『壹』 細菌鑒定辦法有哪些，常見細菌的鑒定辦法就可以
細菌的鑒定通過分離培養獲得的病原菌，必須達到不含有其他微生物的純培養程度，才能進行系統鑒定。系統鑒定就是通過病原菌的形態結構、生長特性、抗原性和病原性等檢測，並用已知標准免疫血清確定分離細菌的屬、種和型。微生物鑒定的程序通常是根據其形態，生長、生化特性等定種，最後根據抗原的免疫血清學檢查定型。(一)形態學檢查各種細菌的形態，在適宜的環境下是相對穩定的。但環境的改變，如培養基條件的改變，抗生素和化學葯品的作用等，均可使細菌產生不規則的形態，並可出現細胞壁的缺陷和多樣性。為此，在作細菌形態鑒定時，必須按被檢菌的生長要求，選擇適宜的培養基和培養條件，以及適宜的培養時間和檢查方法，才能作出正確的形態學鑒定。形態學檢查一般包括二方面：肉眼觀察和顯微鏡檢查。1.肉眼觀察肉眼觀察主要觀察細菌在固體、液體、半固體，鑒別培養基上的生長情況。在固體培養基上要觀察菌落形態、大小、顏色是否均勻一致，表面是光滑濕潤，還是乾燥無光或呈皺紋狀，邊緣是整齊還是不規則，菌落是隆起、扁平，還是乳頭樣，是透明、半透明或不透明。在液體培養基中，要觀察培養基是否呈均勻渾濁，管底有無沉澱，液面有無菌膜，是否產氣等。在半固體培養基上應觀察細菌是否沿著接種線生長，是呈毛刷樣生長還是均勻生長，上下生長是否一致。在鑒別培養基上，應觀察其生長情況是否與預期的相一致，在血瓊脂培養基上還要觀察是否溶血及溶血圈的特點，在某些培養基上還要注意是否有臭味等。2.顯微鏡觀察在作細菌個體形態學檢查時，要根據被檢菌的種類和檢查項目，選用相應的染色方法，同時要注意選擇適合的培養基以及細菌培養的時間，才能達到預期的目的。一般以18－24小時（生長時間長的細菌除外）的幼嫩培養菌為宜。例如，作革蘭氏染色檢查時，培養時間長的陳舊細菌，可能由陽性變為陰性。作細菌運動性檢查時，液體培養基的幼嫩培養物（幾小時到十幾小時）最為適宜。作炭疽莢膜染色時，因炭疽桿菌在一般培養基上不形成莢膜，而在動物體內形成明顯的莢膜，因此，應先接種小鼠，取死亡動物的病料作塗片標本鏡檢。作鞭毛染色時，以液體培養基為宜。芽胞的形成，因細菌種類不同，往往對培養條件如培養基、空氣和培養時間等而異，但一般均要求較長時間。鏡檢時除注意其基本形態結構和大小（要用測微計測量）外，還應注意其排列狀態、菌端形狀、有無兩極染色、有無形成芽胞和莢胞等。必要時可用電鏡觀察其微細結構。3.常用的幾種染色方法塗片用的載玻片需用清潔液洗凈、擦乾、不留油質，否則培養物不能均勻地推開。被檢材料如果是肉湯培養物，用鉑金耳環取一滴，均勻塗抹於載玻片上，塗抹的范圍約有手指甲大即可。隨後，在酒精燈火焰上加熱使之固定（即火焰固定）；被檢材料如果是固體培養物，先滴一滴水（常用生理鹽水）於載玻片上，用鉑金耳環取少許培養物，在水滴中混勻，培養物不宜太多，菌體看不清楚。膿汁、淋巴液、乳汁也按同樣方法制備抹片。血液和病變組織，直接塗抹在載玻片上，組織抹片也不能太厚，否則看不見細菌，細菌培養物抹片用火焰固定，組織抹片常用甲醇或甲醛固定。
『貳』 細菌學有哪些檢驗方法
直接塗片檢查：取混勻新鮮尿塗片，健康人的尿塗片無細菌。若每個油鏡視野下可見1條或以上的細菌，提示為菌尿。並可行革蘭氏染色，初步確定尿路感染細菌是陽性球菌或陰性桿菌。細菌培養：目前多採用定量接種環法，培養24h，計數菌落。陰性桿菌分裂快，菌落數>l〇5cfo/ml，提示菌尿，菌落數104〜105cfo/ml為可疑。陽性球菌分裂慢，菌落數>103cfU/ml為菌尿。結核菌檢查：尿結核菌檢查是確定有無泌尿系結核的重要方法，尿沉渣塗片抗酸染色較簡單，陽性率為50%〜70%;清晨第1次尿送檢則陽性率高。尿結核菌培養陽性率可達90%，但結核菌生長緩慢。使用改良羅氏培養基，一般需4〜8周始能報告結果。近年常用聚合酶鏈反應（PCR)方法，使含微量結核菌DNA擴增，40條結核菌即可有陽性結果，此法特異性強，2d可有結果，但時有假陽性或假陰性的情況。菌尿的輔助檢查亞硝酸鹽試驗：革蘭陰性桿菌如大腸、副大腸桿菌能將尿中的硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，而球菌和結核菌無還原硝酸鹽的能力，因此亞硝酸鹽試驗陽性，提示革蘭陰性桿菌的感染。氯化三苯四氮唑試驗（TTC試驗）；大部分革蘭陰性活桿菌能將無色TTC還原為紅色的三苯甲替，而球菌及變形桿菌則呈陰性。故可用以初步判定是哪一類細菌感染。尿抗體包裹細菌（ACB):腎盂腎炎為腎實質感染，在細菌抗原作用下，機體可產生相應抗體，抗體將致病菌包裹，在熒光鏡下觀察用熒光素標記的抗人體蛋白抗體處理的尿細菌，若表面有熒光抗體包裹則大多屬腎盂腎炎，膀胱炎為黏膜淺表感染，故細菌表面無熒光抗體包裹。用ACB法有助於上、下尿路感染的定位診斷。但在前列腺炎患者，其ACB試驗亦呈陽性，應注意鑒別。其他：另外還有過氧化物酶試驗、葡萄糖氧化酶試驗、鱟試驗及尿氧壓測定均可幫助診斷尿路感染，但目前臨床上應用較少。
『叄』 菌種鑒定的方法
傳統方法細菌做革蘭氏染色 運動性試驗 各種代謝 然後查伯傑氏細菌手冊；用分子做的話提總DNA，pcr擴增16srDNA全長片段，上NCBI資料庫比對，選擇近緣序列構建系統發育樹鑒定。
真菌的話主要根據形態，特別是有性型生殖形態鑒定；分子的話一般擴增ITS區域，比對，建樹鑒定。
『肆』 病原微生物中細菌常見檢測方法有哪些
傳統檢測有三種方法1、直接顯微鏡觀察，正常情況，在一定的培養條件下（相同的培養基、溫度以及培養時間），同種微生物表現出穩定的菌落特徵。可以通過顯微鏡觀察菌落特徵對微生物種類進行判斷。
2、選擇培養基培養微生物或人為提供有利於目的菌株生長的條件，選擇培養基，其作用是允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他微生物生長。選擇培養一般是通過觀察微生物的同化作用類型或某一特徵進行間接判斷，得到的微生物往往並不只有一種，但是能夠大致確定這些微生物存在的共有特徵從而對其分類。
3、鑒別培養基，根據微生物的代謝特點，在培養基中加入某種指示劑或化學葯品。與選擇培養相比，鑒別培養基的鑒別所得結果的范圍比較小，一般可直接測定某微生物的種類。
現代定義
微生物：個體難以用肉眼觀察的一切微小生物之統稱。微生物包括細菌、病毒、真菌、和少數藻類等。（但有些微生物是肉眼可以看見的，像屬於真菌的蘑菇、靈芝等。）病毒是一類由核酸和蛋白質等少數幾種成分組成的「非細胞生物」，但是它的生存必須依賴於活細胞。根據存在的不同環境分為空間微生物、海洋微生物等，按照細胞機構分類分為原核微生物和真核微生物。
主要特徵
1、體小面大2、吸多轉快3、生長繁殖快
微生物的這一特性使其在工業上有廣泛的應用，如發酵、單細胞蛋白等。微生物是人類不可或缺的好朋友。
『伍』 細菌的鑒定有哪些
細菌的鑒定有哪些：
實驗室使用常用的培養方法通常可以識別常見細菌的典型菌株。然而，當資料庫中沒有非典型菌株或稀有或新出現的細菌時的確會出現問題。
細菌培養往往是通過形態特徵以及生長特徵分辨細菌，進一步的鑒定還包括：
生化鑒定：主要是藉助細菌對營養物質分解能力的不同及其代謝產物的差異對細菌進行鑒定，包括蛋白質分解產物試驗、觸酶試驗、糖分解產物試驗、氧化酶試驗、凝固酶試驗等。
血清學鑒定：適用於含較多血清型的細菌，用已知抗體檢測未知抗原(待檢測的細菌)，或用已知抗原檢測患者血清中的相應抗細菌抗體及其效價。血清學鑒定操作簡單快速，特異性高，可在生化鑒定基礎上為細菌鑒定提供確定診斷。
分子生物學檢測：適用於人工培養基不能生長、生長緩慢及營養要求高不易培養的細菌，主要是對基因、蛋白質、細胞及其他生物進行大信息量分析的檢測技術。16S rRNA 基因序列分析法逐漸成為臨床細菌鑒定、分離的金標准。
免疫學鑒定：通過 ELISA 的方法進行細菌檢測。這種方法度敏感高，但它依賴於非常特異的抗體和高度區分的蛋白質。
質譜分析：通常使用氣相色譜法和質譜法的組合對脂肪酸進行分析。脂肪酸在細菌細胞膜中是必不可少的，不同的細菌種類會產生不同的脂肪酸組合。 該脂肪酸譜可用於通過與已知譜匹配來確定未鑒定的細菌種類。
『陸』 病原微生物中細菌常見檢測方法有哪些
1、快速測試片技術法
快速測試片是指以紙片、紙膜、膠片等作為培養基載體，將特定的培養基和顯色物質附著在上面，通過微生物在上面的生長、顯色來測定食品中微生物的方法。
細菌總數檢測紙片的研製始於 20 世紀 80 年代，其主要優點是簡便、實用、經濟、操作性強。近年來以濾紙和美國某公司的 Petrifilm 為載體的測試片已開始被廣泛應用。
2、生物電化學方法
生物電化學方法是指通過電極測定微生物產生或消耗的電荷，從而提供分析信號的方法。微生物在滋生代謝過程中，培養基的電化學性質如電流、電位、電阻和電導等會發生變化，所以可以通過檢測分析這些電化學參量的變化來實現對微生物的快速測定。
常見的有：阻抗分析法、電位分析法、電流分析法等。生物電化學方法具有測量快速、直觀、操作簡單、測量設備成本低和信號的可控性等特點。
3、微菌落技術
微菌落是指細菌生長繁殖早期在固相載體上所形成的只能藉助於顯微鏡觀察的微小菌落。微菌落技術具有快速、經濟、實用的特點，其研究始於 20 世紀50年代，定量測定技術從 20 世紀 70 年代開始，國外已有報道將該法應用於水、食品中細菌總數的快速檢測。
4、氣相色譜法
氣相色譜應用到微生物的檢測中，主要是依據不同微生物的化學組成或其產生的代謝產物各異，利用上述色譜檢測可直接分析各種體液中的細菌代謝產物、細胞中的脂肪酸、蛋白質、氨基酸、多肽、多糖等，以確定病原微生物的特異性化學標志成分，協助病原診斷和檢測。
5、高效液相色譜法
利用高效液相色譜檢測可分析各種體液中的細菌代謝產物、病原微生物等，以確定病原微生物的特異性化學標志成分，協助病原診斷和檢測。
『柒』 細菌鑒定辦法有哪些, 常見細菌的鑒定辦法就可以~
一 澱粉水解試驗
（一）實驗原理
細菌對大分子的澱粉、蛋白質和脂肪不能直接利用,必須靠產生的胞外酶,如澱粉酶、蛋白酶和脂肪酶將大分子物質分解.胞外酶能分泌擴散到細胞外,將物質分解成小單位如糖、氨基酸、甘油與脂肪酸.這些小單位的物質能被細菌吸收和利用.水解過程可通過底物的變化來證明,如細菌水解澱粉的區域,用碘測定不再產生藍色；水解明膠可觀察到明膠被液化；脂肪水解後產生脂肪酸改變培養基的pH,其中的中性紅指示劑使培養基從淡紅色變為深紅色.
（二）實驗方法
將澱粉培養基溶化後,冷至45℃左右,以無菌操作製成平板.
取18-24h的純培養物點於平板上,每皿可點種3-5個菌株,適溫培養2-4d,形成菌落後,在平板上滴加盧戈氏碘液,以鋪滿菌落周圍為度,平板成藍色.如果菌落周圍有無色透明圈出現,說明澱粉已經被水解,實驗為陽性,否則為陰性.透明圈的大小一般說明水解澱粉的能力.
（三）實驗試劑的配製
肉湯蛋白腖瓊脂成分：蛋白腖10g,牛肉膏3g,氯化鈉5g,瓊脂17g,蒸餾水1000mL,pH7.2.
澱粉培養基製法：在肉湯蛋白腖瓊脂中添加0.2％的可溶性澱粉,校正pH值至7.6,分裝三角瓶,121℃ 20min滅菌備用.
盧戈氏(Lugol)碘液：碘片1g,碘化鉀2g,蒸餾水300ml,先將碘化鉀溶解在少量水中,再將碘片溶解在碘化鉀溶液中,混勻,定容.
二 糖發酵試驗
(一)實驗原理
單糖發酵是將葡萄糖,乳糖或麥芽糖等分別加入蛋白腖水培養基內,使其最終濃度為0.75-1％.並加入一定量酚紅指示劑及小倒管,製成單糖發酵管,接種細菌經37℃培養18-24小時,若能分解糖產酸則酚紅指示劑由紅變黃,若能分解甲酸有CO2和H2等氣體形成,小倒管內則聚集有氣泡；不分解,則指示劑不變色.
(二)實驗材料
1．菌種：大腸桿菌,傷寒桿菌18-24小時瓊脂斜面培養物.
2．培養基：葡萄糖發酵管,乳糖發酵管等.
(三)實驗方法
1．將傷寒桿菌,大腸桿菌按照液體接種方法分別接種於葡萄糖及乳糖發酵管內.
2．置37℃孵箱培養18-24小時.
3．觀察結果：由於一些細菌能分解某種糖類產酸,所以培養基中pH下降到7.0以下,在酚紅指示劑的顯示下,培養基顏色由紅變黃.產酸者以「+」表示,如果同時產生氣體,則培養基中小倒管內有氣泡出現,此乃產酸又產氣,以「♁」表示,不分解,則指示劑不變色,用「-」表示.
(四)實驗結果
傷寒桿菌 大腸桿菌
葡萄糖 + ♁
乳 糖 - ♁
(五)實驗試劑的配製
1.單糖發酵管的制備： 成分：蛋白腖水培養基 100ml ,0.2%酚紅 1ml ,所需糖（葡萄糖或乳糖）0.75-1g
製法：
（1）將上述成分溶化,混勻分裝於內含有倒置小玻璃管的小試管中,每管約2ml,加塞.
（2）小倒管排氣,滅菌（8-10磅,20-30分鍾）,貯存備用.
用途：供單糖發酵試驗用.
2.0.2%酚紅配製法
酚紅（phenol red）0.2g ,0.lmol/LNaOH 8ml ,蒸餾水 92ml
將酚紅入研缽徐徐加入0.lmol/LNaOH研磨,再補足蒸餾水即成.若需長時間保存,可高壓滅菌後貯存備用.
三 甲基紅（M.R）試驗
(一)實驗原理
某些細菌如大腸桿菌等分解葡萄糖產生丙酮酸,繼而分解為甲酸、乙酸、乳酸等,使培養基pH值降至4.5以下,加入甲基紅指示劑呈紅色,此為陽性反應；若產酸量少或產生的酸進一步轉化為醇、醛、氣體和水等,則培養基的酸鹼度仍在pH 6.2以上,加入甲基紅指示劑呈現黃色,為陰性反應.
(二)實驗材料
1. 菌種：大腸桿菌,產氣桿菌18-24h瓊脂斜面培養物.
2. 培養基：葡萄糖蛋白腖水培養基.
3. 試劑：甲基紅試劑.
(三)實驗方法
1. 分別將大腸桿菌,產氣桿菌接種於兩支葡萄糖蛋白腖水培養基中.
2. 置37℃培養2-3天取出,分別滴加甲基紅試劑2-3滴,混勻,觀察結果.
(四)實驗結果
大腸桿菌：+,產氣桿菌：-.
(五)實驗試劑的配製
1．甲基紅試劑的配製
甲基紅 0.04g, 95%酒精 60ml , 蒸餾水 40ml .
先使甲基紅溶解於酒精中,再加入蒸餾水,混合,搖勻即成.
2.葡萄糖蛋白腖水培養物
成分：蛋白腖5g 葡萄糖5g
製法：
（1）將上述成分溶解於蒸餾水中.
（2）調節pH至7.6,用濾紙過濾除渣.
（3）分裝中試管,每管約3-4ml,滅菌後備用.
用途：供甲基紅及V-P試驗用.
四 產吲哚（indole）試驗
(一)實驗原理
某些細菌如大腸桿菌,變形桿菌等具有色氨酸酶,能分解蛋白腖水培養基中的色氨酸,產生靛基質（無色吲哚）,再與歐立希試劑（對二甲基氨基苯甲醛）反應,形成紅色化合物—玫瑰吲哚,即為陽性反應.
(二)實驗材料
1. 菌種：大腸桿菌,傷寒桿菌18-24小時瓊脂斜面培養物.
2. 培養基：蛋白腖水培養基.
3. 試劑,歐立希（Ehrlich）試劑（對二甲基氨基苯甲醛）
(三)實驗方法
1. 分別將大腸桿菌,傷寒桿菌接種於兩支蛋白腖水培養基中.
2. 置37℃培養2-3天後,每管沿管壁各加歐立希試劑0.5-1ml於培養液面上,待1-2分鍾後觀察結果：在交界面出現玫瑰紅色環即為吲哚試驗陽性,無紅色環即為陰性.
(四)實驗結果
大腸桿菌：+ ；傷寒桿菌：- .
(五)實驗試劑的配製
1.蛋白腖水培養基的制備
成分：蛋白腖10g 氯化鈉5g 蒸餾水1000ml
製法：
（1）先用少量蒸餾水將蛋白腖和氯化鈉相混合溶解,再加足蒸餾水量.
（2）調節pH至7.6、用濾紙過濾.
（3）分裝中試管,每管約3-4ml,加塞滅菌後備用.
2. 歐立希（Ehrlich）試劑的配製
對位二甲基氨基苯甲醛 4g
95%酒精 380ml
濃硫酸或濃鹽酸80ml
三種成分混合即成,瓶口要嚴密,以免揮發.
五 硝酸鹽還原試驗
(一)硝酸鹽還原試驗原理：
硝酸鹽還原反應包括兩個過程：一是在合成過程中,硝酸鹽還原為亞硝酸鹽和氨,再由氨轉化為氨基酸和細胞內其他含氮化合物；二是在分解代謝過程中,硝酸鹽或亞硝酸鹽代替氧作為呼吸酶系統中的終末受氫體.能使硝酸鹽還原的細菌從硝酸鹽中獲得氧而形成亞硝酸鹽和其他還原性產物.但硝酸鹽還原的過程因細菌不同而異,有的細菌僅使硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,如大腸埃希菌；有的細菌則可使其還原為亞硝酸鹽和離子態的銨；有的細菌能使硝酸鹽或亞硝酸鹽還原為氮,如假單胞菌等.硝酸鹽還原試驗系測定還原過程中所產生的亞硝酸鹽.
(二)培養基：
硝酸鹽培養基.
(三)試劑：
甲液（對氨基苯磺酸0.8g+5mol/L醋酸100ml）；乙液（α-奈胺0.5g + 5mol/L醋酸100ml）.
(四)方法：
被檢菌接種於硝酸鹽培養基中,於35℃培養1～4d.將甲、乙液等量混合後（約0.1ml）加入培養基內,立即觀察結果.
(五)結果：
出現紅色為陽性.若加入試劑後無顏色反應,可能是：①硝酸鹽沒有被還原,試驗陰性；②硝酸鹽被還原為氨和氮等其他產物而導致假陰性結果,這時應在試管內加入少許鋅粉,如出現紅色則表明試驗確實為陰性.若仍不產生紅色,表示試驗為假陰性.
若要檢查是否有氮氣產生,可在培養基管內加一小倒管,如有氣泡產生,表示有氮氣生成.
(六)應用：
本試驗在細菌鑒定中廣泛應用.腸桿菌科細菌均能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽；銅綠假單胞菌、嗜麥芽窄食單胞菌等假單胞菌可產生氮氣；有些厭氧菌如韋榮球菌等試驗也為陽性.
(七)實驗試劑的配製
硝酸鹽液體培養基
蛋白腖5.0g,KNO3 0.2g, 蒸餾水1000 mL,pH7.4,每管分裝4-5mL,121℃滅菌15-20min.
六 產氨實驗（尿素分解實驗）
(一)實驗原理
某些細菌如變形桿菌,具有尿素分解酶,能分解尿素而產生氨,氨溶於水變成氫氧化銨,使培養基變鹼而呈紅色即為陽性.
(二) 實驗材料
1. 菌種：變形桿菌,傷寒桿菌18-24小時瓊脂斜面培養物.
2. 培養基：尿素培養基.
(三) 實驗方法
1. 分別以斜面接種法將變形桿菌,傷寒桿菌接種於兩支尿素斜面培養基上.
2. 置37℃培養18-24小時.
3. 取出觀察結果,培養基變為紅色,即尿素分解試驗陽性,若不變色,即為尿素分解試驗陰性.
(四) 實驗結果
變形桿菌：+ ；傷寒桿菌：- .
(五) 實驗試劑的配製
1.尿素培養基的制備
成分： 蛋白腖1g 、氯化鈉5g、葡萄糖1g、蒸餾水900ml、瓊脂15-20g 、0.1%酚紅 12ml 、20%尿素水溶液（無菌）100ml .
製法：（1）除尿素、瓊脂和酚紅外,其餘成分溶於水中,加熱溶化,矯正pH至6.8-6.9.
（2）加入瓊脂和酚紅,115℃磅滅菌10min.
（3）冷卻至60℃後加入無菌尿素溶液,搖勻.
（4）分裝中試管（無菌）,每管3-4ml,置成斜面備用.
說明：（1）尿素不耐熱,也不能久存,只能用濾器除菌.
2.無菌尿素溶液制備：稱取尿素20g,混合於100ml蒸餾水中,充分搖勻,用G6濾菌器過濾除菌,以達到無菌的目的.
七 檸檬酸鹽利用試驗
(一)實驗原理
本試驗用於檢測細菌利用檸檬酸的能力.細菌利用檸檬酸鹽的能力不同,如各種腸細菌可利用檸檬酸為碳源,而大腸埃希氏菌則不利用檸檬酸鹽.因此,能否利用檸檬酸鹽是一項鑒別性特徵.培養基中含有檸檬酸鈉時,如將檸檬酸分解為CO2,則培養基中由於有游離鈉離子呈鹼性,使培養基中酚紅指示劑（pH6.8-8.4,黃→紅）由淡粉紅色變為玫瑰紅色以識別之.
(二)材料
檸檬酸鈉 2g、K2HPO4 1g、NH3H2PO4 1g、NaCl 5g、MgSO4 0.2g、瓊脂 1.5 2g、1%溴麝香草酚藍(酒精溶液)或0.04%苯酚紅 10ml、水 1000ml
將上述各成分加熱溶解後,調PH6.8,然後加入酚紅指示劑,搖勻,用脫脂棉過濾.製成後為黃綠色,分裝試管.121℃滅菌20min後製成斜面.
(三) 實驗內容
1.將試驗菌在斜面上劃線接種,適溫培養3-5天.
2.若該菌能利用檸檬酸鹽,則可在此斜面上生長並將培養基由原來的淡粉紅色變為玫瑰紅色,此為陽性；顏色不變者為陰性.
八 油脂水解試驗
(一)原理
某些細菌能夠分泌脂肪酶（胞外酶）,能將培養基中的脂肪水解為甘油和脂肪酸.所產生的脂肪酸,可通過預先加入油脂培養基中的中性紅加以指示[指示範圍pH6.8（紅）～pH8.0（黃）].當細菌分解脂肪產生脂肪酸時,培養基中出現紅色斑點.
(二)實驗內容
1.將裝有油脂培養基的錐形瓶置於沸水浴中融化,取出並充分振盪（使油脂均勻分布）,再傾入培養皿中,待凝固後製成平板.
2.翻轉平板使底皿背面向上,用記號筆在其背面玻璃上劃成兩半.一半用於接種金黃色葡萄球菌作為陽性對照菌,另一半用於接種實驗菌大腸桿菌或產氣腸桿菌.接種時用接種環取少量菌在平板兩邊各劃線接種.
3.將接種完的平板倒置於37℃恆溫箱中,培養24h.
4.觀察結果時,注意觀察平板上長菌的地方,如出現紅色斑點,即說明脂肪已被水解,此為陽性反應.
（三）培養基配製
油脂培養基：蛋白腖10g,牛肉膏5g,氯化鈉5g,香油或花生油10g,中性紅（1.6%水溶液）約0.1ml,瓊脂15-20g,蒸餾水1000mL,pH7.2,121℃滅菌20min.
九 接觸酶試驗
(一)實驗原理
本試驗用於檢測細菌是否具有接觸酶活性.接觸酶又稱為過氧化氫酶,是一種以正鐵血紅素作為輔基的酶,能將過氧化氫分解為水和氧.一般好氧細菌與兼性厭氧細菌（除某些鏈球菌、乳酸桿菌等外）都能產生接觸酶,而厭氧細菌不產生接觸酶,這是用以區別好氧和厭氧菌的方法之一.
(二)材料
牛肉膏、蛋白腖瓊脂培養基,3%過氧化氫.
牛肉膏、蛋白腖瓊脂培養基：牛肉膏 0.3g、蛋白腖 1g、氯化鈉 0.5g、瓊脂 2g、自來水 100mL、pH 7.0～7.2 、滅菌.
(三)實驗內容
1.接種試驗菌,適溫下培養18-24小時.
2.將3%的過氧化氫滴於斜面菌苔上（或塗有菌苔的載玻片上）,靜置1-3分鍾後,如有氣泡產生即為陽性.不產生氣泡者為陰性.
(四) 應用
革蘭陽性球菌中,葡萄球菌和微球菌均產生過氧化氫酶,而鏈球菌屬為陰性,故此試驗常用於革蘭陽性球菌的初步分群.
十 革蘭氏染色
(一)實驗原理
革蘭氏染色法是細菌學中廣泛使用的一種鑒別染色法.通過結晶紫初染和碘液媒染後,在細胞壁內形成了不溶於水的結晶紫與碘的復合物,革蘭氏陽性菌由於其細胞壁較厚、肽聚糖網層次較多且交聯緻密,故遇乙醇或丙酮脫色處理時,因失水反而使網孔縮小,再加上它不含類脂,故乙醇處理不會出現縫隙,因此能把結晶紫與碘復合物牢牢留在壁內,使其仍呈紫色；而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯度差,在遇脫色劑後,以類脂為主的外膜迅速溶解,薄而鬆散的肽聚糖網不能阻擋結晶紫與碘復合物的溶出,因此通過乙醇脫色後仍呈無色,再經沙黃等紅色染料復染,就使革蘭氏陰性菌呈紅色.
(二)實驗方法
革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟,具體操作方法是：
1.塗片固定.
2.草酸銨結晶紫染1分鍾.
3.自來水沖洗.
4.加碘液覆蓋塗面染約1分鍾.
5.水洗,用吸水紙吸去水分.
6.加95%酒精數滴,並輕輕搖動進行脫色,20秒後水洗,吸去水分.
7.蕃紅梁色液（稀）染2分鍾後,自來水沖洗.乾燥,鏡檢.
[染色的結果]：革蘭氏正反應菌體都呈紫色,負反應菌體都呈紅色.
(三)應用
其重要的臨床意義在於：1.鑒別細菌 2.選擇葯物 3.與致病性有關：：革蘭氏陽性菌能產生外毒素,革蘭氏陰性菌能產生內毒素,兩者的致病作用不同.
『捌』 細菌分子鑒定的方法有哪些
一般從DNA、RNA和蛋白質這三個方面鑒定。將三種物質分別提取出來，各自進行鑒定。鑒定的方法可以用你提到的這些。
1.核酸雜交：簡單的說，就是將需檢測的核酸與標記的分子結合使得未知核酸可以被檢測到。
2.脈沖場凝膠電泳：利用電場讓不同大小的帶電DNA分子以不同的速度移動，從而將不同大小的分子分開。可分離10kb--10mb的DNA分子。
3.16S rRNA :16S rRNA所對應的 16S rDNA基因在微生物基因組中具有高度保守性；對16S rDNA而言，如果出現3個鹼基以上的差異就可以斷定細菌不屬於同一種屬。它具有高度的靈敏性，而且不需要培養，檢測指標也很單一。可以快速檢測未知微生物或致病微生物。
4.RAPD：對整個未知序列的基因組進行多態性分析的分子技術。先進行PCR擴增，然後電泳分離染色，在紫外透視儀上檢測多態性。
5.質粒質譜分析法：我只了解過蛋白質的質譜分析技術，質粒的沒有了解過。
蛋白質：將蛋白質酶解成小肽段並混合基質，用激光將呈離子化氣體狀態的待測物噴射，經電場到達檢測器，根據到達的時間分析肽段的分子質量。
『玖』 測定微生物的生長有哪些方法各有何優缺點
常用測定微生物生長的方法有：
1)稱乾重法.可用離心法或過濾法測定.
優點：可適用於一切微生物,
缺點：無法區別死菌和活菌.
2)比濁法.
原理：由於微生物在液體培養時,原生質的增加導致混濁度的增加,可用分光光度計測定.
優點：比較准確.
3)測含氮量,
大多數微生物的含氮量占乾重的比例較一致,根據含氮量再乘以6.25即可測得其粗蛋白的含量.
4)血球計數板法.
優點：簡便、快速、直觀.
缺點：結果包括死菌和活菌.
5)液體稀釋法.
對未知菌樣作連續的10倍系列稀釋,經培養後,記錄每個稀釋度出現生長的試管數,然後查MPN表,再根據樣品的稀釋倍數就可計算其中的活菌含量.
優點：可計算活菌數,較准確.
缺點：比較繁瑣.
6)平板菌落計數法.
取一定體積的稀釋菌液塗布在合適的固體培養基,經培養後計算原菌液的含菌數.
優點,可以獲得活菌的信息.
缺點：操作繁瑣,需要培養一定時間才能獲得,測定結果受多種因素的影響.
『拾』 測定微生物的生長有哪些方法各有何優缺點
常用測定微生物生長的方法有：
1)稱乾重法.可用離心法或過濾法測定.
優點：可適用於一切微生物,
缺點：無法區別死菌和活菌.
2)比濁法.
原理：由於微生物在液體培養時,原生質的增加導致混濁度的增加,可用分光光度計測定.
優點：比較准確.
3)測含氮量,
大多數微生物的含氮量占乾重的比例較一致,根據含氮量再乘以6.25即可測得其粗蛋白的含量.
4)血球計數板法.
優點：簡便、快速、直觀.
缺點：結果包括死菌和活菌.
5)液體稀釋法.
對未知菌樣作連續的10倍系列稀釋,經培養後,記錄每個稀釋度出現生長的試管數,然後查MPN表,再根據樣品的稀釋倍數就可計算其中的活菌含量.
優點：可計算活菌數,較准確.
缺點：比較繁瑣.
6)平板菌落計數法.
取一定體積的稀釋菌液塗布在合適的固體培養基,經培養後計算原菌液的含菌數.
優點,可以獲得活菌的信息.
缺點：操作繁瑣,需要培養一定時間才能獲得,測定結果受多種因素的影響.
