⑴ 植物dna提取的原理和方法其中乙醇和氯仿一異成醇各起什麼作用
植物DNA提取方法是採用CTAB法。
CTAB，是一種陽離子去污劑,能與核酸形成復合物,此復合物在高鹽(>0.7mol/L) 濃度下可溶,並穩定存在,但在低鹽濃度(0.1～0.5mol/L NaCl)下CTAB-核酸復合物就因溶解度降低而沉澱,而大部分的蛋白質及多糖等仍溶解於溶液中。通過有機溶劑抽提,去除蛋白、多糖、酚類等雜質後加入乙醇沉澱即可使核酸分離出來。經離心棄上清後,CTAB-核酸復合物再用70%酒精浸泡可洗脫掉CTAB。
無水乙醇：沉澱DNA。乙醇的優點是可以任意比和水相混溶，乙醇與核酸不會起任何化學反應，對DNA很安全，因此是理想的沉澱劑。 DNA溶液是DNA以水合狀態穩定存在，當加入乙醇時，乙醇會奪去DNA周圍的水分子，使DNA失水而易於聚合。
氯仿：克服酚的缺點；加速有機相與液相分層。
異戊醇：減少蛋白質變性操作過程中產生的氣泡。異戊醇可以降低表面張力，從而減少氣泡產生。另外，異戊醇有助於分相，使離心後的上層含DNA的水相、中間的變性蛋白相及下層有機溶劑相維持穩定。
⑵ 植物DNA提取的原理和方法是什麼
原理就是去掉植物細胞壁
細胞膜
質體
線粒體
葉綠體
剩下細胞核了。就是DNA了。
通常採用機械研磨的方法破碎植物的組織和細胞，由於植物細胞勻漿含有多種酶類(尤其是氧化酶類)對DNA的抽提產生不利的影響，在抽提緩沖液中需加入抗氧化劑或強還原劑(如巰基乙醇)以降低這些酶類的活性。在液氮中研磨，材料易於破碎，並減少研磨過程中各種酶類的作用。
十二烷基肌酸鈉(sarkosyl)、十六烷基三甲基溴化銨(hexadyltrimethyl
ammomum
bromide，簡稱為CTAB)、十二烷基硫酸鈉(sodium
dodecyl
sulfate，簡稱SDS)等離子型表面活性劑，能溶解細胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，從而使DNA得以游離出來。再加入苯酚和氯仿等有機溶劑，能使蛋白質變性，並使抽提液分相，因核酸(DNA、RNA)水溶性很強，經離心後即可從抽提液中除去細胞碎片和大部分蛋白質。上清液中加入無水乙醇使DNA沉澱，沉澱DNA溶於TE溶液中，即得植物總DNA溶液
⑶ 植物DNA提取
原理是一致的。方法不同。
1
植物組織
提取基因組DNA
一、材料
幼嫩葉子。
二、設備
移液器
，
冷凍高速離心機
，
台式高速離心機
，
水浴鍋
，陶瓷
研缽
，50ml
離心管
（有蓋）及5ml和1.5ml離心管，彎成鉤狀的小
玻棒
。
三、試劑
1、提取
緩沖液
Ⅰ：100mmol/L
Tris·Cl,
pH8.0,
20mmol/L
EDTA,
500mmol/L
NaCl,
1.5%
SDS。
2、提取緩沖液Ⅱ：18.6g葡萄糖，6.9g
二乙基二硫
代
碳酸鈉
，6.0gPVP，240ul
巰基乙醇
，加水至300ml。
3、80:4:16/氯仿:
戊醇
:乙醇
4、
RnaseA
母液
5、其它試劑：
液氮
、
異丙醇
、
TE緩沖液
，
無水乙醇
、70%乙醇、3mol/L
NaAc。
四、操作步驟：
1.
在50ml離心管中加入20ml提取緩沖液Ⅰ,
60℃水浴預熱。
2.
幼苗或葉子5-10g,
剪碎,
在研缽中加液氮磨成粉狀後立即倒入預熱的離心管中,
劇烈搖動混勻,
60℃水浴保溫30-60分鍾(時間長,DNA產量高),
不時搖動。
3.
加入20ml氯仿/戊醇/
乙醇溶液
,
顛倒混勻(需帶手套,
防止損傷皮膚)，室溫下靜置5-10分鍾,
使水相和
有機相
分層(必要時可重新混勻)。
4.
室溫下5000rpm離心5分鍾。
5.
仔細移取
上清液
至另一50ml離心管,加入1倍體積異丙醇,混勻,室溫放置片刻即出現絮狀DNA沉澱。
6.
在1.5ml
eppendorf
中加入1ml
TE。用鉤狀
玻璃棒
撈出DNA絮團,在干凈吸水紙上吸干,轉入含TE的離心管中,DNA很快溶解於TE。
7.
如DNA不形成絮狀沉澱,則可用5000rpm離心5分鍾,
再將沉澱移入TE管中。這樣收集的沉澱,往往難溶解於TE,可在60℃水浴放置15分鍾以上，以幫助溶解。
8.
將DNA溶液
3000rpm
離心5分鍾,
上清液倒入干凈的5ml離心管。
9.
加入5μl
RNaseA(10μg/μl),
37℃
10分鍾,
除去RNA(RNA對DNA的操作、分析一般無影響，可省略該步驟）。
10.
加入1/10體積的3mol/L
NaAc及2×體積的冰乙醇,混勻,-20℃放置20分鍾左右,DNA形成絮狀沉澱。
11.
用玻棒撈出DNA沉澱,70%乙醇漂洗,再在干凈吸水紙上吸干。
12.
將DNA重溶解於1ml
TE,
-20貯存。
13.
取2μl
DNA樣品在0.7%
Agarose膠上電泳,
檢測DNA的
分子大小
。同時取15μl稀釋20倍,
測定OD260/OD280,
檢測DNA含量及質量。
[注意]
5g樣品可保證獲得500μg
DNA,
足供RFLP、PCR等分析之用。
⑷ 粗提取植物DNA的實驗步驟和原理
提取植物DNA常用的方法是CTAB法。原理：CTAB是一種陽離子去污劑,具有從低離子強度溶液中沉澱核酸與酸性多聚糖的特性。在高離子強度的溶液中(>0.7mol/L NaCl)，CTAB與蛋白質和多聚糖形成復合物，只是不能沉澱核酸。通過有機溶劑抽提，去除蛋白，多糖，酚類等雜質後加入乙醇沉澱即可使核酸分離出來。步驟如下：
1）取材料，加液氮研磨成粉末狀，迅速移入1.5 ml Eppendorf管中；
（2）加入800 μl的CTAB提取緩沖液，混勻（CTAB在65℃水浴預熱），每5min輕輕震盪幾次，20min後12000 r/min，離心15 min；
（3）小心吸取上清液，加入等體積的酚：氯仿（各400μl）溶液，混勻，4℃，12000 r/min，離心10 min；
（4）小心吸取上清液，加入等體積的氯仿，混勻，4℃，12000 r/min，離心10 min。
（5）重復步驟（4）1-2次，以蛋白層不出現為止；
（6）取上清，-20℃沉澱1h，4℃，12000 r/min，離心10 min；
（7）棄去上清液，用70%乙醇洗滌沉澱2次；
（8）室溫下乾燥後（一般乾燥5-15 min），溶於30-50 μl DEPC去離子水中，於-20℃或者-70℃下保存備用。
⑸ 植物DNA提取的原理和方法是什麼
原理就是去掉植物細胞壁
細胞膜
質體
線粒體
葉綠體
剩下細胞核了。就是DNA了。
通常採用機械研磨的方法破碎植物的組織和細胞，由於植物細胞勻漿含有多種酶類(尤其是氧化酶類)對DNA的抽提產生不利的影響，在抽提緩沖液中需加入抗氧化劑或強還原劑(如巰基乙醇)以降低這些酶類的活性。在液氮中研磨，材料易於破碎，並減少研磨過程中各種酶類的作用。
十二烷基肌酸鈉(sarkosyl)、十六烷基三甲基溴化銨(hexadyltrimethyl
ammomum
bromide，簡稱為CTAB)、十二烷基硫酸鈉(sodium
dodecyl
sulfate，簡稱SDS)等離子型表面活性劑，能溶解細胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，從而使DNA得以游離出來。再加入苯酚和氯仿等有機溶劑，能使蛋白質變性，並使抽提液分相，因核酸(DNA、RNA)水溶性很強，經離心後即可從抽提液中除去細胞碎片和大部分蛋白質。上清液中加入無水乙醇使DNA沉澱，沉澱DNA溶於TE溶液中，即得植物總DNA溶液
⑹ 植物DNA的提取方法
博凌科為新型快速
植物
基因組
DNA提取試劑盒
改進的CTAB植物DNA抽提液（添加多種針對植物
特點
的
多糖
、多酚去除成份）迅速裂解細胞和滅活細胞內
核酸酶
，氯仿抽提後通過離心清除多糖、多酚和
蛋白質
，
上清
加入異丙醇離心
沉澱
基因組DNA，進一步去除其它各種
雜質
，然後基因組DNA在高離序鹽狀態下選擇性吸附於離心柱內硅基
質膜
，再通過一系列快速的漂洗－離心步驟,
進一步將多糖，多酚和細胞
代謝物
，蛋白等雜質去除，
最後低鹽的洗脫
緩沖液
將基因組DNA從硅基質膜上洗脫。
試劑盒特點:
◆
離心吸附柱內硅基質膜全部採用進口特製
吸附膜
，柱與柱之間
吸附量
差異極小，
可重復性
好。克服了國產
試劑盒
膜質量不穩定的弊端。
◆
不需要使用有毒的
苯酚
，氯仿等試劑。
◆
快速，簡捷，單個
樣品
操作一般可在1小時內完成。
⑺ 請教植物DNA提取
專用簡單方法：1、將小指甲大小葉片用液氮快速磨碎。2、快速加入專用DNA提取液，用移液槍吸打幾下後將液體吸入1.5MLEP管內。3、離心12000R，10min。4、將上清液吸入1.5MLEP管內，加入異丙醇，上下顛倒。5、離心12000R，10min。6、倒掉上清液，乾燥DNA。7、將DNA溶於60uLDDH2O -20℃保存。
優點：快速、方便、無毒。
⑻ 求幾種植物總DNA抽提方法和優缺點
1、植物DNA的CTAB提取法：經典方法。效果較好，污染少。多用於核基因組提取。
2、SDS提取法：較為簡易，提取的為全基因組，但有蛋白污染可能。
3、簡易「一管法」提取方法：
4、PCR研究的快速提取法：以上兩者方法簡單，快速，但污染多，不適合做酶切等操作。
5、酚類、多糖類物質較多的植物DNA提取法：多酚多糖去除效果好，但操作步驟較多。
⑼ 如何從植物組織中提取基因組dna
不同生物（植物、動物、微生物）的基因組DNA的提取方法有所不同; 不同種類或同一種類的不同組織因其細胞結構及所含的成分不同，分離方法也有差
異。在提取某種特殊組織的DNA時必須參照文獻和經驗建立相應的提取方法, 以獲得可用的DNA大分子。尤其是組織中的多糖和酶類物質對隨後的酶切、PCR反應等有較強的抑製作用,因此用富含這類物質的材料提取基因組DNA時, 應考慮除去多糖和酚類物質。
本實驗以水稻幼苗為材料,學習基因組DNA提取的一般方法。
DNA
一、材料
水稻幼苗
二、設備
移液器，冷凍高速離心機，台式高速離心機，水浴鍋，陶瓷研缽，50ml離 心管（有蓋）及5ml和1.5ml離心管，彎成鉤狀的小玻棒。
三、試劑
1、提取緩沖液?：100mmol/L Tris?Cl, pH8.0, 20mmol/L EDTA, 500mmol/L
NaCl, 1.5% SDS。
2、提取緩沖液?：18.6g葡萄糖，6.9g二乙基二硫代碳酸鈉，6.0gPVP，240ul巰基乙醇，加水至300ml。
3、80:4:16/氯仿:戊醇:乙醇
4、 RnaseA母液：配方見第一章。
5、其它試劑：液氮、異丙醇、TE緩沖液，無水乙醇、70%乙醇、3mol/L NaAc。
四、操作步驟：
（一）水稻幼苗或其它禾木科植物基因組DNA提取
1. 在50ml離心管中加入20ml提取緩沖液?, 60?水浴預熱。
2. 水稻幼苗或葉子5-10g, 剪碎, 在研缽中加液氮磨成粉狀後立即倒入預熱
的離心管中, 劇烈搖動混勻, 60?水浴保溫30-60分鍾(時間長,DNA產量高), 不時搖動。
3. 加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液, 顛倒混勻(需帶手套, 防止損傷皮膚)，室溫下靜置5-10分鍾, 使水相和有機相分層(必要時可重新混勻)。
4. 室溫下5000rpm離心5分鍾。
5. 仔細移取上清液至另一50ml離心管,加入1倍體積異丙醇,混勻,室溫下放置片刻即出現絮狀DNA沉澱。
6. 在1.5ml eppendorf中加入1ml TE。用鉤狀玻璃棒撈出DNA絮團,在干凈吸水紙上吸干,轉入含TE的離心管中,DNA很快溶解於TE。
7. 如DNA不形成絮狀沉澱,則可用5000rpm離心5分鍾, 再將沉澱移入TE管中。這樣收集的沉澱,往往難溶解於TE,可在60?水浴放置15分鍾以上，以幫助溶解。
8. 將DNA溶液3000rpm離心5分鍾, 上清液倒入干凈的5ml離心管。
9. 加入5μl RNaseA(10μg/μl), 37? 10分鍾, 除去RNA(RNA對DNA的操作、分析一般無影響，可省略該步驟）。
10. 加入1/10體積的3mol/L NaAc及2×體積的冰乙醇,混勻,-20?放置20分鍾左右,DNA形成絮狀沉澱。