臟病以及應激性高血壓等的發生。

『叄』 怎麼進行小鼠模型的建立和鑒定

小鼠模型建立方式有很多種，傳統的有葯物、飲食誘導或手術方式構建，另外也有通過基因編輯的方式來構建，包括基因敲除小鼠、基因敲入小鼠、點突變小鼠、人源化修飾小鼠等等。鑒定方式可以通過qPCR驗證、測序或蛋白鑒定等。大大滿足了目前的研究需求。

『肆』 醋酸致痛小白鼠原理

化學刺激物如醋酸注入小鼠腹腔內會引起深的、大面積而持久的疼痛刺激致使小白鼠產生「扭體」反應。

1、冰醋酸因為是乙酸的結晶物質，會刺激皮膚表面導致皮膚表面出現腐蝕出現感染引起疼痛。

2、因為冰醋酸若是高濃度會在身體內造成高滲環境，很容易引起身體脫水，從而刺激神經引起疼痛。

3、因為冰醋酸還具有破壞皮膚表面的完整性，可直接傷害到皮下的脂肪層，而皮膚脂肪層直接具有很豐富的末梢神經系統，可刺激導致劇烈疼痛。

另外冰醋酸也可以刺激身體臟器，比如心臟的臟層和壁層腹膜可引起較大面積長時間的炎性疼痛。
冰醋酸就是生活中大家所熟知的乙酸，冰醋酸在臨床上多數用來治療皮膚的真菌感染，甚至還可以治療指甲的真菌感染。因其是乙酸的結晶屬於酸性，所以具有很強的腐蝕性，非常容易刺激神經末梢治痛劇烈。

醋酸生物反應：

乙酸中的乙醯基，是生物化學中所有生命的基礎。當它與輔酶A結合後，就成為了碳水化合物和脂肪新陳代謝的中心。然而，乙酸在細胞中的濃度是被嚴格控制在一個很低的范圍內，避免使得細胞質的pH發生破壞性的改變。

與其它長鏈羧酸不同，乙酸並不存在於甘油三酸酯中。但是，人造含乙酸的甘油三酸酯，又叫甘油醋酸酯（甘油三乙酸酯），則是一種重要的食品添加劑，也被用來製造化妝品和局部性葯物。

乙酸由一些特定的細菌生產或分泌。值得注意的是醋菌類梭菌屬的丙酮丁醇梭桿菌，這個細菌廣泛存在於全世界的食物、水和土壤之中。在水果或其他食物腐敗時，醋酸也會自然生成。乙酸也是包括人類在內的所有靈長類生物的陰道潤滑液的一個組成部分，被當作一個溫和的抗菌劑。

『伍』 四氯化碳製造小鼠肝炎模型 急

直接腹腔注射就可以啦，可以參考一下：利用5% CCl4按10ml/kg腹腔注射構建小白鼠急性肝損傷模型，然後再用葯進行治療。如果只需染毒，不需要治療的話，可以在染毒12-18h之後采血，取血清檢測酶活性。

『陸』 小鼠驚厥模型的製作 關於葯理學實驗的

一、 驚厥
物理、化學或精神性的刺激所引發的全身骨骼肌不自主的強烈收縮,常見於小兒高熱、破傷風、癲癇大發作、子癇和中樞興奮葯中毒等.
二、 驚厥模型的制備
1.物理方法
⑴ 電休克法：以強電流通過角膜電極或耳電極,對動物腦部進行短時間刺激,引起驚厥發作；
⑵ 聽覺刺激
⑶ 光刺激
2.化學方法：應用大劑量的化學葯物使動物中樞神經系統過度興奮,常用的葯物有硝酸士的寧,戊四唑,印防己毒素和氨基脲等.
三、 常用的抗驚厥葯
1.苯二氮卓類：如地西泮
為鎮靜催眠葯,隨劑量增大,相繼出現抗焦慮、鎮靜催眠和抗驚厥作用；
2.巴比妥類：如苯巴比妥、異戊巴比妥、硫賁妥
屬鎮靜催眠葯,隨劑量增大,相繼出現鎮靜、催眠、抗驚厥和麻醉作用；
3.硫酸鎂
i.v.具有抗驚厥作用,Mg2+可拮抗Ca2+的作用,抑制神經遞質傳遞和骨骼肌收縮,從而使肌肉鬆弛,臨床常用於妊娠子癇.
本實驗所用抗驚厥葯為戊巴比妥鈉,其用量大於鎮靜催眠量,故給完葯後小鼠可能睡著了.
四、 具體實驗
[實驗目的]
1.學習製做動物驚厥模型及抗驚厥葯的實驗方法；
2.觀察戊巴比妥鈉對士的寧驚厥的保護作用；
3.學習X2檢驗.
[實驗原理]
硝酸士的寧是脊髓抑制性神經元甘氨酸受體的拮抗劑,對脊髓有選擇性興奮作用.皮下注射可致小鼠全身強直性驚厥.戊巴比妥鈉促進中樞GABA對GABAA受體的結合,產生超極化抑制性突觸效應,從而具有抗驚厥作用.
[實驗材料]
1.動物：昆明種小白鼠(18～22g,♀♂兼用)；
2.器材：天平、鼠籠,注射器
3.葯品：① 0.5％戊巴比妥鈉溶液
② 0.008％硝酸士的寧溶液
③ 生理鹽水
[實驗方法]
1.每組取小鼠8隻,稱重,標記,按體重隨機分為兩組.實驗組腹腔注射戊巴比妥鈉0.1ml/10g),對照組腹腔注射等容量生理鹽水;
2.20分鍾後依次給每隻鼠皮下注射0.008％硝酸士的寧0.2ml/10g.觀察30分鍾,記錄動物死亡數.
[實驗結果]
全班結果匯總,進行X2檢驗.
[注意事項]
1.劑量要准確,時間掌握好；
2.給葯後應保持室內安靜,避免刺激實驗動物.
質反應資料：將觀察單位按屬性或類型分組計數所得的資料,如死亡和生存,治癒和未愈,有效和無效等.
本實驗結果觀察指標為生存、死亡的數目,所以屬質反應資料,統計學分析用X2檢驗.
四格表資料X2檢驗步驟：
1.建立假設；
2.計算X2值（公式見講義P18）;
3.查X2表；
4.判斷結果.

『柒』 小鼠模型都有哪些

小鼠模型有很多種類，包括常規的近交系小鼠C57BL/6J、BALB/c，還有肥胖/糖尿病模型（ob、db）、心血管模型（APOE-/-、LDLR-/-）、免疫檢查點人源化小鼠（hPDL1、hTIGIT）、免疫缺陷小鼠（NCG）等等。集萃葯康是一家專業從事小鼠模型研發、生產與銷售的企業，基於自主構建的基因編輯平台、人源化平台、功能葯效平台，可提供各類疾病小鼠模型，同時也可根據您的需求為您精心定製合適的小鼠模型，可以在網路找他們的官網咨詢了解！！

『捌』 我想建立小鼠皮膚感染模型，如何從分離出的菌株中選出致病力強的菌株

方法很多，我講一個常規的方式：將致病菌株稀釋，分離成單個菌株，並培養成菌落，之後檢測菌株的致病能力，把致病能力強的保留，並進一步稀釋致病力強的菌株成單個菌株，再培養成菌落檢測致病能力，最後就能篩選致病能力強的菌株。

『玖』 小鼠模型如何構建

小鼠模型可通過TALEN、ZFN、ES同源重組、CRISPR/Cas9等基因編輯技術構建。集萃葯康基因編輯平台熟練掌握各類基因編輯手段，可定製不同策略的小鼠模型，大大滿足用戶實驗需求。

『拾』 給小鼠腹腔注射冰醋酸使其產生疼痛的機制

苯巴比妥鈉具有良好的抗癲癇和抗驚厥作用，故其可以用於驚厥的治療。而尼可剎米可以提高機體神經中樞的興奮性，從而造成機體驚厥，故用尼可剎米復制驚厥模型後用苯巴比妥鈉進行治療，從而觀察苯巴比妥鈉的抗驚厥作用。 方法 分別前後腹腔注射苯巴比妥鈉和尼可剎米後，觀察驚厥發生的情況從而觀察苯巴比妥鈉的抗驚厥作用。 結果與分析 用苯巴比妥鈉的小鼠驚厥率為0，而沒有用的小鼠驚厥率高達100%，死亡率達50%，比較可以發現苯巴比妥鈉具有良好的抗驚厥作用。

驚厥是由於中樞神經系統過度興奮而引起的全身骨骼肌強烈的不隨意收縮，出現強直性或者陣攣性抽搐。苯巴比妥鈉屬於苯巴比妥類葯物，具有良好的中樞抑製作用，故具有抗癲癇和抗驚厥作用。本實驗觀察其抗驚厥作用。尼可剎米是一種呼吸興奮劑，中毒劑量時可以造成機體驚厥甚至是死亡。由於尼可剎米的作用比較強而且本實驗使用的是中毒劑量，故而應先腹腔注射一定量的苯巴比妥鈉後，經過一定時間後再腹腔注射一定量的尼可剎米，觀察有無驚厥的出現從而確定苯巴比妥鈉的抗驚厥作用。

1 實驗材料

1）實驗動物：小白鼠

2）實驗葯品：苯巴比妥鈉，尼可剎米，生理鹽水

3）實驗用具：注射器，電子稱，小白鼠籠

2 實驗步驟

1）每組取四隻小鼠，稱重，並分別編號為1,2,3,4號。

2）1,2兩只小鼠腹腔注射苯巴比妥鈉，0.1ml/10g，3,4兩只小鼠腹腔注射生理鹽水作為對照組，0.1ml/10g。

3）15min後，分別為四隻小鼠注射尼可剎米，0.1ml/10g，並記錄號時間。

4）觀察並記錄四隻小鼠是否出現驚厥或者死亡。

3 實驗結果

經過如上實驗可以得到如下結果：表1

表1

對照組/實驗組驚對照組驚實驗組死對照組死亡組別 實驗組/只 只 厥/只 厥/只 亡/只 /只

1 2 2 0 2 0 1 2 2 2 0 2 0 1 3 2 2 0 2 0 1 4 2 2 0 2 0 1 總數 8 8 0 8 0 4 註：實驗組為注射苯巴比妥鈉的小鼠，對照組為注射生理鹽水的小鼠

通過計算百分率可得表2

實驗驚厥百分率

0% 表2 對照驚厥百分率 實驗死亡率 100% 0% 對照死亡率 50% 4 實驗分析

由以上實驗結果可以看到，注射苯巴比妥鈉的小鼠沒有出現驚厥，也沒有死亡。而注射生理鹽水的小鼠驚厥出現百分率高達100%，

且死亡率達到50%，通過比較兩組實驗結果，就可以明顯的發現，苯巴比妥鈉具有良好的抗驚厥作用，它是一種中樞神經系統抑制葯，主要通過增強GABA 作用以及減弱谷氨酸作用而實現抗驚厥作用。

二 鎮痛實驗

摘要 目的 嗎啡屬於阿片類鎮痛葯，具有強大的鎮痛作用，通過熱刺激（熱板法）或者化學刺激的方式引起小鼠疼痛，在經過嗎啡鎮痛後觀測其痛閾的改變從而觀察嗎啡的鎮痛作用，從而了解其鎮痛效果和機制。 方法 熱板法和化學刺激法 結果與分析 嗎啡對熱刺激或者化學刺激都具有良好的鎮痛作用。

嗎啡是阿片類鎮痛葯的代表葯，具有良好的鎮痛作用，其主要通過激動阿片受體從而產生鎮痛作用，是臨床常用葯，也屬於管制葯。當給與一定的溫度刺激時，小鼠會產生痛覺，小鼠由於腳部的疼痛而發生疼痛反應，從而出現舔後足的現象。出現此現象越快說明疼痛的潛伏期短，也就是痛閾越低。因此，可以通過比較小鼠出現舔足現象的時間來比較痛閾的大小。同理，給與小鼠腹腔化學刺激時，小鼠會出現扭體的現象。

1 實驗材料

1) 實驗動物：小白鼠

2) 實驗葯品：嗎啡，生理鹽水，醋酸

3) 實驗器材：注射器，Woolfe 熱板，電子稱，秒錶，鼠籠。 2 實驗步驟

2-1 熱板法

1）打開熱板預熱。取小鼠，篩選舔足時間在5s-30s之間 的小鼠，稱重，分作兩組，每組兩只，作標記。

2）選定實驗組和對照組，測定每隻小鼠的舔足時間，記錄。

3）實驗組腹腔注射嗎啡0.1ml/10g，對照組注射生理鹽水0.1ml/10g。

4）給葯後分別於15min,30min,45min測小鼠的舔足出現時間，並記錄好。

2-2 化學刺激法

1）每組取四隻小鼠，隨機分作實驗組和對照組，稱重，做標記。

2）實驗組腹腔注射嗎啡0.1ml/10g，對照組腹腔注射生理鹽水0.1ml/10g。

3）20分鍾後，兩組小鼠分別腹腔注射醋酸0.1ml/10g，觀察小鼠是否出現扭體現象並記錄。

3 實驗結果

根據以上實驗，熱板法可得如下表3的結果：

表3

組別

小鼠編

號 第二組 30給葯前 15分鍾 30分鍾 45分鍾 給葯前 15分鍾 分45分鍾

鍾 第一組

1 2 3 4 1 2 3 4 實驗組均值 對照組均值

11 6 14 15

60 42 15

60 57 14

54 41 15 20

13.59 6.5 10.95 6.15

15 22 第三組

給葯前 15分鍾 30分鍾 45分鍾 給葯前

25 16 18 19

56 60 45 30

60 60 30 20

60 60 28 18

23.41 14.18 57.76 40.58

43.

34.41 24 21.17 15.8 23 11.01

13.

13.44 57 9.18

10.

6.96 62 12.5 第四組

30

15分鍾 分45分鍾

鍾 31.

25.61 22 20.04 31.17 60 56.76

27.

16.96 78 17.98 60 60 60

13.02 44.70 50.54 41.20 13.85 20.90 18.37 17.11

說明：1 表格中單位為秒。 2 由於第四組小鼠未經過篩選，故而捨去。

由此作出時-效曲線為圖1所示：

鎮痛與抗驚厥實驗報告

而化學刺激法所得結果如下表4所示

組別 1 2 3 4 總數 實驗組扭體百

分率 對照組扭體百

分率

實驗組/只

2 2 2 2 8 0 100%

表4

實驗組扭體/

對照組/只

只

2 0 2 0 2 0 2 0 8 0

對照組扭體/

只 2 2 2 2 8

4 分析

1）從表3及圖1 可以看出，用葯前實驗組和對照組的痛閾幾乎一樣，而用葯後，實驗組的痛閾明顯高於對照組，這說明嗎啡能提高機體的痛閾值，從而具有良好的鎮痛作用。

2）圖1表明，在經過一段時間的代謝後，機體內的嗎啡含量降低，從而痛閾值也跟著下降。

3）同樣，表4中顯示，注射嗎啡後，扭體實驗為全陰性而對照組為全陽性，同樣說明了嗎啡具有良好的鎮痛作用。