化合物與蛋白結合的方法有哪些

㈠ 哪些物質可以合蛋白質交聯

交聯劑是一類小分子化合物，分子量一般在200-600之間，具有2個或者更多的針對特殊基團（氨基、巰基等）的反應性末端，可以和2個或者更多的分子分別偶聯從而使這些分子結合在一起。在生命科學研究中，巧妙地運用交聯劑可以使很多工作取得突破。
· 種類最多，成熟的產品多達86種，可以滿足各種偶聯需要。
· 生理條件下即可共價交聯，交聯反應快速簡便。
· 多種反應性基團可供選擇，反應指向既可以有專一性也可以無專一性。
· 含有不同長度的間臂，有效地降低空間位阻效應。
· 部分產品內置可裂解基團，大大增強了交聯劑應用的靈活性。
交聯劑的應用
交聯劑已經被廣泛地應用於：細胞膜結構研究，蛋白質結構研究，蛋白質間相互作用研究，生物導彈研究，載體蛋白與半抗原的連接，蛋白質或其他分子的固相化，抗體的標記，標記轉移，蛋白質與核酸的連接。

㈡ 外來化合物與血漿蛋白結合以什麼鍵

是外來化合物在體內運輸的過程。外來化合物進入血液之後往往與血漿蛋白，尤其是血漿白蛋白結合。這種結合是可逆的，可以視為外來化合物在體內分布運輸的一個過程。

㈢ 生物樣品中蛋白質的處理方法有哪些

一。蛋白質沉澱方法
1.中性鹽鹽析法
⑴在一定的
ph值及溫度條件下，改變鹽的濃度（即離子強度）達到沉澱的目的，稱為「ks」分級鹽析法。
（ks鹽析：固定ph,
溫度，改變鹽濃度）
⑵在一定的離子強度下，改變溶液的ph值及溫度，達到沉澱的目的，稱為「β」分級鹽析法。
（β鹽析：固定離子強度，改變ph及溫度。）
2.等電點沉澱法
蛋白質等電點沉澱法是基於不同蛋白質離子具有不同等電點這一特性，依次改變溶液ph值的辦法，將雜蛋白沉澱除去，最後獲得目標產物。
3.有機溶劑沉澱法
許多能與水互溶的有機溶劑如乙醇、丙酮、甲醇和乙腈，常用於低鹽濃度下沉澱蛋白質。
4.非離子型聚合物沉澱法
20世紀60年代非離子型聚合物開始用於分離血纖維蛋白原和免疫球蛋白，從此高相對分子質量非離子聚合物沉澱蛋白質的方法被廣泛使用，如：聚乙二醇（peg）、聚乙烯吡咯烷酮（pvp）、葡聚糖等。
5.金屬沉澱法
能與羧基、胺基等含氮化合物以及含氮雜環化合物強烈結合的金屬離子，如：mn2+、fe2+、co2+、ni2+、cu2+、zn2+、cd2+；
能與羧酸結合而不與含氮化合物結合的金屬離子，如：ca2+、ba2+、mg2+、pb2+；
與巰基化合物強烈結合的金屬離子，如：hg2+、ag+、pb2+。
實際使用時，金屬離子的濃度常為0.02
mol/l。
6.親和沉澱
初始階段：將一個目標蛋白質與鍵合在可溶性載體上的親和配體絡合成沉澱；
所得沉澱物用一生中適當的緩沖溶液進行洗滌，洗去可能存在的雜質；
用一種適當的試劑將目標蛋白質從配體中離解出來。
7.選擇性變性沉澱法
（1）例如對於α-澱粉酶等熱穩定性好的酶，可以通過加熱進行熱處理，使大多數雜蛋白受熱變性沉澱而被除去。
（2）根據欲分離物質所含雜質的特性，通過改變ph值或加進某些金屬離子等使雜蛋白變性沉澱而被除去。
8.反膠束萃取蛋白質
菌體細胞提取
固液分離是生物產品生產中的重要單元操作。培養基、發酵液、某些中間產品和半成品等都需進行固液分離。發酵液由於種類多、粘度大及成分復雜，其固液分離最為困難。
固液分離的方法很多，生物工業中常規的方法有分離篩、重力沉降、浮選分離、離心分離和過濾等，其中用於發酵液固液分離的方法主要是離心分離和過濾。
二。超濾膜濾去。

㈣ 怎麼驗證某個蛋白跟某個化合物有結合能力

把雞蛋清和你要驗證的化合物放一起攪，有沉澱或者凝固了就是有結合

㈤ 怎麼判斷化合物與蛋白是共價結合

ClO2 是共價化合物。

實驗區分，就是看化合物在熔融狀態下是否導電，導電的是離子化合物，不導電的是共價化合物。
但是不能每次判斷都做實驗的啊，因此直接看化合物的化學式吧
一般說來，化合物的化學式中含有活潑金屬或者銨根NH4的，就是離子化合物，（少量例外如AlCL3是共價）
否則就是共價化合物，
這個方法比較有效，簡單 。

㈥ 抗體怎麼和另外的一個蛋白質偶聯

我曾經做過小分子和蛋白質的偶聯，有一些自己總結的綜述，你可以參考以下：
人工抗原合成常用的載體
載體表面應首先應具有化學活性基團，這些基團可以直接與抗生素(antibiotic)或農葯分子偶聯，這是化學偶聯制備抗原的前提；其次，載體應具備一定的容量，可以偶聯足夠的分子；載體還應該是惰性的，不應干擾偶聯分子的功能；而且載體應具有足夠的穩定性，且應該是廉價易得的。
常用來作為合成人工抗原的載體蛋白質有牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)、鑰孔血藍蛋白(KLH)、人血清白蛋白(HSA)及人工合成的多聚賴氨酸(PLL)等。這些蛋白質分子中的α和ε-氨基（等電點8和10）、苯酚基、巰基（等電點為9）、咪唑基（等電點為7）、羧基（等電點2～4，大部分來自天冬氨酸或谷氨酸的β-和γ-羧基）等在等電點pH條件下，一部分成為質子，另一部分未質子化的親核基團則具有反應活性，可與半抗原中的對應基團結合。當然，這些基團的反應性也取決於蛋白質各種氨基酸殘基的微環境。牛血清白蛋白（BSA）和人血清白蛋白（HAS）分子中含有大量的賴氨酸，故有許多自由氨基存在，且在不同pH和離子強度下能保持較大的溶解度。此外，這些蛋白質在用有機溶劑（如吡啶、二甲基甲醯胺）溶解時，其活性基團仍呈可溶狀態，因此，這兩種蛋白質是最常用的載體蛋白質[30]。近年來，有研究報道用人工合成的多聚肽(最常用的是多聚賴氨酸)作載體，表現出能增加半抗原的免疫原性，從而使產生征對半抗原的特異性抗體可能性增加，被廣泛應用[31，32]。
1.2.2人工抗原合成方法
小分子半抗原與載體蛋白偶聯效果會受到偶聯物的濃度及其相對比例、偶聯劑的有效濃度及其相對量、緩沖液成分及其純度和離子強度、pH以及半抗原的穩定性、可溶性和理化特性等因素的影響。通常是在條件溫和的水溶液中將半抗原與載體蛋白共價結合，不宜在高溫、低溫、強鹼、強酸條件下進行。一般是由半抗原上的活性基團決定偶聯合成的方法，常用的方法如下：
1.2.2.1分子中含有羧基或者可羧化的半抗原的偶聯
1）混合酸酐法（mixed anhydride method）：也稱氯甲酸異丁酯法。半抗原上的羧基在正丁胺存在下與氯甲酸異丁酯反應，形成混合酸酐的中間體，再與蛋白質的氨基反應，形成半抗原與蛋白質的結合物
2）碳二亞胺法（CDI）：碳二亞胺(EDC)使羥基和氨基間脫水形成醯胺鍵，半抗原上的羧基先與EDC反應生成一個中間物，然後再與蛋白質上的氨基反應，形成半抗原與蛋白質的結合物（見圖1.5）。EDC被稱作零長度交聯劑之一，因為它作為醯胺鍵的形成介質並沒有形成手臂分子。
此連接方法十分簡便，只需將載體蛋白質和抗原按一定比例混合在適當的溶液中，然後加入水溶性碳化二亞胺，攪拌1～2h，置室溫24h，再經透析即可。如果半抗原分子中不含羧基，可通過某些化學反應引入羧基。在引入羧基後，也可用上述方法進行偶聯。
1.2.2.2含有氨基或可還原硝基半抗原的偶聯
1）戊二醛法：雙功能試劑戊二醛的兩個醛基分別與半抗原和蛋白質上的氨基形成schiff鍵(-N=C<，在半抗原和蛋白質間引入一個5碳橋。這一反應條件溫和，可在4～40℃及pH6.0～8.0內進行，操作亦簡便，因此應用廣泛。戊二醛受到光照、溫度和鹼性的影響，可能發生自我聚合，減弱其交聯作用，因此最好使用新鮮的戊二醛。
2）重氮化法：用於活性基團是芳香胺基的半抗原，芳香胺基與NaNO2和HCl反應得到一個重氮鹽，它可直接接到蛋白質酪氨酸羧基的鄰位上，形成一個偶氮化合物（見圖1.6）。
1.3.2.3含羥基半抗原的偶聯
1）琥珀酸酐法：半抗原的羥基與琥珀酸酐在無水吡啶中反應得到一個琥珀酸半酯(帶有羧基的中間體)，再經碳二亞胺法或混合酸酐法與蛋白質氨基結合，在半抗原與蛋白質載體間插入一個琥珀醯基（圖1.7）。
2）羰基二咪唑法：N，N』-羰基二咪唑是引入羰基的高活性試劑，在肽合成中首次表明了是形成極好的醯胺鍵試劑[33]。含羥基的分子同羰基二咪唑反應，形成中間體咪唑基甲酸酯，它能和N-親核試劑反應，得到N-烷基化的甲酸酯鍵，通常蛋白質通過N-端(α-氨基)和賴氨酸側鏈的(ε-氨基)和分子形成不帶電的類似尿烷的衍生物，具有極好的化學穩定性。
1.2.3影響人工抗原質量的因素
人工抗原免疫原性的好壞，與多種因素有關。對不同的物質，影響免疫原性的因素並不完全相同，常常需要在得到抗體後對免疫偶合物的具體合成方法進行重新調整。但總的說來，影響人工抗原質量的因素主要有：
1) 偶聯比
偶聯比過去人們認為，聯接到蛋白質分子上的半抗原數目要盡可能多。但實驗證明，過多的半抗原並不能得到預期的結果，這是因為載體上覆蓋的半抗原分子過多時，可能不利於載體與淋巴細胞表面結合，不能使載體引起免疫反應。實際上，每個載體分子連接上一個半抗原分子就足以產生抗體。有人認為，以BSA為例，連接到蛋白分子上的半抗原數以5～20為宜。而榮康泰等用不同的載體制備對氧磷的人工抗原時，卻發現各種載體的分子量不論是否接近，最佳結合比都不盡相同，並建議為了取得最佳免疫效果，應逐個確定各種載體的最佳結合比。
2) 偶聯橋
有研究者認為，一定長度的手臂的介入，有助於半抗原暴露在外面，利於所產生抗體專一性的增強，如吳頌如等［34］發現，通常愈遠離載體蛋白的基團，其特徵反應愈明顯。但也有一些研究者發現，手臂結構對免疫檢測經常有不利的影響，有時產生的抗體對手臂結構親和力特別強，對待測小分子親和力卻很弱，因此造成對特異性抗體檢測的干擾。Sionf等［35］認為可以採取兩種方法來避免因偶聯橋而造成的不足：一是半抗原上相同位點結合蛋白質，但免疫原和包被抗原用不同的偶聯橋；二是免疫原和包被抗原用相同的偶聯橋，但與不同半抗原位點結合。Frieia［36］研究農葯酶免疫分析多年，他認為最好的偶聯橋是3～6個直鏈的碳原子結構。
3）半抗原的分子空間結構
用來作半抗原的分子最好有分支結構，直鏈分子難以產生抗體。此外，有些抗生素(antibiotic)或農葯有多個可供蛋白質偶聯的位點，但據研究報道，不同位點與蛋白質結合制備的人工抗原產生的抗體效價及親合力都有差別，這可能是因為不同位點結合導致半抗原呈現的空間結構不一樣的原因。如合成滅草松和吡蟲啉人工抗原時，當利用半抗原不同位點與載體結合時產生的抗體效價和親合力明顯不一樣[37、38]。因此，如果一個分子內有多個不同的結合位點時，最好盡可能利用不同位點都合成出人工抗原，然後，通過比較，篩選出最好的人工抗原用於制備抗體作為檢測。
1.2.4人工抗原的質量評定
1.2.4.1濃度測定
人工抗原的絕對含量常以蛋白質的相對濃度表示（如每ml抗原溶液中含有蛋白質多少mg）。因此測定人工抗原的濃度與測定人工抗原溶液中蛋白質的相對含量（mg/ml）是一致的（這里也反映出人工抗原越純，檢出的濃度值愈准確）。常用的方法有紫外吸收法、Folin-酚法、雙縮脲法、微量凱式定量法、染色結合法和熒光法等。這里就不一一介紹了。

1.2.4.2純度鑒定和結構分析
鑒定農葯人工抗原最常用的方法是紫外光譜掃描法，如果人工抗原的紫外吸收圖譜不同於原載體蛋白和半抗原的紫外掃描圖譜，則可初步證明人工抗原合成成功。
半抗原與載體分子反應後是否真正的連接在一起，如果發生連接，它們的連接基團又在哪裡。這些問題可以通過紅外吸收光譜圖或質譜分析得到解決。
利用吸附與分配層析和電泳技術可鑒定人工抗原的偶聯的純度。前者適應范圍廣，但鑒別的靈敏度較低。後者是用於大分子大分子酶標記物和某些半抗原偶聯物的純度鑒定。如果電泳圖譜上只出現一條電泳帶，則表明人工抗原達到電泳純，否則說明人工抗原中含有有利的未偶聯的物質。

1.2.4.3偶聯比的測定
1）分光光度法
根據趙肅清等人的說法［39］，如果半抗原的紫外最大吸收大於220nm(蛋白質在220nm以下會產生肽的強紫外吸收，如果半抗原的紫外最大吸收少於220nm，則與蛋白質肽的吸收發生重疊)，則可根據蛋白質及其半抗原特定的吸收峰的光密度值和各自的摩爾消光系數，計算出結合到每個蛋白質分子上的半抗原分子數（可以參考文獻[30]中的279-283頁計算）。
2）標記抗原示蹤法
在制備半抗原-蛋白質結合物時，向反應液中同時加入一定量的標記半抗原，反應完成後，未結合的半抗原經透析除去，測定透析前後的放射性強度，就可以計算出結合百分比。再依反應時加入的蛋白質摩爾數即可知半抗原結合到蛋白質上的分子數。如果不用透析，也可取一定量反應後的溶液，加入蛋白質沉澱劑或有機溶劑以提取結合的半抗原，測定半抗原-蛋白質結合物的放射性。同樣可以計算出半抗原與蛋白質的偶聯比。

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㈦ 蛋白質分離純化的四種方法

1、鹽析法：

鹽析法的根據是蛋白質在稀鹽溶液中，溶解度會隨鹽濃度的增高而上升，但當鹽濃度增高到一定數值時，使水活度降低，進而導致蛋白質分子表面電荷逐漸被中和，水化膜逐漸被破壞，最終引起蛋白質分子間互相凝聚並從溶液中析出。

2、有機溶劑沉澱法：

有機溶劑能降低蛋白質溶解度的原因有二：其一、與鹽溶液一樣具有脫水作用；其二、有機溶劑的介電常數比水小，導致溶劑的極性減小。

3、蛋白質沉澱劑：

蛋白質沉澱劑僅對一類或一種蛋白質沉澱起作用，常見的有鹼性蛋白質、凝集素和重金屬等。

4、聚乙二醇沉澱作用：

聚乙二醇和右旋糖酐硫酸鈉等水溶性非離子型聚合物可使蛋白質發生沉澱作用。

(7)化合物與蛋白結合的方法有哪些擴展閱讀：

蛋白質是生命的物質基礎，是有機大分子，是構成細胞的基本有機物，是生命活動的主要承擔者。沒有蛋白質就沒有生命。氨基酸是蛋白質的基本組成單位。它是與生命及與各種形式的生命活動緊密聯系在一起的物質。

機體中的每一個細胞和所有重要組成部分都有蛋白質參與。蛋白質占人體重量的16%~20% ，即一個60kg重的成年人其體內約有蛋白質9.6~12kg。

人體內蛋白質的種類很多，性質、功能各異，但都是由20多種氨基酸（Amino acid）按不同比例組合而成的，並在體內不斷進行代謝與更新。

㈧ 什麼是結合蛋白,都有哪些結合蛋白

1.什麼是結合蛋白：

定義：結合蛋白質的分子中除氨基酸組分之外，還含有非氨基酸物質，二者以共價或非共價形式結合，往往作為一個整體從生物材料中被分離出來。而結合蛋白質是單純蛋白質和其他化合物結合構成，被結合的其他化合物通常稱為結合蛋白質的非蛋白部分。

2 結合蛋白有哪些：結合蛋白質主要分為以下種類。

按其非蛋白部分的不同而分為：

▲核蛋白(含核酸)、2糖蛋白(含多糖)、3脂蛋白(含脂類)、4磷蛋白(含磷酸)、5金屬蛋白(含金屬)及6色蛋白(含色素)等6種。

1. 核蛋白：蛋白質與核酸結合，核蛋白存在於組織胚芽和人體腺體組織中。

2. 粘蛋白或糖蛋白：含有碳水化合物如甘露糖和半乳糖的蛋白質，人體細胞組織分泌的粘液含有粘蛋白。

3. 脂蛋白：溶於水，是脂肪與蛋白質結合，脂蛋白是人體在體內運輸脂肪的工具。包括乳糜微粒、極低密度脂蛋白、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白。
   

4. 卵磷蛋白：蛋白質與卵磷脂相結合，如血液中的纖維蛋白、卵黃磷蛋白。

5. 金屬蛋白：蛋白質與金屬結合，如運鐵蛋白、銅鋅結合蛋白，有很多種酶類都含有金屬離子。

6. 色蛋白：蛋白質和色素物質結合，如血紅蛋白。

㈨ 如何檢驗靶點蛋白與化合物能否結合

蛋白水平幾個assay先測一下，或者是再加上細胞水平，用pulldown實驗，在小分子上面適當部位接上biotin，不影響活性的基礎上，看看能不能把靶向蛋白拉到。
或者有條件的可以用核磁共振來鑒定。