花葯培養預處理的方法有哪些

⑴ 為什麼花葯組織培養要經過低溫預處理

花葯組織培養一定要經過低溫處理，低溫處理是一種行之有效的預處理方式，可以提高花葯組織培養的誘導率。具體原因如下:
①低溫預處理可以改善花葯內的花粉的生理狀態，延緩花粉的退化。
②提高了內源激素水平，啟動了雄核發育過程。
③不同的物種材料低溫預處理的最適合的時間和最適合的溫度是不同的。進行某物種的花葯培養研究時，需要藉助文獻參考資料和預實驗摸索最適宜的低溫預處理時間和溫度。

⑵ 花葯培植

培養方法：

用於花葯或花粉培養的供體植株，在生長條件下，從幼年的植株取出花葯。由於花粉發育時期和花蕾的某些外部形態特徵（如花冠筒長度和花冠露出花萼的時間等）之間的大致的相關性，因此可以利用這些外部標志，去選擇大致處於所需要時期的花蕾。但在實驗中必須由每個花蕾取出一個花葯，通過鏡檢確定花粉發育的准確時期。

在水稻中，以單核靠邊期的花粉對誘導單倍體植株較為適宜，在外部形態上可根據葉枕距為5~15cm，穎片淡黃綠色、雄蕊長度接近穎片長度的1/2這些條件鑒定。在取穗前先將旗葉鞘用70%酒精擦洗一遍。在超凈工作台內剝去旗內鞘，取出稻穗，放入10%漂白粉溶液中消毒10min，換無菌水洗一次。在取花葯之前用70%酒精將手擦洗兩遍。取花葯時左手持穗，右手用鑷子從穎殼中取出花葯，放在無菌培養皿中，待花葯有一定數目時，用接種環將他們接種到培養基上。培養5天後，花葯逐漸變為黑褐色，20天左右花葯裂開，從中長出淡黃色的花粉愈傷組織，以後先形成芽，後長出根，形成幼苗。

煙草花葯培養的最適取樣期是花粉為單核期的花蕾，此時花蕾的花冠大約與萼片等長。蘆筍花葯培養的最適取樣期也是單核期的花粉，花蕾長2~2.5mm，選取一級側枝的花蕾較為合適，因為在一級側枝的花蕾發育良好，數量大，發育同步。煙草花葯消毒方法基本與水稻花葯培養相同。

必須注意整個操作過程中不應使花葯受到損傷，若受到損傷，則應淘汰，因為損傷常常會刺激花粉壁形成二倍體的愈傷組織。

花葯培養的條件，一般是光照（12~18 h，5000~10000lx,28°C）和黑暗（12~16 h,22°C）周期交替進行。（P106 L.2~P107 L.4）

以上資料來自《植物組織培養》第二版 主編：潘瑞熾 廣東高等教育出版社出版（2001年5月）

⑶ 花葯離體培養實驗的步驟,注意事項實驗的取材,方法,結論.

步驟：①把花粉發育到一定階段的花葯,通過無菌操作技術,接種在人工培養基上進行離體培養；②花粉在培養基所提供的特定條件下可以發生多次分裂,形成類似胚胎的構造（胚狀體）或愈傷組織；③誘導愈傷組織分化出芽和根,最後長成植株 取材：一般是離體培養花粉處於單核時期（小孢子）的花葯.通過培養使它離開正常的發育途徑（即形成成熟花粉最後產生精子的途徑）而分化成為單倍體植株 結論：植物細胞的全能性 注意事項：必須注意整個操作過程中不應使花葯受到損傷,若受到損傷,則應淘汰,因為損傷常常會刺激花粉壁形成二倍體的愈傷組織.

⑷ 預處理的花葯有哪些目的

現有大多數成功的例子中，只有經過預處理的花葯才能培養出完整的植株。

預處理的目的就是從形態上改變花葯的極性分布，從生理生化上改變其細胞生理狀態，以改變其分裂方式和發育途徑。預處理的方式主要有低溫、高溫、離心和預培養等，不同的植物種類、品種和生理狀態，花葯培養所要求的預處理不同。

因花葯適宜培養時，花蕾尚未開放，花葯在花被或其他組織的嚴密包被之中，本身處於無菌狀態，因此，通常是將整個花蕾進行預處理，之後用乙醇、漂白粉或升汞消毒花蕾表面，再行接種。

⑸ 如何進行菜薹的花葯培養和小孢子培養

花葯培養和花粉培養是獲得單倍體的主要途徑。吳慧娟等（1998）進行紫菜薹的花葯培養，認為紫菜薹的花葯培養仍然存在著基因型差異，附加外源激素並沒有提高培養效率，適宜的低溫預處理對於有的基因型可以提高培養效率，而通過愈傷組織途徑可以在短時間內得到大量的植株。

通過游離小孢子培養的方法獲得雙單倍體植株，能加快育種進程，提高選擇效率，從而受到各國育種者的青睞。自Litcher等首次從甘藍型油菜小孢子培養中獲得胚狀體後，大白菜、白菜、甘藍、芥菜等芸薹屬蔬菜小孢子培養也已獲得成功。李光淘等（1996）用紫菜薹游離小孢子培養再生植株，但出胚率極低。

顧宏輝等（2003）以早熟菜薹品種油青四九為供體材料，研究了更新培養液和秋水仙鹼分別直接處理分離的菜薹小孢子對胚發生頻率的影響。分離小孢子先用NLN-17培養液32℃熱激培養2d，再換成NLN-10培養液後在24℃繼續培養，比不換培養液直接用NLN-10培養液處理的胚狀體產量明顯提高，而更新培養液還能改善胚狀體質量。用秋水仙鹼0.8mg/L 直接處理分離小孢子能明顯增加胚狀體產量，秋水仙鹼濃度過高不利於出胚和胚狀體萌發。用流式細胞儀（FCM）鑒定菜薹小孢子再生植株的染色體倍性表明，有較高的自發二倍體率（70%）和四倍體率（8%），而其他多倍體和混倍體比率相對較少。

朱允華等（2003）對菜薹進行小孢子培養，研究結果表明，以下幾個主要因素影響游離小孢子培養：菜薹基因型間的差異顯著影響游離小孢子培養；小孢子分離前對其花序進行低溫4℃處理1～2d，明顯提高小孢子的分離頻率；蔗糖濃度達到13%時，即培養基具有一定的滲透壓就會促進胚狀體的誘導和發育。

王濤濤等（2004）以5個紫菜薹基因型為試材，探討了基因型和活性炭對產胚量的影響。結果表明：產胚量最高的是基因型8902，達到42個/皿，最少的為零；加適量活性炭可以使產胚量提高近3倍。同時，對胚狀體進一步再生成苗因素也進行了研究：在培養基中添加1.2%的瓊脂時再生率最高，達到50.1%；4℃下處理10d 可使再生成苗率從45%提高到65%；隨胚狀體年齡的延長，其再生成株率明顯降低，最適的胚齡是20～24d；而培養基B5和MS 對小孢子再生率的影響不大。

對菜薹而言，無論是花葯培養還是花粉培養，接種前的花序低溫預處理（4℃下1～2d）和接種後的高溫預處理（33℃下1～2d）均能促進胚的形成，提高誘導頻率。花粉培養的胚狀體誘導率比花葯培養的高。培養基中的蔗糖濃度和有效因子的加入均能影響花葯和花粉培養中胚狀體的誘導率，兩種培養基中的蔗糖濃度均為13%，最適的AC添加量為0.5g/L。花葯培養中，在培養基中添加100～120mg/L的AgNO3能促進胚的產生。植株噴灑MET 200mg/L或MH 40mg/L，用1.0mg/L或0.6mg/LMET浸花，培養基中添加0.5mg/L MET或0.3mg/L MH對胚狀體的發生均有促進作用。不同基因型之間胚狀體的誘導頻率差異很大（朱允華，2003）。

⑹ 花葯離體培養對材料的選取最常用的方法是焙花青——烙礬法，這種方法能將花粉細胞核染成藍黑色。哪裡錯了

應該沒有錯誤，

選擇花葯時，一般通過鏡檢來確定其中的花粉是否處於適宜的發育期。

最常用的方法有醋酸洋紅法。但是，某些植物的花粉細胞核不易著色，需採用焙花青-鉻礬法，這種方法能將花粉細胞核染成藍黑色。

⑺ 花葯離體培養具體過程是怎樣的

花葯離體培養是把花粉發育到一定階段的花葯接種到培養基上，來改變花葯內花粉粒的發育程序。

使其分裂形成細胞團，進而分化成胚狀體形成愈傷組織，由愈傷組織再分化成植珠。花粉離體培養是指把花粉從花葯中分離出來，以單個花粉粒作為外植體進行離體培養的技術。

由於花粉也是單位體細胞，誘發它經愈傷組織或胚狀體發育而成的植株或是單倍體，且不受花葯的葯隔，葯壁，花絲等體細胞的干擾。

花葯離體培養相對較容易，技術比較成熟，但最後需要對培養成的植株進行染色體倍數檢測。

由花粉長成單倍體一般有兩條途徑：

1、由花粉脫分化形成愈傷組織（即分化程度很低的薄壁細胞團），再由愈傷組織再分化出根和芽，最後形成植株。

2、由花粉分裂形成胚狀體（不是由合子發育成的胚叫胚狀體），再由胚狀體長成植株。當瓶中花葯內長出的小苗達到一定大小時，應調節溫度、濕度及光照等條件，使幼苗得到鍛煉並逐步適應自然的環境條件。

然後從試管中移出種植於土壤中，進行一般的栽培和管理；或將形成的胚狀體包裹人工種皮，製成人工種子。

花葯離體培養在育種中的重要應用價值：

1、通過對所獲得的單倍體植株進行染色體加倍，便可獲得純合二倍體，可縮短育種所需年限。

2、利用單倍體及其細胞進行誘變育種，無論是發生顯性還是隱性突變，均可在當代表現出來，便於鑒定和選擇，然後將發生有利突變的個體進行染色體加倍，即可獲得遺傳性穩定的純合植株，從而加速育種進程。

3、利用單倍體植株的組織、細胞或原生質體作為外源基因轉化的受體，有利於外源基因的整合表達。

以上內容參考：花葯離體培養

⑻ 花葯離體培養的步驟

花葯離體培養的標准步驟;先取得花葯,再移植到植物細胞培養基上,進行組織培養即可!
一般進行花粉離體培養的目的是為了獲得該物種的單倍體!
注意最好用花粉離體培養為好,因為花葯壁細胞為2N,產生的不是單倍體!

⑼ 花葯培養的方法主要有哪些

主要是離體培養技術,詳見高中生物選修一