Ⅰ 你好,考馬斯亮藍法測定蛋白的方法學驗證,在做准確度驗證時,關於回收率應該怎麼驗證求教下具體方法。
首先,考馬斯亮藍法測定蛋白質含量時,准確度是由一定范圍的,濃度超出范圍肯定不準。另外,你在8ug/ml時的收率74%是否稀釋測定?最後,高濃度和低濃度回收效率也是有一定范圍的,低了高了都不好,最佳回收效率也是在適當濃度下,如果你有興趣可以做一下梯度實驗來證實我的判定
回收率可以通過不同蛋白濃度下檢測回收率,比如你做的1.25ug/ml時回收率有95%左右,8ug/ml時為74%,由此你可以在1.25ug/ml左右濃度設計,比方0.1-8ug/ml都可以,安排幾個濃度梯度,主要分析0.1-1.25ug/ml和1.25-8ug/ml這兩個范圍回收率是什麼樣的變化情況。之後,確定在哪個濃度下回收率最佳,重復幾次後統計學分析,最後通過圖表反應,加上誤差棒,這就是一個可以寫進論文的完整的實驗內容了。
Ⅱ 如何測定液相色譜的回收率
一定是用液相色譜測定的峰面積計算。通常液相不能用標准曲線計算峰面積,原因在於液相色譜每次配的流動相不可能一樣,包括儀器的狀態,檢測器的檢測靈敏度都不能重復,因此液相從不用標准曲線計算,標准曲線只能驗證儀器的線性范圍。
Ⅲ 方法驗證的回收率試驗達不到回收率規定標准有哪些原因
伊立替康含量方法驗證: 樣品目標濃度:1mg/ml 樣品儲備液:樣品2mg/ml 標准品儲備液:標准品1.6mg/ml(1) 標准品儲備液:標准品2.0mg/ml(2) 標准品儲備液:標准品2.4mg/ml(3) 配製方法: 峰面積: 結果: 80%回收率: 樣品:1ml樣品儲備液+1ml稀釋劑 A樣品 { ( A 樣品+標准 )-A樣品} / A標准=90% 標准:1ml的(1)+1ml稀釋劑 A標准 樣品+標准:1ml的(1)+1ml樣品儲備液 A 樣品+標准 100%回收率: 樣品:1ml樣品儲備液+1ml稀釋劑 標准:1ml的(2)+1ml稀釋劑 樣品+標准:1ml的(2)+1ml樣品儲備液 120%回收率: 樣品:1ml樣品儲備液+1ml稀釋劑 標准:1ml的(3)+1ml稀釋劑 樣品+標准:1ml的(3)+1ml樣品儲備液結果:{ ( A 樣品+標准 )-A樣品} / A標准=90%(標准 98%-102%)濃度過高會不會超過線性范圍不再標准之內
Ⅳ 請教分析方法驗證中准確度試驗
任何一種分析測定方法,根據其使用的對象和要求,都應有相應的效能指標。一般,常用的分析效能評價指標包括:精密度、准確度、檢測限、定量限、選擇性、線性與范圍、重現性、耐用性等;對於生物樣品中葯物分析方法評價的標准與上述的評價指標相比較,有共同之點也有特殊的要求。測定方法的效能指標可以作為對分析測定方法的評價尺度,也可以作為建立新的測定方法的實驗研究依據。准確度(Accuracy)是指測得結果與真實值接近的程度,表示分析方法測量的正確性。由於逗其實值地無法准確知道,因此,通常採用回收率試驗來裴示。
Ⅳ 請問在葯物分析中怎麼算方法回收率和方法精密度急!!
方法回收率就是相對回收率~~同理方法精密度就是相對精密度...
1.絕對回收率=提取回收率=萃取回收率,是用葯品加血漿經萃取處理後的進樣峰面積除以該葯品溶液直接進樣峰面積的比值,一般來說,該比值不可能超過100%,能做到80%就不錯了。以前國家對絕對提取率還有些要求,現在隨著lc-ms的應用,最低定量限已經能做到很低,也就不需要再對絕對回收率提具體要求,只要相對回收率滿意就可以。
2.相對回收率=方法學回收率,是血漿處理後的進樣峰面積代入血漿標准曲線,計算所得濃度除以真實血樣濃度.該比值在100%左右.一般要求高、中濃度點在15%以內,低濃度點可適當放寬。
(1)舉例:10ng A葯加入1ml空白血漿(10ng/ml),經萃取處理後用0.5ml流動相復溶,進樣所得峰面積8000;配製對照溶液(濃度10ng/0.5ml=20ng/ml),進樣所得峰面積假設為10000.那麼萃取回收率為8000/10000=80%.
(2)舉例:上述經萃取處理的血漿溶液(10ng/ml)峰面積8000,代入標准曲線計算,假如計算所得濃度為8.5ng/ml,相對回收率則為8.5/10=85%.
Ⅵ 回收率怎麼算
回收率的計算方式是有一定技巧了的。
回收率包括絕對回收率和相對回收率。絕對回收率考察的是經過樣品處理後能用於分析的葯物的比例。因為不論是生物基質還是制劑輔料中的葯物,經過樣品處理都有一定的損失。
相對回收率嚴格來說有兩種。一種是回收試驗法,另一種是加樣回收試驗法。前者是在空白基質中加入葯品,標准曲線也是同此,這種測定用得較多,但有標准曲線重復測定的嫌疑。第二種是在已知濃度樣品中加入葯物,來和標准曲線比,標准曲線也是在基質中加葯物。
回收率的術語解釋:
絕對回收率因為不論是生物基質還是制劑輔料中的葯物,經過樣品處理都有一定的損失。作為一個分析方法,絕對回收率一般要求大於50%才行。
它是在空白基質中定量加入葯物,經處理後與標准品的比值。標准品為流動相直接稀釋而來,而不是同樣品一樣處理。若一樣,只是不加基質來處理,可能會有很多影響因素被此屏蔽掉。如全部轉移有機相時只轉移了98%等,也就因此失去了絕對回收率的考察初衷。
相對回收率主要考察准確度。准確度系指用該方法測定的結果與真實值或認可的參考值之間接近的程度。有時也稱真實度,一定的准確度為定量測定的必要條件,因此涉及到定量測定的檢測項目均需要驗證准確度。
Ⅶ 求解答在線等 相對回收率的公式是什麼 絕對回收率的又是什麼 RSD又怎麼算
絕對回收率(又稱提取回收率)考察測定結果與「真值」的接近程度,等於從生物樣本基質中回收得到目標物質的響應值 ÷ 純標准品產生的響應值 x100%。應選用高、中、低三種濃度分別進行考察,絕對回收率一般要求在50%~80%。
相對回收率(又稱方法回收率),等於從生物樣本基質中回收得到目標物質的響應值 ÷ 加入到生物基質中已知量的標准品產生的響應值 x100%。該評價指標已扣除了目標葯物在樣品的前處理過程損失而造成的系統誤差。高、中濃度點測得的相對回收率應在85~115%,低濃度(定量限)應在80~120%。
相對標准差 Relative Standard Deviation 是標准偏差與測量結果算術平均值的比值,即 RSD=S/X * 100%,其中S為標准偏差,X為測量平均值。
Ⅷ 實驗中樣品的回收率怎麼計算
加入已知濃度A的待測物質,用該方法測定其濃度值B,回收率=(A/B)×100%.註:已知濃度A應在該檢測方法的可以檢測濃度范圍內。
加標回收率,一般是測定樣品中待測物質的濃度為C;再取另一份樣品,加入定量待測物質(定量加入待測物質的理論濃度為E)(加入待測物質的量最好與樣品中待測物質的量一樣)測定其濃度為D,加標回收率=((D-C)/E)×100%
絕對回收率
絕對回收率因為不論是生物基質還是制劑輔料中的葯物,經過樣品處理都有一定的損失。作為一個分析方法,絕對回收率一般要求大於50%才行。它是在空白基質中定量加入葯物,經處理後與標准品的比值。標准品為流動相直接稀釋而來,而不是同樣品一樣處理。
空白加標回收:在沒有被測物質的空白樣品基質中加入定量的標准物質,按樣品的處理步驟分析,得到的結果與理論值的比值即為空白加標回收率。
樣品加標回收:相同的樣品取兩份,其中一份加入定量的待測成分標准物質;兩份同時按相同的分析步驟分析,加標的一份所得的結果減去未加標一份所得的結果,其差值同加入標准物質的理論值之比即為樣品加標回收率。
Ⅸ 用原子吸收分光光度計測飲料的RSD值和回收率怎麼測最好詳細點的
答
【1】做6個以上的平行樣,就可以求出平均值、RSD值;
【2】採用標准加入法,就可以計算出回收率。
Ⅹ 怎麼做回收率實驗
回收率實驗是在空白基質中定量加入葯物,經處理後與標准品的比值。標准品為流動相直接稀釋而來,而不是同樣品一樣處理。若一樣,只是不加基質來處理,可能會有很多影響因素被此屏蔽掉。如全部轉移有機相時只轉移了98%等。也就因此失去了回收率的考察初衷。
作為一個分析方法,回收率一般要求大於50%才行。不論是生物基質還是制劑輔料中的葯物,經過樣品處理都有一定的損失。
(10)方法驗證回收率中的測得值怎麼看擴展閱讀
回收率主要應用:
氣源單位運輸液化天然氣是使用槽車進行運輸的,槽車在氣源廠出車前進行稱重,此為來貨重量 ;而槽車到達天然氣企業並完成卸車後再進行稱重,此為實收重量,液化天然氣簡稱LNG,其主要特性為-162℃,為液態,而隨著溫度的上升,可轉換為氣態 ;反之,氣態的天然氣隨溫度的下降,可轉換為液態。