T細胞殺傷實驗方法有哪些

⑴ t細胞介導的免疫殺傷與抗體介導的免疫殺傷各有哪些途徑

t細胞介導的免疫殺傷與抗體介導的免疫殺傷各有哪些途徑
①抗感染 T細胞效應主要針對胞內感染的病原體，包括抗細菌、抗病毒、抗真菌、抗寄生蟲感染等。
②抗腫瘤 其機制為：Tc細胞的特異性殺傷作用；巨噬細胞、NK細胞的ADCC效應；細胞因子直接或間接的殺瘤效應等。
③ 免疫損傷作用 T細胞效應可參與IV型超敏反應、移植排斥反應、某些自身免疫病的發生和發展。

⑵ 在細胞免疫中，效應T細胞殺傷靶細胞主要有兩種途徑：細胞裂解性殺傷（圖1）和誘導細胞凋亡（圖2＞．前者

（1）效應T細胞是由T細胞或記憶細胞增殖分化產生的，在細胞免疫過程中起作用，另一種特異性免疫是體液免疫，作用依靠漿細胞產生的抗體發揮作用．
（2）穿孔素是一種大分子物質，以胞吐的方式釋放到細胞外，K⁺及蛋白質主要存在於細胞內，可以通過通道流出細胞．
（3）①Fas和FasL的特異性結合，將信息傳遞給靶細胞，體現了細胞膜進行細胞間信息交流的功能，每一個細胞內都含有一個個體的全部基因，控制合成Fas和FasL的基因可以存在於一個細胞中．
②FasL是死亡因子，某些腫瘤細胞能夠調節Fas和FasL基因的表達水平，以加強自身的攻擊能力，所以細胞內FasL基因的表達水平升高．腫瘤細胞還能逃脫免疫系統的清除，因此細胞內Fas基因的表達水平降低，死亡因子受體減少．
③免疫抑制就是要降低免疫能力，只要能降低移植器官Fas基因的表達水平，死亡因子受體減少，移植器官就不會被效應T細胞識別而被清除．
故答案為：
（1）T細胞或記憶細胞漿細胞抗體
（2）胞吐流出
（3）①信息交流能
②降低升高
③降低移植器官Fas基因的表達水平

⑶ 效應T細胞如何消滅入侵病毒

1、通過裂解被感染的細胞，使細胞裂解，釋放病毒。隨後被抗體結合，而後被吞噬細胞吞噬，從而消滅病毒。
2、通過合成一些細胞因子，比如干擾素，從而抑制病毒的復制。

⑷ 如何在體外誘導T細胞活化成具有腫瘤殺傷作用的T細胞

這屬於腫瘤細胞免疫療法中的一種方法思路，CAR-T細胞療法，從患者自身血液收集T細胞，收集之後對T細胞進行基因工程處理(將能識別某種腫瘤抗原的抗體的抗原結合部與CD3-ζ鏈或FcεRIγ的胞內部分在體外偶聯為一個嵌合蛋白，通過基因轉導的方法轉染患者的T細胞，使其表達嵌合抗原受體[chimeric antigen receptor, CAR]），同時在受體的胞內段加上引起T細胞活化的信號傳遞區域。CAR是一種蛋白質受體，可使T細胞識別腫瘤細胞表面的特定蛋白質（抗原），表達CAR的T細胞可識別並結合腫瘤抗原，進而攻擊腫瘤細胞。這種表達CAR的T細胞被稱為CAR-T。經過設計的CAR-T細胞可在實驗室培養生長，達到數十億之多將擴增後的CAR-T細胞注入到患者體內，注入之後的T細胞也會在患者體內增殖，並殺死具有相應特異性抗原的腫瘤細胞

⑸ 效應t細胞殺傷靶細胞的方式中不包括

（1）人體特異性免疫包括體液免疫和細胞免疫．在細胞免疫過程中，T細胞發揮主要作用；該細胞接受刺激後，能增殖、分化成效應T細胞核記憶T細胞，當記憶T細胞再次接收同一刺激後，能迅速增殖、分化成效應T．在體液免疫過程中，B細胞發揮主要作用，該細胞接受刺激後，能增殖、分化成記憶B細胞和漿細胞，漿細胞分泌抗體．
（2）Fas和FasL的結合體現了細胞膜的信息傳遞功能．同一個體的所有體細胞的基因組成相同，控制合成Fas和FasL的基因可以共存於一個細胞中，由題目所給信息「控制FasL的基因只在效應T細胞核某些腫瘤細胞內表達」可以推出腫瘤細胞內FasL基因的表達水平升高，腫瘤細胞本身又能逃脫免疫系統的清除而避免死亡，說明Fas基因的表達水平應該降低．降低移植器官Fas基因的表達水平，可以降低免疫排斥作用．
故答案為：
（1）T細胞或記憶細胞    漿    抗體   
（2）①信息交流    能    ②降低

⑹ 檢測T,B,NK和吞噬細胞免疫功能的方法分別有哪些

免疫細胞功能試驗包括體內和體外試驗。免疫細胞功能體外試驗主要根據免疫細胞的增殖活性、分泌活殺傷活性等特性而進行實驗設計。具體免疫細胞功能檢測內容包括：①淋巴細胞功能檢測，包括T細胞增殖試驗、T細胞分泌功能測定、T細胞介導的細胞毒試驗以及體內試驗；B細胞增殖試驗、溶血空斑試驗、酶聯免疫斑點法以及體內試驗；NK細胞活性檢測方法：酶釋放法、放射性核素釋放法、化學發光法、流式細胞術法等。②吞噬細胞功能檢測，方法有趨化功能檢測、吞噬和殺菌功能測定等。

⑺ t細胞細胞毒試驗常用的檢測方法有哪些

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⑻ 用於檢測T細胞功能的細胞毒試驗不包括

正確答案:E
解析：T細胞介導的細胞毒試驗是將靶細胞與受檢的淋巴細胞混合，觀察腫瘤細胞被殺傷情況
。溶血空斑試驗是用來檢測B細胞功能的試驗
。

⑼ 簡述T細胞功能測定的常用方法

免疫學檢測方法可分為體液免疫和細胞免疫測定。1．體液免疫測定主要利用抗原與相應抗體在體外發生特異性結合，並在一些輔助因子參與下出現反應，從而用已知抗原或抗體來測知未知抗體或抗原。此外，尚包括檢測體液中的各種可溶性免疫分子，如補體、免疫球蛋白、循環復合物、溶菌酶等。2．細胞免疫測定法是根據各種免疫細胞（T細胞、B細胞、K細胞、NK細胞及巨噬細胞等）表面所具有的獨特標志和產生的細胞因子等，測定各種免疫細胞及其亞群的數量和功能，以幫助了解機體的細胞免疫水平。體液免疫檢測法1.凝集反應。顆粒性抗原（細菌或紅細胞等）與相應抗體特異性結合，在電解質參與下形成肉眼可見的凝集物，稱之為凝集反應。1）直接凝集反應。顆粒性抗原與相應抗體直接結合所產生的凝集現象，前者多為細胞表面的結構成分，如細菌或紅細胞的表面結構抗原。⑴玻片法：多用於抗原的定性檢測。⑵試管法：多用於抗體的定量檢測。2）間接凝集反應。將可溶性抗原吸附於載體顆粒（如乳膠顆粒、紅細胞等）的表面，稱之為致敏顆粒。當致敏顆粒與相應抗體結合，即可出現凝集現象。這個反應常用於測定細菌性抗體、病毒性抗體、鉤端螺旋體和梅毒螺旋體抗體及某些自身抗體（如抗核抗體、抗腎抗體、抗甲狀腺抗體等）。根據凝集反應的原理，還有間接凝集抑制試驗、反向間接凝集試驗、協同凝集試驗等。2．沉澱反應。可溶性抗原（外毒素、血清、細菌培養的濾液、組織浸出液等）與相應抗體特異性結合，在電解質參與下，形成沉澱物，稱為沉澱反應。沉澱反應的抗原多為多糖、類脂、蛋白質等。1）單向擴散試驗。這是一種抗原定量試驗，是可溶性抗原在含抗體的瓊脂介質中擴散的沉澱反應。此法常用於檢測血清免疫球蛋白和補體各成分的含量。2）雙向擴散試驗。這是可溶性抗原與抗體在瓊脂介質中相互擴散的沉澱反應。本法常用於定性試驗，如檢測血清免疫球蛋白、甲胎蛋白、乙型肝炎表面抗原等。單克隆抗體技術3）對流免疫電泳。對流電泳是一敏感快速的檢測方法，即在電場作用下的雙向免疫擴散。此法常用於檢測血清中的乙型肝炎表面抗原與甲胎蛋白等。3．中和試驗。特異性抗體可抑制相應抗原物質的活性，抗體使相應抗原的毒性或傳染性消失的反應為中和試驗。例如抗毒素中和外毒素的毒性，病毒的中和抗體可使病毒失去感染性等。診斷風濕熱的抗鏈球菌溶血毒素「O」試驗也為一種中和試驗。乙型溶血性鏈球菌能產生一種溶解人、兔紅細胞的溶血毒素「O」，該毒素的溶血毒性可被抗溶血毒素「O」抗體所中和而不出現溶血。試驗時將病人血清與溶血毒素「O」混合，作用一段時間後加入人紅細胞，紅細胞不被溶解為陽性反應，表示病人血清中存在抗溶血毒素「O」抗體。血清抗體效價達400單位以上時提示患者曾感染乙型溶血性鏈球菌，有助於風濕熱的診斷。4.免疫熒光法（熒光抗體法）。是應用熒光素染料（如異硫氰酸熒光黃等）來標記抗體，但不影響其活性，此種抗體稱熒光抗體。用已知種類的熒光抗體浸染待檢的含有抗原的細胞或組織切片，如有相應抗原存在，則抗原即與此種抗體發生特異性結合，形成復合物而粘著在細胞上，不易洗脫，在熒光顯微鏡下成為發出熒光的可見物，可達到診斷或定位的目的。包括直接法和間接法。5．酶聯免疫吸附試驗。本法的原理是利用酶（常用辣根過氧化物酶）標記的抗原或抗體，以測定被檢標本中有無相應的抗原或抗體。有間接法、雙抗體法、競爭法三種。6．溶血空斑試驗。7．免疫印跡技術。免疫印跡或免疫轉印技術(immunoblotting或Westernblot）是在Southern(1975)抗體抗原反應創建的DNA印跡術(Southernblotting）基礎上發展起來的新型免疫生化技術。細胞免疫檢測法近代免疫學廣泛採用了細胞生物學、免疫血清學、免疫標記、免疫組化等多方面技術，不斷發展和完善了一系列細胞免疫檢測技術，用於檢測各類免疫細胞的表面標志（包括抗原及受體）、細胞的活化、增殖、吞噬、殺傷功能、各種細胞因子的活性或含量等方面。這些技術為深入研究和認識機體免疫系統的生理、病理改變，闡明某些疾病的發病機制和臨床診治提供了有用的手段。隨著細胞免疫學的迅猛發展，時有新的細胞免疫檢測技術出現。二十一世紀初期，新發展的項目集中在對有關細胞因子以及細胞受體方面的檢測。1．淋巴細胞轉化試驗。人類淋巴細胞在體外與特異性抗原（如結核菌素）或非特異性有絲分裂原（如植物血凝素，PHA）等一起孵育，T細胞即被激活而向淋巴母細胞轉化。T細胞轉化過程可伴隨有DNA、RNA、蛋白質的合成增加，最後導致細胞分裂。在光學顯微鏡下可計數轉化後的淋巴母細胞數，也可用氚標記的胸腺嘧啶核苷(3H-TdR）摻入正在分裂的淋巴細胞，用液閃測定儀來確定摻入量以確定淋巴細胞轉化率。2000年開始出現一種不用同位素，又可用儀器測量的淋巴細胞增殖反應的檢查法，稱為MTT檢測法。MTT是一種甲氮唑鹽，它是細胞線粒體脫氫酶的底物，細胞內的酶可將MTT分解產生藍黑色成分。該產物的多少與活細胞數成正比，結果可用酶標儀(595nm）測量光密度，作為MTT法的指標。2．E-花環法。人類T細胞表面有羊細胞受體(CD2）能與羊紅細胞結合形成玫瑰花樣結構。即將分離液分離出的外周的單個核細胞懸液與羊紅細胞在體外混合，經37℃培養5～10分鍾後放4℃過夜，取細胞懸液計數，外周血淋巴細胞中約70%～80%淋巴細胞結成花環即為T細胞，此法可用來分離T細胞。3．T細胞亞群檢測。4．細胞毒試驗。Tc細胞、NK細胞、LAK細胞、TIL細胞等對其靶細胞有直接的細胞毒（殺傷）作用。抗體制備常用的檢測方法是51Cr（鉻）釋放法，將51Cr-Na2CrO4鹽水溶液與靶細胞（不同的細胞需不同的靶細胞，如NK細胞的靶細胞為K562），於37℃培養1小時左右，51Cr即進入靶細胞，與胞漿結合，洗去游離的51Cr後，即可得到51Cr標記的靶細胞，將待測細胞毒的細胞與51Cr標記的靶細胞混合（比例約為50:1或100:1），靶細胞殺傷越多，釋放到上清液中的游離51Cr就越多，且不能再被其他細胞吸收，用γ射線測量儀檢測上清液中的cpm值，可計算出待檢細胞殺傷活性高低。細胞毒的檢測對腫瘤免疫有較大價值。5．巨噬細胞吞噬功能的測定。將中葯(10%斑蝥）乙醇浸出液浸漬的濾紙（1cm2大小）置於受試者前臂屈側皮膚上，4～5小時後取下濾紙。48小時內皮膚局部可水泡，內含巨噬細胞。取水泡液0.5ml加雞紅細胞懸液0.01ml，37℃經30分鍾後作塗片、染色與鏡檢，計算吞噬百分率及每個巨噬細胞吞噬雞紅細胞的平均數。本試驗有助於腫瘤病情及療效的觀察。6．移動抑制試驗。致敏淋巴細胞與其特異性抗原再次接觸時，可以產生移動抑制因子(MIF）。這種因子可以抑制巨噬細胞和中性粒細胞的移動，使之定位於局部而增強其免疫作用。本試驗用來觀察受檢者淋巴細胞在體外受特異性抗原刺激後，有無MIF產生，以測定機體對某種抗原的特異性細胞免疫反應的功能。7．時間分辨熒光測量技術。時間分辨熒光測量技術(time-resolvedfluorometry,TrF）是一項新型的超微量非放射性分析技術。該技術的敏感性和特異性與放射性核素測量技術相仿，但無放射測量的弊端，故問世雖短，進展卻極為迅速，有取代放射測量之勢。8．細胞因子檢測技術。細胞因子的檢測，2005年起在中醫臨床及實驗室中已廣泛應用。9．細胞受體的檢測。受體是細胞表面標志之一，通過對受體的檢測，可以了解細胞的功能，並為某些疾病的發病機制提供一定的理論依據。

⑽ T細胞介導的免疫殺傷與抗體介導的免疫殺傷各有哪些途徑

由T細胞介導的細胞的免疫有二種基本形式，分別由二類不同的T細胞亞類參予。一種是遲發型超敏性的T細胞（TDH，CD4+），該細胞和抗原起反應後可分泌細胞因子。

這些細胞因子再吸引和活化巨噬細胞和其它類型的細胞在反應部位聚集，成為組織慢性炎症的非特異效應細胞。另一種是細胞毒性T細胞（TC，CD8+），對靶細胞有特異殺傷作用。

在無抗原激發的情況下，效應T細胞是以不活化的靜息型細胞形式存在。當抗原進入機體後，在抗原呈遞細胞或靶細胞的作用下使靜息型T細胞活化增殖並分化為效應T細胞。即由T細胞介導的細胞免疫應答也需經過抗原識別（誘導期）、活化與分化（增殖期）和效應期才能發揮細胞免疫作用。

(10)T細胞殺傷實驗方法有哪些擴展閱讀：

注意事項：

1、細胞毒性T細胞不是僅指人教版老教材上的效應T細胞。效應T細胞根據發揮效應的不同又可以分為細胞毒性T細胞（介導細胞免疫）、輔助性T細胞（分泌淋巴因子對於細胞免疫和體液免疫起輔助作用）和調節性T細胞（起免疫抑製作用的T細胞）。

2、在體液免疫里， T細胞不具有呈遞抗原給B細胞的作用，通過分泌的淋巴因子發揮作用。

3、殺傷T細胞可泌一種蛋白質毒素，與顆粒內的物質不同，而類似於淋巴毒素的物質。這種細胞毒素可活化靶細胞內的DNA降解酶，導致靶細胞核DNA的裂解，引起靶細胞的程序性死亡。