基因的操作方法有哪些

① 基因檢測的步驟是什麼

基因檢測口腔拭子採集,具體步驟：
1．基因檢測准備棉簽（單頭）,伸進口腔,從口腔內側兩頰粘膜處（腮幫子內側）反復擦拭20次以上,取出采樣拭子棉簽,放在干凈白紙上陰干。
2．以同樣的方法採集5根拭子棉簽。陰涼乾燥後干凈的紙質信封內保存
3．請不要忘記對樣本做好標記。不要和其他人物質互相接觸。以免接觸其他dna, 上述方法採集的樣本,可以在乾燥環境下保存2-3個月。不管採集什麼樣本,鑒定結果的准確性是一樣的。因為樣本採集只是從中提取dna,而每個人的dna是終身不變的,所以即使採集不同的樣本,鑒定結果的准確性是一樣的。口腔拭子dna提取的方法口腔拭子dna提取可以用商業化的試劑盒,方便簡單易操作,用華晨陽的配套dna提取試劑盒,主要是針對口腔脫落細胞dna提取的。口腔拭子在哪裡買？

② 簡述基因工程操作的幾個步驟

基因工程一般包括四個步驟:一是取得符合人們要求的DNA()片段,這種DNA()片段被稱為「目的基因」;二是將目的基因與質粒或病毒DNA連接成重組
DNA;三是把重組DNA引入某種細胞;四是把目的基因能表達的受體細胞挑選出來。

③ 基因工程的操作一般包括以下四個步驟：提取目的基因、___、將目的基因導入受體細胞、___．

基因工程的基本操作步驟主要包括四步：
①目的基因的獲取；
②基因表達載體的構建；
③將目的基因導入受體細胞；
④目的基因的檢測與表達．
其中，基因表達載體的構建是基因工程的核心．
故答案為：
基因表達載體的構建   目的基因的檢測與表達

④ 微生物代謝工程中的常用基因操作技術有哪些

微生物的基因操作技術有：核酸的凝膠電泳、核酸的分子雜交技術、DNA 序列分析、基 因的定點誘變、細菌的轉化、利用 DNA 與蛋白質的相互作用進行核酸研究、PCR 技術等。
基因定點突變(site-directed mutagenesis)：通過改變基因特定位點核苷酸序列來改變所編 碼的氨基酸序列，用於研究氨基酸殘基對蛋白質的結構、催化活性以及結合配體能力的影響， 也可用於改造 DNA 調控元件特徵序列、修飾表達載體、引入新的酶切位點等。主要採用兩 種 PCR 方法，包括重疊延伸技術和大引物誘變法。在硫化細菌核苷水解酶對底物專一性的研 究中，採用定點突變技術，對編碼 221 位和 228 位氨基酸的 DNA 序列進行突變，改變兩個位點的氨基酸，從而研究氨基酸殘基對底物結合的影響。
基因敲除(gene knock-out)：又稱基因打靶，通過外源 DNA 與染色體 DNA 之間的同源重 組，進行精確的定點修飾和基因改造，具有專一性強、染色體 DNA 可與目的片段共同穩定 遺傳等特點，可分為完全基因敲除和條件型基因敲除。在谷氨酸棒桿菌生產纈氨酸的研究中，採用基因敲除的方法進行高產菌株構建。如 ilvA 基因敲除，使蘇氨酸脫氨酶的合成減少，降低異亮氨酸合成的前體，從而減少異亮氨酸的合成，增加纈氨酸的生成。

⑤ 基因克隆的基本步驟有哪些

基因克隆的基本步驟流程如下：

一、目的DNA片段的獲得：

DNA克隆的第一步是獲得包含目的基因在內的一群DNA分子，這些DNA分子或來自於目的生物基因組DNA或來自目的細胞mRNA逆轉錄合成的雙鏈 cDNA分子。

由於基因組DNA較大，不利於克隆，因此有必要將其處理成適合克隆的DNA小片段，常用的方法有機械切割和核酸限制性內切酶消化。若是基因序列已知而且比較小就可用人工化學直接合成。如果基因的兩端部分序列已知，根據已知序列設計引物，從基因組DNA 或cDNA中通過PCR技術可以獲得目的基因。

二、載體的選擇：

基因克隆常用的載體有：質粒載體、噬菌體載體、柯斯質粒載體、單鏈DNA噬菌體載體、噬粒載體及酵母人工染色體等。從總體上講，根據載體的使用目的，載體可以分為克隆載體、表達載體、測序載體、穿梭載體等。

三、體外重組：

體外重組即體外將目的片斷和載體分子連接的過程。大多數核酸限制性內切酶能夠切割DNA分子形成有黏性末端，用同一種酶或同尾酶切割適當載體的多克隆位點便可獲得相同的黏性末端，黏性末端彼此退火，通過T4 DNA連接酶的作用便可形成重組體，此為黏末端連接。

當目的DNA片斷為平端，可以直接與帶有平端載體相連，此為平末端連接，但連接效率比黏端相連差些。有時為了不同的克隆目的，如將平端DNA分子插入到帶有黏末端的表達載體實現表達時，則要將平端DNA分子通過一些修飾；

如同聚物加尾，加銜接物或人工接頭，PCR法引入酶切位點等，可以獲得相應的黏末端，然後進行連接，此為修飾黏末端連接。

四、導入受體細胞：

載體DNA分子上具有能被原核宿主細胞識別的復制起始位點，因此可以在原核細胞如大腸桿菌中復制，重組載體中的目的基因隨同載體一起被擴增，最終獲得大量同一的重組DNA分子。

五、重組子的篩選：

從不同的重組DNA分子獲得的轉化子中鑒定出含有目的基因的轉化子即陽性克隆的過程就是篩選。發展起來的成熟篩選方法如下：

（1）插入失活法：外源DNA片段插入到位於篩選標記基因（抗生素基因或β-半乳糖苷酶基因）的多克隆位點後，會造成標記基因失活，表現出轉化子相應的抗生素抗性消失或轉化子顏色改變，通過這些可以初步鑒定出轉化子是重組子或非重組子。常用的是β-半乳糖苷酶顯色法即藍白篩選法（白色菌落是重組質粒）。

（2）PCR篩選和限制酶酶切法：提取轉化子中的重組DNA分子作模板，根據目的基因已知的兩端序列設計特異引物，通過PCR技術篩選陽性克隆。PCR法篩選出的陽性克隆，用限制性內切酶酶切法進一步鑒定插入片段的大小。

（3）核酸分子雜交法：制備目的基因特異的核酸探針，通過核酸分子雜交法從眾多的轉化子中篩選目的克隆。目的基因特異的核酸探針可以是已獲得的部分目的基因片段,或目的基因表達蛋白的部分序列反推得到的一群寡聚核苷酸,或其它物種的同源基因。

（4）免疫學篩選法：獲得目的基因表達的蛋白抗體，就可以採用免疫學篩選法獲得目的基因克隆。這些抗體即可是從生物本身純化出目的基因表達蛋白抗體，也可從目的基因部分ORF片段克隆在表達載體中獲得表達蛋白的抗體。

(5)基因的操作方法有哪些擴展閱讀：

基因克隆的注意事項：

1、平端連接：DNA連接酶可催化相同和不同限制性核酸內切酶切割的平端之間的連接。原則上講，限制酶切割DNA後產生的平端也屬配伍末端，可彼此相互連接；若產生的粘性末端經特殊酶處理，使單鏈突出處被補齊或削平，變為平端，也可實行平端連接。

2、加尾連接：同聚物加尾連接是利用同聚物序列，如多聚A與多聚T之間的退火作用完成連接。在末端轉移酶作用下，在DNA片段端製造出粘性末端，而後進行粘性末端連接。這是一種人工提高連接效率的方法，也屬於粘性末端連接的一種特殊形式。

3、人工接頭連接：對平端DNA片段或載體DNA，可在連接前將磷酸化的接頭(linker)或適當分子連到平端，使產生新的限制性內切酶位點。再用識別新位點的限制性內切酶切除接頭的遠端，產生粘性末端。

⑥ 基因工程的過程是怎樣操作的

基因工程所涉及的過程可用「分（或合成）、切、連、轉、選、鑒」六個字表示。

分（或合成）是指DNA的制備，包括從生物體中分離或人工合成；切是在體外將DNA進行切割，使之片段化或線性化；連是在體外將不同來源的DNA分子重新連接起來，構建重組DNA分子；轉是將重組連接的DNA分子通過一定的方法重新送入細胞中進行擴增和表達；選是從轉化的群體中將所需要的目的克隆挑選出來；鑒就是對篩選出來的重組體進行鑒定。

圖4-1：基因工程的操作過程

⑦ 基因工程的操作過程的主要步驟包括哪些

基因工程的操作過程的主要步驟：

切、接、轉、增、篩（檢）

1. 切：獲得DNA片段，取得目的基因；載體的選擇制備。

   方法：從生物基因組中分離得到——基因組DNA——>酶切產物

   從總RNA重分離得到mRNA,再逆轉錄得到cDNA

   人工合成——化學合成；PCR（聚合酶鏈式反應）

2. 接：DNA片段和載體DNA在體外鏈接，形成重組子。

3. 轉：將重組的DNA進入宿主細胞。

   方法：轉化——某一基因型細胞從周圍介入中吸收另一基因型細胞的DNA，而使其基因型和表型發生相應變化的形象；轉染——出去蛋白質外殼的病毒核酸感染細胞或原生質體的過程；轉導——用噬菌體做載體，將一個細胞的基因傳遞給另一個細胞的過程。還有顯微注射等。

4. 增：培養已轉化細胞，使目的基因在其中進行復制，擴增，並將其整合到手提細胞的基因組中。

5. 篩、檢：重組子的篩選與鑒定。篩選和鑒定轉化細胞，獲得外援基因高效表達的基因工程菌或細胞。
   

⑧ 簡述基因工程操作的幾個步驟

基因操作的基本步驟
進行基因操作一般要經歷四個基本步驟，也就是基因操作的「四步曲」。
提取目的基因
基因操作的第一步，是取得人們所需要的特定基因，也就是目的基因(如圖)。如前
面提到的蘇雲金芽孢桿菌中的抗蟲基因，還有植物的抗病(抗病毒、抗細菌)基因、
種子的貯藏蛋白的基因，以及人的胰島素基因、干擾素基因等，都是目的基因。
要從浩瀚的「基因海洋」中獲得特定的目的基因，猶如大海撈針，是十分不易的。科學家們經過不懈地探索，想出了許多辦法，概括地說，主要有兩條途徑：一條是從供體細胞的dna中直接分離基因；另一條是人工合成基因。
直接分離基因最常用的方法是「鳥槍法」，又叫「散彈射擊法」。這種方法猶如用獵槍發射的散彈打鳥，無論哪一顆彈粒擊中目標，都能把鳥打下來。鳥槍法的具體做法是：用限制酶將供體細胞中的dna切成許多片段，將這些片段分別載入運載體，然後通過運載體分別轉入不同的受體細胞，讓供體細胞所提供的dna(外源dna)的所有片段分別在各個受體細胞中大量復制(在遺傳學中叫做擴增)，從中找出含有目的基因的細胞，再用一定的方法把帶有目的基因的dna片段分離出來。如許多抗蟲、抗病毒的基因都可以用上述方法獲得。
用「鳥槍法」獲取目的基因的缺點是工作量大，具有一定的盲目勝。又由於真核細胞的基因含有不表達的dna片段，不能直接用於基因的擴增和表達，因此，在獲取真核細胞中的目的基因時，一般是用人工合成基因的方法。
目前人工合成基因的方法主要有兩條途徑。一條途徑是以目的基因轉錄成的信使rna為模板，反轉錄成互補的單鏈dna，然後在酶的作用下合成雙鏈dna，從而獲得所需要的基因。另一條途徑是根據已知的蛋白質的氨基酸序列，推測出相應的信使rna序列，然後按照鹼基互補配對原則，推測出它的結構基因的核苷酸序列，再通過化學的方法，以單核苷酸為原料合成目的基因(如圖)。如人的血紅蛋白基因、胰島素基因等就可以通過人工合成基因的方法獲得。

⑨ 基因工程的基因操作步驟

①．從細胞和組織中分離DNA；
②．限制性內切酶酶切DNA分子，制備DNA片段；
③．將酶切DNA分子與載體DNA連接，構建能在宿主細胞內自我復制的重組DNA分子；
④．把重組DNA分子導入宿主受體細胞，復制；
⑤．重組DNA隨宿主細胞的分裂而分配到子細胞，建立無性繁殖系(clone)或發育成個體；
⑥．從細胞群體中選出所需要的無性繁殖系，並使外源基因在受體細胞中正常表達，翻譯成蛋白質等基因產物、回收；或篩選出獲得定向性狀變異的個體。
簡單理解就是
目的基因的獲取——適當基因表達載體的構建——目的基因的導入受體——轉化受體的轉基因檢測