培養基的配製方法有哪些

『壹』 培養基要怎樣配製

配製培養基前，要洗凈備齊以下器具，主要包括不同型號的燒杯、容量瓶、移液管、滴管、玻棒、三角瓶以及培養基分裝器等。

用於配製培養基的水最好是蒸餾水或無離子水，精細的試驗須用重蒸餾水。化學葯品應採用分析純AR（二級）或化學純CP（三級），以免雜質對培養物造成不利影響。葯品的稱量及定容要准確，不同化學葯品的稱量需使用不同的葯匙，避免葯品的交叉污染與混雜。

『貳』 培養基的配製

培養基的配製：

1、稱量和熬煮

按培養基配方逐一稱取去皮土豆。土豆切成小塊放入鍋中，加水1000ml，在加熱器上加熱至沸騰，維持20-30min，用可用2層紗布趁熱在量杯上過濾，濾渣棄取。

2、加熱溶解

把濾液放入鍋中，加入葡萄糖20g，瓊脂15～20g(提前搞碎)，然後放在石棉網上，小火加熱，並用玻棒不斷攪拌，以防瓊脂糊底或溢出，待瓊脂完全溶解後，再補充水分至所需量。

3、分裝

按實訓要求，將配製的培養基分裝入試管或500ml三角瓶內。分裝時可用三角漏斗以免使培養基沾在管口或瓶口上造成污染。

4、加棉塞

培養基分裝完畢後，在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或試管帽等)，以阻止外界微生物進入培養基內造成污染，並保證有良好的通氣性能。

5、包紮

加塞後，將全部試管用麻繩或橡皮筋捆好，再在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞，其外再用一道線繩或橡皮筋紮好，用記號筆註明培養基名稱、組別、配製日期。

培養基配製注意事項：

1、培養基經滅菌後，必須放在37C溫箱培養24h，無菌生長者方可使用。

2、PDA培養基一般不需要調pH。對於要調節pH的培養基，一般用pH試紙測定其pH。如果培養基偏酸或偏鹼時，可用lmol/LNaOH或lmol/LHCL溶液進行調節。

3、調節時應逐滴加入NaOH或HCl溶液，防止局部過酸或過鹼破壞培養基成分。

4、培養基在使用時也可以做成不含瓊脂的液體培養基，用於菌類的震盪培養。

5、培養基也可以加入氯黴素或土黴素，加入量為0.2g/L培養基，主要是為了抑制細菌的生長，減少干擾性。

(2)培養基的配製方法有哪些擴展閱讀

培養基，是指供給微生物、植物或動物（或組織）生長繁殖的，由不同營養物質組合配製而成的營養基質。

一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽（包括微量元素）、維生素和水等幾大類物質。培養基既是提供細胞營養和促使細胞增殖的基礎物質，也是細胞生長和繁殖的生存環境。

培養基種類很多，根據配製原料的來源可分為自然培養基、合成培養基、半合成培養基。

根據物理狀態可分為固體培養基、液體培養基、半固體培養基；根據培養功能可分為基礎培養基、選擇培養基、加富培養基、鑒別培養基等。

根據使用范圍可分為細菌培養基、放線菌培養基、酵母菌培養基、真菌培養基等。培養基配成後一般需測試並調節pH，還須進行滅菌，通常有高溫滅菌和過濾滅菌。

培養基由於富含營養物質，易被污染或變質。配好後不宜久置，最好現配現用。

『叄』 怎樣配製培養基

通常在配製培養基前把各種試劑配成一定濃度的母液貯存備用根據試驗設計的要求，分別用帶刻度的容器吸取所需的母液，放入干凈的燒杯中，母液混合加水定容至總量1/3的體積，備用;將稱好的蔗糖和瓊脂用占總量2/3的純凈水加熱溶解，待瓊脂全部溶化完全後，熄滅火源，將營養液倒入蔗糖瓊脂液中，充分攪勻後，即為培養基用稀酸或稀鹼液調整培養基酸鹼度至pH6，培養基高壓滅菌後pH會下降0.2左右，達到一般材料培養所需要的pH5.8配好的培養基趁熱分裝入培養瓶中，培養基的量大約為11.5毫米厚

『肆』 培養基的配製是怎麼樣的

1.培養基種類及成分

培養基根據其物理性狀大致分成兩類，即固體和液體培養基。在培養基中加入一定量的凝固劑（如瓊脂、明膠等）即為固體培養基，而不加入凝固劑的即為液體培養基，具體運用上應視培養目的要求不同分別選擇採用。

無論是固體還是液體培養基，其基本成分是類似的，一般可大致分為兩個部分，即基本培養基如MS、B5、N6、Nitsh等和附加成分，如激素和天然附加物等，其基本成分如表1、表2。

表2 幾種培養基附加成分表

2.培養基的配製

（1）母液的配製與保存 由於培養不同植物，需要配製不同的培養基。為了減少工作量，可先把葯品配成母液（即濃縮液），一般擴大10～100倍，其中大量元素倍數略低，一般為10～20倍，微量元素和有機成分及鐵鹽等可擴大50～100倍。母液的配製及保存應注意以下幾個方面：①葯品稱量應精確，尤其微量元素化合物應精確至0.0001克，大量元素化合物可精確至0.01克。②配製母液的濃度適當，倍數不宜過大，一是長時間保存後易沉澱，二是濃度大，用量就少，在配製培養基時易影響精確度。③母液貯藏也不宜過長，一般幾個月左右，在配好的母液容器上應註明配製日期，以便定期檢查，如出現渾濁、沉澱及黴菌等現象，就不能使用。④母液應在2～4℃的冰箱內保存。

（2）培養基的配製 首先要根據培養基配方，算好母液吸取量，並按順序吸取，然後加入蔗糖溶液，並加入蒸餾水定容至所需體積，並用0.1～1摩爾/升的鹽酸或氫氧化鈉調整pH，加入瓊脂加熱溶化，配製好的培養基要趁熱分注，倒入試管、三角瓶等培養器皿中，一般至容器1/4～1/5左右，最後加塞或封口准備消毒。

（3）培養基的消毒 由於培養基內有豐富營養物質，極利於細菌和真菌繁殖，造成污染，影響組培的成功，因此培養基消毒是必不可少的一個環節。一般採用高溫高壓消毒和過濾消毒兩種方法。

高溫高壓消毒：一般用消毒鍋消毒，把裝有培養基的培養器皿先放入消毒簍中，再放入加有水的消毒鍋內，注意容器不能裝得過滿，以免影響鍋內蒸汽循環。裝好後將鍋蓋擰緊，加熱，並打開放氣閥，待水煮沸後，放氣3～5分鍾排出鍋內冷空氣，即可關上放氣閥並繼續加熱，使鍋內保持108千帕壓力、溫度120℃左右，大約15～20分鍾即可。

過濾消毒：一些易受高溫破壞的培養基成分如引哚乙酸（IAA）、引哚丁酸（IBA）、玉米素（ZT）等，不宜用高溫高壓法消毒，則可用過濾消毒後加入至高溫高壓消毒的培養基中，過濾消毒可用細菌過濾消毒器，通過其中的0.45微米孔徑的濾膜將直徑較大的細菌等濾去，過濾消毒應在無菌室或超凈工作台上進行，以避免污染培養基。

『伍』 培養基怎麼配置

（1）配製母液。把培養基m的必需元素按原配方量的50倍/100倍或1000倍稱量後製成一種濃溶液，這種濃溶液叫母液在配製培養基時按比例分別量取母液稀釋到所需的濃度即可母液配好後貼上標簽，放在0～4℃的冰箱中可使用半年到1年，這樣傲可節省許多時間可能產生化學反應的或溶解後產生沉澱的不能放在同一個容器m配製母液要用重蒸餾水葯物要使用分析純或等級較高的化學純葯物的稱量和葯液的定容都要准確。

母液①：硫酸鎂18.5克．硝酸銨82.5克．硝酸鉀95.0克；加水定容到1000毫升，濃度為培養基的50倍，配1升培養基時量取20毫升母液

母液②：氯化鈣22.0克加水定容到500毫升，濃度為培養基的100倍，配1升培養基時量取10毫升母液

母液③：磷酸二氫鉀8.5克加水定容到500毫升，濃度為培養基的100倍，配1升培養基時量取10毫升母液。

母液④；乙二胺四乙酸二鈉3.73克硫酸亞鐵2.78克，加水定容到1000毫升，濃度為培養基的100倍，配1升培養基時量取10毫升母液

母液⑤：硼酸620毫克，硫酸錳2230毫克，硫酸鋅860毫克，硫酸銅2.5毫克，碘化鉀83毫克，鉬酸鈉25毫克，氯化鈷2.5毫克，加水定容到1000毫升，濃度為培養基的100信，配1升培養基時量取10毫升母液。

母液⑥：肌醇5克，甘氨酸100毫克，煙酸25毫克，鹽酸吡哆醇25毫克，鹽酸硫胺素5毫克，加水定容到500毫升，濃度為培養基的100倍，配1升培養基時量取10毫升母液

（2）配製培養基。配製每1000毫升培養基．稱取6～10克瓊：脂作凝固劑，具體按配方要求稱量，放在水浴鍋上慢慢溶解，先在量筒內放入一定量的水，按照母液順序和規定量，量取母液，當母液加完後，根據需要每升培養基再加入生長調節物質如吲哚乙酸或萘乙酸等，細胞分裂素類0.04～10毫克，細胞分裂素應用最多的是6-苄基腺嘌呤，加完後倒入已熔化的瓊脂中，每1000毫升培養基加入蔗糖30克或根據要求確定，定容到所需的體積，繼續加溫，直到瓊脂完全熔解，用鹽酸或氫氧化鈉對培養基的pH進行調節，多數培養基的pH在5．4～6.0，MS培養基的pH為5.7。

將配好的培養基趁熱倒入培養容器中，培養基占容器體積的1／4～1／3不要將培養基沾到容器壁上，否則容易被雜菌感染，然後及時加蓋，進行高壓滅菌，滅菌時要按高壓滅菌鍋的操作規程使用．在121℃、壓力111千帕下維持15～20分鍾，溫度和時間都要嚴格控制，到時間後立即切斷電源，當高壓鍋內壓力降到常壓後，開啟放氣閥，打開鍋蓋，取出滅菌好的培養基，放在接種室中培養3天，沒被感染後才能用來組織培養

『陸』 配製培養基的步驟

1、配製溶液

向容器內加入所需水量的一部分，按照培養基的配方，稱取各種原料，依次加入使其溶解，最後補足所需水分。對蛋白腖、肉膏等物質，需加熱溶解，加熱過程所蒸發的水分，應在全部原料溶解後加水補足。

配製固體培養基時，先將上述已配好的液體培養基煮沸，再將稱好的瓊脂加入，繼續加熱至完全融化。並不斷攪拌，以免瓊脂糊底燒焦。

2、調節pH值 

用pH試紙（或pH電位計、氫離子濃度比色計）測試培養基的pH值，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH進行調節，直到調節到配方要求的pH值為止。

3、過濾

用濾紙、紗布或棉花趁熱將已配好的培養基過濾。用紗布過濾時，最好折疊成六層，用濾紙過濾時，可將濾紙折疊成瓦棱形，鋪在漏鬥上過濾。

4、分裝

已過濾的培養基應進行分裝。如果要製作斜面培養基，須將培養基分裝於試管中。如果要製作平板培養基或液體、半固體培養基，則須將培養基分裝於錐形瓶內。

分裝時，一手捏松彈簧夾，使培養基流出，另一隻手握住幾支試管或錐形瓶，依次接取培養基。分裝時，注意不要使培養基粘附管口或瓶口，以免浸濕棉塞引起雜菌污染。

裝入試管的培養基量，視試管和錐形瓶的大小及需要而定。一般製作斜面培養基時，每隻15×150毫米的試管，約裝3～4毫升（1/4～1/3試管高度），如製作深層培養基，每隻20×220毫米的試管約裝12～15毫升。每隻錐形瓶裝入的培養基，一般以其容積的一半為宜。

5、加棉塞 

分裝完畢後，需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是過濾空氣，避免污染。棉塞應採用普通新鮮、乾燥的棉花製作，不要用脫脂棉，以免因脫脂棉吸水使棉塞無法使用。

製作棉塞時，要根據棉塞大小將棉花鋪展成適當厚度，揪取手掌心大小一塊，鋪在左手拇指與食指圈成的圓孔中，用右手食指插入棉花中部，同時左手食指與姆指稍稍緊握，就會形成1個長棒形的棉塞。

棉塞作成後，應迅速塞入管口或瓶口中，棉塞應緊貼內壁不留縫隙，以防空氣中微生物沿皺折侵入。棉塞不要過緊過松，塞好後，以手提棉塞、管、瓶不下落為合適。棉塞的2/3應在管內或瓶內，上端露出少許棉花便於拔取。塞好棉塞的試管和錐形瓶應蓋上厚紙用繩捆札，准備滅菌。

6、製作斜面培養基和平板培養基

培養基滅菌後，如製作斜面培養基和平板培養基，須趁培養基未凝固時進行。

(1)製作斜面培養基。在實驗台上放1支長0.5～1米左右的木條，厚度為1厘米左右。將試管頭部枕在木條上，使管內培養基自然傾斜，凝固後即成斜面培養基。

(2)製作平板培養基。將剛剛滅過菌的盛有培養基的錐形瓶和培養皿放在實驗台上，點燃酒精燈，右手托起錐形瓶瓶底，左手拔下棉塞，將瓶口在酒精燈上稍加灼燒，左手打開培養皿蓋，右手迅速將培養基倒入培養皿中，每皿約倒入10毫升，以鋪滿皿底為度。

鋪放培養基後放置15分鍾左右，待培養基凝固後，再5個培養皿一疊，倒置過來，平放在恆溫箱里，24小時後檢查，如培養基未長雜菌，即可用來培養微生物。