高中生物凝膠電泳方法有哪些

① 生物學研究中常用的凝膠電泳有哪些

（1）瓊脂糖和聚丙烯醯胺凝膠電泳
瓊脂糖是一種線性多糖聚合物，是從紅色海藻產物瓊脂中提取而來的。當瓊脂糖溶液加熱到沸點後冷卻凝固便會形成良好的電泳介質，其密度是由瓊脂糖的濃度決定的。經過化學修飾的低熔點(LMP)的瓊脂糖，在結構上比較脆弱，因此在較低的溫度下便會熔化，可用於DNA片段的制備電泳。
聚丙烯醯胺凝膠主要有兩種方式:一是用於分離和純化雙鏈DNA片段的非變性聚丙烯醯胺凝膠。在未變凝膠中分離DNA的缺點是DNA的遷移率受鹼基組成和序列的影響。由於無法得知未知DNA的遷移是否反常，故不能用未變性的聚丙烯醯胺凝膠電泳確定雙鏈DNA的大小。二是用於分離及純化單鏈DNA片段的變性聚丙烯醯胺凝膠。這類聚丙烯醯胺凝膠是在核苷酸鹼基配對抑制劑(尿素或甲醯胺)的存在下聚合而成，變性DNA的移動速度同其鹼基組成及序列幾乎完全無關，故可用於分離及純化單鏈DNA片段和DNA測序等。
（2）脈沖電場凝膠電泳
普通的凝膠電泳技術顯然是無法分離如此超大分子量的DNA分子的。1984年，D.C.Schwartz和C.R.Cantor發明的脈沖電場凝膠電泳技術，可以成功地用來分離整條染色體這樣的超大分子量的DNA分子。在常規的瓊脂糖凝膠電泳中，超過一定大小范圍的所有的雙鏈DNA分子，都是按相同的速率遷移的。這是因為它們在單向恆定電場的作用下，僅以「一端向前」的方式游動穿過整個膠板。而在脈沖電場中，DNA分子的遷移方向是隨著所用的電場方向的周期性變化而不斷改變的。
在標準的PFGE中，頭一個脈沖的電場方向與核酸移動方向成45°夾角，而下一個脈沖的電場方向與核酸移動方向在另一側亦成45°夾角。由於加壓在瓊脂糖凝膠上的電場方向、電流大小及作用時間都在交替地變換著，這就使得DNA分子能夠隨時地調整其游動方向，以適應凝膠孔隙的無規則變化。與分子量較小的DNA分子相比，分子量較大的DNA分子需要更多的次數來更換其構型和方位，以使其可以按新的方向游動。因此，在瓊脂糖介質中的遷移速率也就顯得更慢一些，從而達到分離超大分子量DNA分子的目的。應用脈沖電場凝膠電泳技術，可成功地分離到分子量高達107bp的DNA大分子。

② 高中生物凝膠電泳和凝膠色譜用途上有什麼區別

區別：
凝膠電泳以葡聚糖凝膠電泳為例，要鋪一塊凝膠板，然後在板一端點樣，通電，由於樣
品帶電子，向正極方向移動，分子量大的跑的慢，小的跑得快，然後可以染色觀察。它的作用一般是分離核酸。

凝膠色譜一般是指色譜柱，從上段加樣之後大分子物質難以進入凝膠空隙，從邊上流，而小分子就容易進入凝膠空隙，因此大分子流出的速度更快，這種方法主要用途是給高聚物分級（但是實驗用那一次是用來分離分子量不同的蛋白質的）。

③ 什麼叫電泳技術分離或分析蛋白質常用的電泳方法有哪些

電泳是指混懸於溶液中的樣品（有機的或無機的,有生命的或無生命的）電荷顆粒,在電場影響下向著與自身帶相反電荷的電極移動的現象.
分離方法：(一)醋酸纖維素薄膜電泳
(二)凝膠電泳
(三)等電聚焦電泳技術
(四)其他電泳技術
希望對您有所幫助

④ 幾種蛋白質凝膠電泳方法的區別和用途

1、醋酸纖維素薄膜電泳 ：醋酸纖維素薄膜電泳是以醋酸纖維素薄膜為支持物,它是纖維素的醋酸酯,由纖維素的羥基經乙醯化而製成.醋酸纖維素膜薄是一種細密而又薄的微孔膜.醋酸纖維素膜對樣品的吸附性較小,因此,少量的樣品,甚至大分子物質都能得以較高的解析度.又由於醋酸纖維素薄膜親水性較小,故電滲作用也較小,並且它所容納的緩沖液也較少,因此電流的大部分由樣品傳導,可以加速樣品分離,大大節約電泳時間.醋酸纖維素具有操作簡單、快速、價廉、定量容易等優點,尤其較紙電泳分辨力強、區帶清晰、靈敏度高和便於保存、照相等,目前醋酸纖維素薄膜電泳己取代紙電泳而被廣泛應用於科學實驗、生化產品分析和臨床化驗,如分析檢測血漿蛋白、脂蛋白、糖蛋白、胎兒甲種球蛋白、體液、脊髓液、脫氫酶、多肽、核酸及其他生物大分子,為心血管疾病、肝硬化及某些癌症鑒別診斷提供了可靠的依據,因而已成為醫學和臨床檢驗的常規技術.
2、 瓊脂糖凝膠電泳 ：瓊脂糖凝膠電泳是一種以瓊脂糖凝膠為支持物的凝膠電泳,其分析原理與其它支持物電泳的最主要區別是：它兼有「分子篩」和「電泳」的雙重作用.瓊脂糖凝膠具有網路結構,直接參與帶電顆粒的分離過程,在電泳中,物質分子通過空隙時會受到阻力,大分子物質在泳動時受到的阻力比小分子大,因此在凝膠電泳中,帶電顆粒的分離不僅依賴於凈電荷的性質和數量,而且還取決於分子大小,這就大大地提高了分辨能力.瓊脂糖系天然的瓊脂加工製得,天然瓊脂是一種多聚糖,主要由瓊脂糖（約佔80%）及瓊脂膠組成.瓊脂糖是由半乳糖及其衍生物構成的中性物質,不帶電荷.而瓊脂膠是一種含硫酸根和羧基的強酸性多糖,由於這些基團帶有電荷,在電場作用下能產生較強的電滲現象.所以常用於血清蛋白、血紅蛋白、脂蛋白、糖蛋白、乳酸脫氫酶、鹼性磷酸酶等同工酶的分離和鑒定,為臨床某些疾病的鑒別診斷提供了可靠的依據.與免疫化學反應相結合發展成為免疫電泳技術,用於分離和檢測抗原.可對目前常用的瓊脂糖進行某些修飾,如引入化學基團羥乙基,則可使瓊脂糖在65℃左右便能熔化,被稱為低熔點瓊脂糖.該溫度低於DNA的熔點,而且凝膠強度又無明顯改變.以此為支持物進行電泳,稱為低熔點瓊脂糖凝膠電泳,主要應用於DNA研究.如DNA鑒定,DNA限制性內切酶圖譜製作等,為DNA分子及其片段分子量測定和DNA分子構象的分析提供了重要手段.
3、聚丙烯醯胺凝膠電泳 ：聚丙烯醯胺凝膠是由單體丙烯醯胺和交聯劑又稱為共聚體的N,N』-甲叉雙丙烯醯胺（簡稱Bis）在加速劑和催化劑的作用下聚合交聯成三維網狀結構的凝膠,以此凝膠為支持物的電泳稱為聚丙烯醯胺凝膠電泳(簡稱PAGE).應用范圍廣,可用於蛋白質、酶、核酸等生物大分子的分離、定性、定量及少量的制備,還可測定分子量、等電點等.
4、等電聚焦電泳 ：等電聚焦電泳是利用具有pH梯度的電泳介質來分離等電點(pI)不同的蛋白質的電泳技術.這是六十年代後期才發展起來的新技術,基本原理是在制備聚丙烯胺膠凝膠時,在膠的混合液中加入載體兩性電解質(商品名Ampholine).這種載體兩性電解質是一系列含有不同比例氨基及羧基的氨羧酸混合物,其分子量在300～1000范圍內,它們在pH2.5～11.0之間具有依次遞變但相距很近的等電點,並且在水溶液中能夠充分溶解.含有載體兩性電解質的凝膠,當通以直流電時,載體兩性電解質即形成一個從正極到負極連續增加的pH梯度.如果把蛋白質加人此體系中進行電泳時,不同的蛋白質即移動並聚焦於相當其等電點的位置.好的載體兩性電解質應具有以下特點：在等電點處有足夠的緩沖能力,不易被樣品等改變其pH梯度；必須有均勻的足夠高的電導,以便使一定的電流通過；分子量不宜太大,便於快速形成梯度並從被分離的高分子物質中除去；不與被分離物質發生化學反應或使之變性等.Ampholine是一種常用的載體兩性電解質.要取得滿意的等電聚焦電泳分離結果,除有好的載體兩性電解質外,還應有抗對流的措施,使已分離的蛋白質區帶不致發生再混合.要消除這種現象,辦法之一加入抗對流介質,用得最多的抗對流支持介質是聚丙烯醯胺凝膠.
等電聚焦電泳與其它區帶電泳比較具有更高的解析度,等電點僅差0.01pH的物質即可分開；具有更好的濃縮效應,很稀的樣品也可進行分離,並且可直接測出蛋白質的等電點.所以此技術在高分子物質的分離、提純和鑒定中的應用日益廣泛.但是等電聚焦電泳技術要求有穩定的pH梯度和使用無鹽溶液,而在無鹽溶液中蛋白質易發生沉澱.

⑤ DNA的瓊脂糖凝膠電泳的應用和發展舉例.要詳細一點的.

應用:
1、DNA的制備.
⑴ 適合分離大片段DNA.
瓊脂糖凝膠約可區分相差100bp的DNA片段,其解析度雖比聚丙烯醯胺凝膠低,但它制備容易,分離范圍廣,尤其適於分離大片段DNA.普通瓊脂糖凝膠分離DNA的范圍為0.2-20kb,利用脈沖電泳,可分離高達10^7bp的DNA片段.
在青貯飼料總DNA的提取實驗中,是通過瓊脂糖凝膠電泳和紫外吸收來實現的.所提取的DNA純度較高,可直接用於下游分子操作,提取方法靈敏度高,能全面反映樣品中的微生物原貌[1].
在「CTAB結合DNA凝膠回收試劑盒提取食用菌DNA」實驗中,研究人員用了兩種方法來提取DNA：一、CTAB法(對照法).二、CTAB與DNA凝膠回收試劑盒（瓊脂糖凝膠DNA試劑盒）結合法（結合法）.實驗結果表明,與對照法相比結合法提取DNA樣品的電泳條帶更規則、清晰,且DNA的酶切效率顯著高於對照.由此說明,結合法能高效地從富含多糖的材料中分離到純凈的DNA[2].
⑵ 可提取大分子DNA.
在「洋蔥帕克霍爾德氏菌HMW·DNA的制備及酶切研究」的實驗中提到,構建大片段基因組文庫的關鍵就是獲得高分子量的基因組DNA[3].而利用成熟的商品化試劑盒提取基因組DNA只能得到大小約在20kb左右的DNA；酶抽提法需經過多次抽提法才能得到較純的DNA,但極易造成基因組斷裂,也難以得到大於300kb的基因組DNA.兩種方法均不能達到目的,但經過研究人員不懈的研究,利用瓊脂糖凝膠制備成凝膠塊提取基因組DNA能夠獲得足夠大的DNA片段,可以完全符合構建粘粒基因組文庫的要求.在此過程中研究人員在用低熔點瓊脂糖還是普通熔點瓊脂糖制備凝膠塊的問題中選擇了後者,因為低熔點瓊脂糖價格昂貴且膠塊在制備純化的過程中容易斷裂,而普通熔點瓊脂糖與低熔點瓊脂糖在基因組DNA制備方面沒有區別.
1、PCR產物在瓊脂糖凝膠上進行的電泳檢測.
在基因組DNA的提取中,DNA經孵育及抽提、沉澱後以70%乙醇洗滌2次,再適量的雙蒸水溶解DNA.然後在1.0%的瓊脂糖凝膠上進行電泳,以1kb DNA ladder 為參照,估計DNA溶液濃度.具體檢驗方法是：2.0%瓊脂糖製成凝膠,取6 微升 AFLP—PCR產物與1微升上樣緩沖液混勻後上樣,用1×TBE電泳緩沖液,120V電泳50min,使用EB溶液染色後在凝膠成像系統（ChampGel-3200）上觀察拍照[4].
2、瓊脂糖在其他方面的應用
⑴ 瓊脂糖在免疫擴散法中的應用.
免疫擴散法就是利用瓊脂糖凝膠作為擴散介質,使抗原與抗體在瓊脂糖凝膠中自由擴散而相遇,從而形成抗原抗體復合物,由於此復合物分子量增大並產生聚集,不再繼續擴散而形成肉眼可見的帶狀或線狀沉澱帶.抗原抗體復合物的沉澱帶是一種特異性的半滲透性屏障,它可以阻止免疫學性質與其相似的抗原抗體分子通過,而允許那些性質不相似的分子繼續擴散,這樣由不同抗原或不同抗體所形成的沉澱帶各有各的位置,從而可以分離和鑒定混合系統.
利用瓊脂糖凝膠作為擴散介質是因為一定濃度的瓊脂糖凝膠,其內部為多孔網狀.而且孔徑很大,可以允許大分子物質（分子量自十幾萬到幾百萬以上）自由通過.因為大多數抗原和抗體的分子量都在20萬以上,所以它們在瓊脂糖凝膠中幾乎可以自由擴散.而且瓊脂糖凝膠又具有良好的化學穩定性、含水量大、透明度好、來源方便、處理容易等優點,因此是免疫沉澱檢測技術中最理想的擴散介質.
雙向瓊脂擴散實驗中也用瓊脂或瓊脂糖作為擴散介質,原因同上.
⑵ 瓊脂糖在雙鏈DNA探針的合成方法中的作用.
雙鏈DNA探針的合成方法主要有切口平移法和隨機引物合成法.
a 切口平移法
影響切口平移反應的幾種因素:(a) 產物的比活性取決於[α-32 P]dNTP的比活性和模板中核苷酸被置換的程度.(b) DNA酶Ⅰ的用量和E.coli DNA聚合酶的質量會影響產物片段的大小.(c) DNA模板中的抑制物如瓊脂糖會抑制酶的活性,故應使用仔細純化後的DNA.
b 隨機引物合成法
隨機引物合成法還可以在低熔點瓊脂糖中直接進行.
以上是瓊脂糖凝膠在生物學各個領域中的部分應用.但由於當今生物研究領域正處於飛速的發展之中,所以瓊脂糖凝膠的應用范圍可能會更廣,會在生物研究中發揮自己應有的作用.
發展舉例：瓊脂、瓊脂糖因為有特殊的膠凝性質,尤其有顯著的穩固性、滯度和滯後性,並且易吸收水分,有特殊的穩定效應；已經廣泛使用於食用、醫葯、化工、紡織、國防等領域,據不完全統計,瓊脂、瓊脂糖的用途已有1000多種,被國際上稱為「新奇的東亞產品」.在食品工業中可用於生產：水晶軟糖、定型軟糖、水產品、肉類罐頭、果汁飲料、果肉飲料、米酒飲料、乳品飲料、精品、乳品蛋糕.

⑥ 常用的蛋白質電泳方法有哪些

聚丙烯醯胺凝膠電泳:這是一種活性電泳，可以分析混合樣品，並且可用特異檢測手段檢測目標物條帶。
SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳:最常用的變性電泳，可以用來測定蛋白質分子量。比層析法測定要好。

⑦ 除紙電泳外,還有那些電泳方法

1、醋酸纖維素薄膜電泳
醋酸纖維素是提纖維素的羥基乙醯化形成的纖維素醋酸酯。由該物質製成的薄膜稱為醋酸纖維素薄膜。這種薄膜對蛋白質樣品吸附性小，幾乎能完全消除紙電泳中出現的「拖尾」現象，又因為膜的親水性比較小，它所容納的緩沖液也少，電泳時電流的大部分由樣品傳導，所以分離速度快，電泳時間短，樣品用量少，5靏的蛋白質可得到滿意的分離效果。因此特別適合於病理情況下微量異常蛋白的檢測。
醋酸纖維素膜經過冰醋酸乙醇溶液或其它透明液處理後可使膜透明化有利於對電泳圖譜的光吸收掃描測定和膜的長期保存。
2、凝膠電泳
凝膠電泳以澱粉膠、瓊脂或瓊脂糖凝膠、聚丙烯醯胺凝膠等作為支持介質的區帶電泳法稱為凝膠電泳。其中聚丙烯醯胺凝膠電泳（polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE）普遍用於分離蛋白質及較小分子的核酸。瓊脂糖凝膠孔徑較大，對一般蛋白質不起分子篩作用，但適用於分離同工酶及其亞型，大分子核酸等應用較廣。
3、等電聚焦電泳技術
等電聚焦（isoelectric focusing，IEF）是60年代中期問世的一種利用有pH梯度的介質分離等電點不同的蛋白質的電泳技術。由於其解析度可達0.01pH單位，因此特別適合於分離分子量相近而等電點不同的蛋白質組分。

⑧ 簡述凝膠電泳的原理與方法

凝膠電泳的原理比較簡單。當一種分子被放置在電場當中時，它們就會以一定的速度移向適當的電極，這種電泳分子在電場作用下的遷移速度，叫做電泳的遷移率。它同電場的強度和電泳分子本身所攜帶的凈電荷數成正比。也就是說，電場強度越大、電泳分子所攜帶的凈電荷數量越多，其遷移的速度也就越快，反之則較慢。由於在電泳中使用了一種無反應活性的穩定的支持介質，如瓊脂糖凝膠和聚丙烯醯胺膠等，從而降低了對流運動，故電泳的遷移率又是同分子的摩擦系數成反比的。已知摩擦系數是分子的大小、極性及介質粘度的函數，因此根據分子大小的不同、構成或形狀的差異，以及所帶的凈電荷的多少，便可以通過電泳將蛋白質或核酸分子混合物中的各種成分彼此分離開來。在生理條件下，核酸分子的糖-磷酸骨架中的磷酸基團呈離子狀態，從這種意義上講，DNA和RNA多核苷酸鏈可叫做多聚陰離子(Polyanions)。因此，當核酸分子被放置在電場中時，它們就會向正電極的方向遷移。由於糖-磷酸骨架結構上的重復性質，相同數量的雙鏈DNA幾乎具有等量的凈電荷，因而它們能以同樣的速度向正電極方向遷移。在一定的電場強度下，DNA分子的這種遷移速度，亦即電泳的遷移率，取決於核酸分子本身的大小和構型，分子量較小的DNA分子比分子量較大的DNA分子遷移要快些。這就是應用凝膠電泳技術分離DNA片段的基本原理。
凝膠電泳被廣泛用於分子生物學、遺傳學和生物化學：

⒈大的DNA或者RNA分子通常利用瓊脂糖凝膠電泳（agarosegelelectrophoresis）分離，也可以使用聚丙烯醯胺凝膠電泳（PAGE）。

⒉蛋白質的凝膠電泳通常在加入十二烷基硫酸鈉的聚丙烯醯胺凝膠中進行（SDS-PAGE），或者非變性凝膠電泳，或二維電泳。

3。毛細管電泳

⒋酶譜法（zymography）

⒌變性梯度膠凝電泳

⑨ 凝膠電泳的實驗原理

凝膠電泳（英語：Gel electrophoresis）或稱膠體電泳 是一大類技術，被科學工作者用於分離不同物理性質（如大小、形狀、等電點等）的分子。凝膠電泳通常用於分析用途，但也可以作為制備技術，在採用某些方法（如質譜(MS)、聚合酶鏈式反應(PCR)、克隆技術、DNA測序或者免疫印跡）檢測之前部分提純分子。 該技術操作簡便快速，可以分辨用其它方法（如密度梯度離心法）所無法分離的DNA片段。當用低濃度的熒光嵌入染料溴化乙啶(Ethidium bromide, EB)染色,在紫外光下至少可以檢出1-10ng的DNA條帶,從而可以確定DNA片段在凝膠中的位置。此外,還可以從電泳後的凝膠中回收特定的DNA條帶,用於以後的克隆技術操作。
凝膠電泳被廣泛用於分子生物學、遺傳學和生物化學：
1.大的DNA或者RNA分子通常利用瓊脂糖凝膠電泳（agarose gel electrophoresis）分離，也可以使用聚丙烯醯胺凝膠電泳（PAGE）。
2.蛋白質的凝膠電泳通常在加入十二烷基硫酸鈉的聚丙烯醯胺凝膠中進行（SDS-PAGE），或者非變性凝膠電泳，或二維電泳。
3.毛細管電泳
4.酶譜法（zymography）
5.變性梯度膠凝電泳（Denaturing Gradient Gel Electrophoresis，DGGE）
瓊脂糖和聚丙烯醯胺可以製成各種形狀、大小和孔隙度。瓊脂糖凝膠分離DNA片度大小范圍較廣,不同濃度瓊脂糖凝膠可分離長度從200bp至近50kb的DNA片段。瓊脂糖通常用水平裝置在強度和方向恆定的電場下電泳。聚丙烯醯胺分離小片段DNA(5-500bp)效果較好,其分辯力極高,甚至相差1bp的DNA片段就能分開。聚丙烯醯胺凝膠電泳很快,可容納相對大量的DNA,但制備和操作比瓊脂糖凝膠困難。聚丙烯醯胺凝膠採用垂直裝置進行電泳。目前,一般實驗室多用瓊脂糖水平平板凝膠電泳裝置進行DNA電泳。
瓊脂糖主要在DNA制備電泳中作為一種固體支持基質,其密度取決於瓊脂糖的濃度。在電場中,在中性pH值下帶負電荷的DNA向陽極遷移,其遷移速率由下列多種因素決定:
1、 DNA的分子大小:
線狀雙鏈DNA分子在一定濃度瓊脂糖凝膠中的遷移速率與DNA分子量對數成反比，分子越大則所受阻力越大，也越難於在凝膠孔隙中蠕行，因而遷移得越慢。
2、 瓊脂糖濃度
一個給定大小的線狀DNA分子,其遷移速度在不同濃度的瓊脂糖凝膠中各不相同。DNA電泳遷移率的對數與凝膠濃度成線性關系。凝膠濃度的選擇取決於DNA分子的大小。分離小於0.5kb的DNA片段所需膠濃度是1.2-1.5%,分離大於10kb的DNA分子所需膠濃度為0.3-0.7%, DNA片段大小間於兩者之間則所需膠濃度為0.8-1.0%。
3、 DNA分子的構象
DNA分子處於不同構象時,它在電場中移動距離不僅和分子量有關,還和它本身構象有關。相同分子量的線狀、開環和超螺旋DNA在瓊脂糖凝膠中移動速度是不一樣的,超螺旋DNA移動最快,而開環雙鏈DNA移動最慢。如在電泳鑒定質粒純度時發現凝膠上有數條DNA帶難以確定是質粒DNA不同構象引起還是因為含有其他DNA引起時,可從瓊脂糖凝膠上將DNA帶逐個回收,用同一種限制性內切酶分別水解,然後電泳,如在凝膠上出現相同的DNA圖譜,則為同一種DNA。
4、 電源電壓
在低電壓時,線狀DNA片段的遷移速率與所加電壓成正比。但是隨著電場強度的增加，不同分子量的DNA片段的遷移率將以不同的幅度增長,片段越大,因場強升高引起的遷移率升高幅度也越大,因此電壓增加，瓊脂糖凝膠的有效分離范圍將縮小。要使大於2kb的DNA片段姆直媛蝕鐧階畲?所加電壓不得超過5V/cm。
5、嵌入染料的存在
熒光染料溴化乙啶用於檢測瓊脂糖凝膠中的DNA,染料會嵌入到堆積的鹼基對之間並拉長線狀和帶缺口的環狀DNA，使其剛性更強,還會使線狀DNA遷移率降低15％。
6、 離子強度影響
電泳緩沖液的組成及其離子強度影響DNA的電泳遷移率。在沒有離子存在時(如誤用蒸餾水配製凝膠),電導率最小,DNA幾乎不移動,在高離子強度的緩沖液中(如誤加10×電泳緩沖液),則電導很高並明顯產熱,嚴重時會引起凝膠熔化或DNA變性。
對於天然的雙鏈DNA,常用的幾種電泳緩沖液有TAE[含EDTA (pH8.0)和Tris-乙酸],TBE(Tris-硼酸和EDTA),TPE(Tris-磷酸和EDTA),一般配製成濃縮母液,儲於室溫。

⑩ 瓊脂糖凝膠電泳具體操作步驟是什麼需要注意什麼事項

一、操作步驟：

1、電泳方法

一般的核酸檢測只需要瓊脂糖凝膠電泳就可以；如果需要解析度高的電泳，特別是只有幾個bp的差別應該選擇聚丙烯醯胺凝膠電泳；用普通電泳不合適的巨大DNA鏈應該使用脈沖凝膠電泳。

2、凝膠濃度

對於瓊脂糖凝膠電泳，濃度通常在0.5～2%之間，低濃度的用來進行大片段核酸的電泳，高濃度的用來進行小片段分析。低濃度膠易碎，小心操作和使用質量好的瓊脂糖是解決辦法。

3、緩沖液

常用的緩沖液有TAE和TBE，而TBE比TAE有著更好的緩沖能力。電泳時使用新制的緩沖液可以明顯提高電泳效果。

4、電壓和溫度

電泳時電場強度不應該超過20V/cm，電泳溫度應該低於30℃，對於巨大的DNA電泳，溫度應該低於15℃。

5、DNA樣品的純度和狀態

注意樣品中含鹽量太高和含雜質蛋白均可以產生條帶模糊和條帶缺失的現象。乙醇沉澱可以去除多餘的鹽，用酚可以去除蛋白。

6、DNA的上樣

正確的DNA上樣量是條帶清晰的保證。注意太多的DNA上樣量可能導致DNA帶型模糊，而太小的DNA上樣量則導致帶信號弱甚至缺失。

7、Marker的選擇

DNA電泳一定要使用DNA Marker或已知大小的正對照DNA來估計DNA片段大小。Marker應該選擇在目標片段大小附近ladder較密的，這樣對目標片段大小的估計才比較准確。

8、凝膠的染色和觀察

實驗室常用的核酸染色劑是溴化乙錠（EB），染色效果好，操作方便，但是穩定性差，具有毒性。注意觀察凝膠時應根據染料不同使用合適的光源和激發波長，如果激發波長不對，條帶則不易觀察，出現條帶模糊的現象。

二、注意事項：

1、巨大的DNA鏈用普通電泳可能跑不出膠孔導致缺帶。

2、高濃度的膠可能使分子大小相近的DNA帶不易分辨，造成條帶缺失現象。

3、電泳緩沖液多次使用後，離子強度降低，pH值上升，緩沖性能下降，可能使DNA電泳產生條帶模糊和不規則的DNA帶遷移的現象。

4、如果電泳時電壓和溫度過高，可能導致出現條帶模糊和不規則的DNA帶遷移的現象。特別是電壓太大可能導致小片段跑出膠而出現缺帶現象。

5、變性的DNA樣品可能導致條帶模糊和缺失，也可能出現不規則的DNA條帶遷移。在上樣前不要對DNA樣品加熱，用20mM NaCl緩沖液稀釋可以防止DNA變性。

6、太多的DNA上樣量可能導致DNA帶型模糊，而太小的DNA上樣量則導致帶信號弱甚至缺失。

(10)高中生物凝膠電泳方法有哪些擴展閱讀

瓊脂糖凝膠具有網路結構，物質分子通過時會受到阻力，大分子物質在涌動時受到的阻力大，因此在凝膠電泳中，帶電顆粒的分離不僅取決於凈電荷的性質和數量，而且還取決於分子大小，這就大大提高了分辨能力。

但由於其孔徑相比於蛋白質太大，對大多數蛋白質來說其分子篩效應微不足道，現廣泛應用於核酸的研究中。

蛋白質和核酸會根據pH不同帶有不同電荷，在電場中受力大小不同，因此跑的速度不同，根據這個原理可將其分開。電泳緩沖液的pH在6~9之間，離子強度0.02~0.05為最適。常用1%的瓊脂糖作為電泳支持物。

瓊脂糖凝膠約可區分相差100bp的DNA片段，其解析度雖比聚丙烯醯胺凝膠低，但它制備容易，分離范圍廣。普通瓊脂糖凝膠分離DNA的范圍為0.2-20kb，利用脈沖電泳，可分離高達10^7bp的DNA片段。

DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時有電荷效應和分子篩效應。DNA分子在高於等電點的pH溶液中帶負電荷，在電場中向正極移動。由於糖-磷酸骨架在結構上的重復性質，相同數量的雙鏈DNA幾乎具有等量的凈電荷，因此它們能以同樣的速率向正極方向移動。