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細胞計數的方法有哪些有什麼不同

發布時間:2022-10-01 15:40:55

❶ 到底怎樣計數細胞呢稀釋倍數怎麼

一般來說,細胞的計數方法是:細胞數/mL=4個大格細胞總數/4×10000×稀釋倍

操作步驟:
1.取10ul細胞懸液與10ul台盼蘭混合均勻於1.5ml離心管中。
2.蓋上蓋玻片,取10ul混合液自血球計數盤上方加入,於10倍生物顯微鏡下觀察,活細胞不染色,死細胞被染成藍色。
3.分別計數四個大方格,得到細胞總數,再除以4,乘以稀釋倍數(本實驗為2),最後乘以104,即為每ml細胞懸液中細胞數。若細胞位於線上,只計上線與左線(計上不計下,計左不計右)。

註:
1.細胞數/ml=4大格細胞總數×稀釋倍數×104/4;每一大格的體積為=0.1cm×0.1cm×0.01cm=10-4ml
2.計數板計數時,最適細胞濃度為5~10×105個/ml,此范圍外計數誤差偏大。
3.高濃度細胞懸液,可取出部分作稀釋或連續稀釋後計數。

活細胞數/方格:55,62,49,59;死細胞數/方格:5,3,4,6;細胞總數=243
平均細胞數/方格=60.75;稀釋倍數=2;
細胞數/ml:60.75×104×2=1.22×106;
細胞數/flask(10ml):1.22×106×10ml=12.2×106
存活率:225/243﹦92.6%

❷ 微生物計數方法有哪些

測定微生物細胞數目的方法有很多,介紹幾種

1.血細胞計數法

將稀釋的菌液樣品滴在血細胞計數板上,在顯微鏡下計算4~5個中格的細菌數,並求出每個小格所含細菌的平均數,再以此為依據,估算總菌數。

①此法的缺點是不能區分死菌和活菌。

②對壓在小方格界線上的細菌,應當取平均值計數。

③此法可用於測定培養液中酵母菌種群數量的變化

2.稀釋塗布平板法

原理:每個活細菌在適宜的培養基和良好的生長條件下可以通過生長形成菌落。培養基表面生長的一個菌落,來源於樣品稀釋液中的一個活菌。

①這一方法常用來統計樣品中活菌的數目

②統計的菌落數往往比活菌的實際數目低,原因是當兩個活多個細胞連在一起時,平板上觀察到的只是一個菌落。因此統計結果一般用菌落數而不是用活菌數來表示。

③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含細菌、酵母、芽孢與孢子等的數量均可用此法測定。但不適於測定樣品中絲狀體微生物,例如放線菌或絲狀真菌或絲狀藍細菌等的營養體等。

④此法若不培養成菌落,可通過將一定量的菌液均勻地塗布在玻片上的一定面積上,經固定染色後在顯微鏡下計數,這樣又稱塗片計數法。染色可用台盼藍,台盼藍能使死細胞染成藍色,可分別計數死細胞和活細胞。

3.濾膜法

濾膜法是當樣品中菌數很低時,可將一定體積的湖水、海水或飲用水燈樣品通過膜過濾器。然後將濾膜乾燥、染色,並經處理使膜透明,再在顯微鏡下計算膜上(或一定面積上)的細菌數。

此法也可以通過培養觀察形成的菌落數來推算樣品中的菌數。例如測定飲用水中大腸桿菌的數目:將已知體積的水過濾後,將濾膜放在伊紅美藍培養基上培養。在該培養基上大腸桿菌的菌落呈現黑色,可根據培養基上黑色菌落的數目,計算出水樣中大腸桿菌的數目。

此法也是統計樣品中活菌的數目。

4.比濁法

原理是在一定范圍內,菌是懸液中細胞濃度與混濁度成正比,即與光密度成正比,菌越多,光密度越大。因此可藉助與分光光度計,在一定波長下,測定菌懸液的光密度,以光密度表示菌量。實驗測量時一定要控制在菌濃度與光密度成正比的線性范圍內,否則不準確。

5.顯微鏡直接計數法

在課本生物選修1生物技術實踐P22中「除了上述活菌計數法外,顯微鏡直接計數也是測定微生物數量的常用方法。」這里說的顯微鏡直接計數,我認為應該是在稀釋塗布的基礎上不培養成菌落而通過染色的方法在顯微鏡下直接計數。再如濾膜法也一樣,可以有兩種情況。

另外,微生物計數法發展迅速,多種多樣的快速、簡易、自動化的儀器和裝置等方法可以用來統計微生物的數目。

❸ 高中生物幾個計數法。

高中生物有5個計數法。

1、取樣器取樣法

取樣器取樣法是用來調查土壤小動物的種類時的取樣方法; 取樣器取樣法適用於小型動物,如蚯蚓等;樣方法適用於植物和活動力弱的動物。

2、目測估計法和記名統計法

目測估計法和記名統計法是調查土壤小動物的時候具體計數的方法,記名統計法更准確,目測估計法模糊。

3、顯微計數法

顯微計數法是在顯微鏡下觀察並計算某種微生物的數量的方法。

4、稀釋塗布平板法

稀釋塗布平板法是用稀釋後,在培養基上形成菌落的方法來計算細菌等微生物的數量的方法。



細胞計數法的用途:

細胞計數法是用來計數細胞懸液中細胞數量的一種方法,一般利用計數板(血球計數板)進行。

既可用於分離細胞培養接種前計數所制備的細胞懸液中的細胞數量,也可用於對培養物的細胞數量進行計數。不論計數的對象如何,均需制備分散的細胞懸液。

❹ 顯微鏡計數法,活菌計數法,稀釋塗布平板法,平板劃線法,血球計數法區別

1、顯微鏡計數法即血球計數法,事先把菌液稀釋到一定的倍數,然後通過血球計數板在顯微鏡下計數。此法計數比較精準。

2、活菌計數法是將待測樣品經一系列 10 倍稀釋,然後選擇三個稀釋度的菌液,分別取 0.2ml 放入無菌平皿,再倒入適量的已熔化並冷至 45 ℃ 左右的培養基,與菌液混勻,冷卻、待凝固後,放入適宜溫度的培養箱或溫室培養,長出菌落後,計數,按下面公式計算出原菌液的含菌數:

每毫升原菌液活菌數=同一稀釋度三個以上重復平皿

菌落平均數×稀釋倍數× 5

3、稀釋塗布平板法是一種粗略的活菌計數法,即通過一定的稀釋倍數,塗布到平板上,在適宜的條件下培養後,觀察活菌數。

4、平板劃線法一般指劃線平板,平板劃線法是用來分離單菌落的一種方法,不是計數的方法。

5、血細胞計數,是用於檢測細胞的特徵性變數,包括細胞大小、細胞數量、細胞形態和結構、細胞周期、細胞DNA、細胞表面蛋白質和胞質蛋白質的常規檢查之一。

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活菌計數法又稱間接計數法。活菌計數法是在一定濃度的定量葯物內加入定量的試驗菌,經過一定時間培養後,取樣進行活菌計數。

活菌計數是將定量的葯物與試驗菌作用後的混合液稀釋後加入瓊脂培養基,製成平板,培養後數平板上形成的菌落數。直接計數法測定到的是死、活細胞總數,而間接計數法測得的僅是死、活菌總數。這類方法所得的數值往往比直接計數法測得的數值小。

稀釋平板計數是根據微生物在固體培養基上所形成的單個菌落,即是由一個單細胞繁殖而成這一培養特徵設計的計數方法,即一個菌落代表一個單細胞。

劃線的具體形式很多,一種有效的方法是將一個平板分成不同面積的4區,A區面積最小,作為待分離菌的菌源區,B和C區是逐級稀釋的過渡區,D區面積最大,以便有機會出現較多的單菌落供選用。

❺ 普通實驗室最常用的細胞計數的方法是什麼

細胞計數就是從需要計數的細胞懸液中取一定量細胞進行計數,並通過計數得知原始細胞懸液中的細胞密度以及細胞總和數.在細胞計數時,若細胞濃度太高,可進行必要的稀釋.常用的細胞計數有細胞電子記數儀計數法和細胞板計數法,但電子計數儀記數法在許多實驗室尚未完全推廣, 細胞板計數法仍是實驗室目前常用的方法.

1. 制備雞紅細胞懸液:取50ml小燒杯一隻,以一份雞血加十份0.17mol/L氯

化鈉溶液稀釋,形成一種不透明的紅色液體,此為雞紅血細胞懸液.懸液制備後應輕輕反復吹打, 使細胞充分分散.

2. 准備記數板:用酒精清潔雞血細胞懸液及專用蓋玻片,再用綢布擦凈.

3. 加樣: 細胞記數板蓋上專用蓋玻片,用無菌細口吸管吸取一滴雞血細胞懸

液,從記數板上蓋玻片的邊緣一側緩緩滴入,使之充滿記數板和蓋玻片之間的的空隙中,注意:加樣量不要過多溢出蓋玻片,也不要過少或帶有氣泡.不理想時要重新加樣,否則會影響細胞計數結果.

4. 計數:稍候片刻,將計數板放在低倍鏡下觀察計數.計算出計數板的四角大方格(每個大方格又分16個小方格)內的細胞數.計數時,只計數完整的細胞,若聚成一團的細胞 則按一個細胞計數.在一個大方格中,如果有細胞位於線上,一般計上限細胞不計下限細胞,計左線細胞不計右線細胞.

5. 計算:計完數後,需換算出每mol懸液中的細胞數.由於計數板中每一方格的面積為0.1cm2 ,高為0.01cm,這樣它的體積為0.0001cm3 即0.1mm 3 .由於1ml=1000 mm 3 ,所以每一大方格內細胞數×104=細胞數/ ml,故可按下式計算:

細胞懸液細胞數/ ml=4個大方格總數/4×104. 如計算前已稀釋,可再乘稀釋倍數.

❻ 血細胞計數法,顯微計數法和抽樣檢測法的區別

血細胞計數法,顯微計數法和抽樣檢測法的區別:

血球板計數法屬於顯微計數,用血球板計數法需要最後需要在顯微鏡下計數。抽樣檢測是針對調查的是全部還是部分。

但是三種細胞計數法實際上沒有什麼區別,人教版稱之為抽樣檢測法,北師大版本稱之為顯微計數法,因為實際操作過程中用了血球計數板,所以又叫血球板計數法。

血球計數板計數法:

利用血球計數板在顯微鏡下直接計數,是一種常用的微生物計數方法。此法的優點是直觀、快速。將經過適當稀釋的菌懸液(或孢子懸液)放在血球計數板載玻片與蓋玻片之間的計數室中,在顯微鏡下進行計數。由於計數室的容積是一定的(0.1㎜3),所以可以根據在顯微鏡下觀察到的微生物數目來換算成單位體積內的微生物總數目。由於此法計得的是活菌體和死菌體的總和,故又稱為總菌計數法。

❼ 血細胞計數法,顯微計數法和抽樣檢測法的區別

血細胞計數法,顯微計數法和抽樣檢測法實際上沒什麼區別:
人教版稱之為抽樣檢測法,北師大版本稱之為顯微計數法,因為實際操作過程中用了血球計數板,所以又叫血球板計數法。
血球計數板的使用原理
顯微鏡直接計數法是將小量待測樣品的懸浮液置於一種特別的具有確定面積和容積的
載玻片上(又稱計菌器),於顯微鏡下直接計數,然後推算出含菌數的一種方法。血球計數板是常用的計菌器之一。
血球計數板是一種專門用於計算較大單細胞微生物的一種儀器,由一塊比普通載玻片
厚的特製玻片製成的玻片中有四條下凹的槽,構成三個平台。中間的平台較寬,其中間又被一短橫槽隔為兩半,每半邊上面刻有一個方格網。方格網上刻有9個大方格,其中只有中間的一個大方格為計數室。這一大方格的長和寬各為1mm,深度為0.1mm,其容積為
0.1mm3,即1mm×1mm×0.1mm方格的計數板;大方格的長和寬各2mm,深度為0.1mm,其容積為0.4mm3,即2mm×2mm×0.1mm方格的計數板。在血球計數板上,刻有一些符號和數字,其含義是:XB-K-25為計數板的型號和規格,表示此計數板分25
個中格;0.1mm為蓋上蓋玻片後計數室的高;1/400mm2表示計數室面積是1mm2,分400個小格,每小格面積是1/400
mm2。

❽ 細胞計數的方法

你好,很高興為你解答:
顯微鏡直接計數法:
顯微鏡直接計數法是將小量待測樣品的懸浮液置於一種特別的具有確定面積和容積的載玻片上(又稱計菌器),於顯微鏡下直接計數的一種簡便、快速、直觀的方法。細胞(英文名:cell)並沒有統一的定義,比較普遍的提法是:細胞是生物體基本的結構和功能單位。已知除病毒之外的所有生物均由細胞所組成,但病毒生命活動也必須在細胞中才能體現。

❾ 高中常用的細胞計數法有哪幾種分別適用於哪種情況

細胞計數法是用來計數細胞懸液中細胞數量的一種方法。一般利用計數板(血球計數板)進行。即可用於分離(散)細胞培養接種前計數所制備的細胞懸液中的細胞數量,也可用於對培養物的細胞數量進行計數。不論計數的對象如何,均須制備分散的細胞懸液。 1、 制備細胞懸液 對於懸液培養的細胞,可直接進行下面的步驟2(計數與計算過程)。如果計數對象為貼壁生長的細胞,首先需將培養物制備成細胞懸液。 (1) 終止培養,將培養液吸出,用PBS洗培養物一次。 (2) 給培養瓶內加入1ml 0.25%胰蛋白酶溶液,於37℃消化3~5min 。期間不斷在鏡下觀察。當細胞變圓接近脫壁時,棄消化液。 (3) 加入一定量的培養液(如果這些培養細胞不再有用,可加PBS),用吸管吹打,使細胞脫壁而製成細胞懸液。 2、計數與計算過程 ( 1) 在細胞計數板中央放置計數專用的蓋玻片。 (2) 用玻璃虹吸管吸取細胞,讓虹吸管在蓋玻片上或下側的計數板凹糟處流出懸液,至蓋玻片被液體充滿為止。 (3) 置顯微鏡下計數四角大方格內的細胞總數。對於壓線的細胞只計數在上線和左線者,對於細胞團按單個細胞計數。 (4) 按下式計數細胞懸液的密度:細胞密度=(4個大格細胞總數/4)×104個/ml 注意事項: (1) 務必使分散成單個細胞,取樣計數前,充分混勻細胞懸液。 (2) 顯微鏡下計數時,遇到2個以上細胞組成的細胞團,應按單個細胞計算。如果細胞團>10%,說明細胞分散不充分; 或細胞數<200個/10mm2或>500個/10 mm2 時,說明稀釋不當,需重新制備細胞懸液。

❿ 高中生物 求解血球計數法和稀釋塗布平板法的區別

1、代表含義不同:

(1)血球計數法:醫學上常用來計數紅細胞,白細胞等而得名,也常用於計算一些細菌,真菌,酵母等微生物的數量。血球計數板是一種常用的細胞計數工具。

(2)稀釋塗布平板法:微生物學實驗中的一種操作方法。

由於將含菌材料現加到還較燙的培養基中再倒平板易造成某些熱敏感菌的死亡,而且採用稀釋倒平台法也會使一些嚴格好氧菌因被固定在瓊脂中間缺乏氧氣而影響其生長,因此在微生物學研究中更常用的純種分離方法是塗布平板法。

2、使用目的不同:

(1)血球計數法:常用來計數紅細胞,白細胞等細胞數量。

(2)稀釋塗布平板法:微生物學研究中更常用的純種分離方法是塗布平板法,根據微生物在固體培養基上所形成的單個菌落,即是由一個單細胞繁殖而成這一培養特徵設計的計數方法,即一個菌落代表一個單細胞。。

(10)細胞計數的方法有哪些有什麼不同擴展閱讀

塗布平板法的特徵:

稀釋平板計數是根據微生物在固體培養基上所形成的單個菌落,即是由一個單細胞繁殖而成這一培養特徵設計的計數方法,即一個菌落代表一個單細胞。

計數時,首先將待測樣品製成均勻的系列稀釋液,盡量使樣品中的微生物細胞分散開,使成單個細胞存在(否則一個菌落就不只是代表一個細胞),再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中,使其均勻分布於平板中的培養基內。

經培養後,由單個細胞生長繁殖形成菌落,統計菌落數目,即可計算出樣品中的含菌數。此法所計算的菌數是培養基上長出來的菌落數,故又稱活菌計數。一般用於某些成品檢定(如殺蟲菌劑等)、生物製品檢驗、土壤含菌量測定及食品、水源的污染程度的檢驗。

參考資料來源:網路-塗布平板法

參考資料來源:網路-血球計數板

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