『壹』 過氧化氫酶活性的測定 高錳酸鉀滴定法 紫外分光光度法各有什麼優缺點
過氧化氫酶活性測定，是根據過氧化氫酶（PHD）能催化過氧化氫生成氧的特性，常用碘量法和電極法。
前者通過測定PHD催化H2O2反應後剩餘的H2O2與碘化物作用生成碘量的變化計算PHD活性。該法設備簡易，但操作復雜，誤差較大。後者的原理是H2O2為有電活性物質，但經PHD催化後其產物為無電活性物質，用鉑電極來測量PHD催化前後電流變化引起電壓的變化，測出PHD活性大小。還可應用分光光度法、瓦氏呼吸儀檢壓法、硫酸高鈰法等。紫外-可見分光光度法是在190～800nm波長范圍內測定物質的吸光度，用於鑒別、雜質檢查和定量測定的方法。當光穿過被測物質溶液時，物質對光的吸收程度隨光的波長不同而變化。因此，通過測定物質在不同波長處的吸光度，並繪制其吸光度與波長的關系圖即得被測物質的吸收光譜。
『貳』 說明測定過氧化氫酶活力的方法有哪些，原理各是什麼
過氧化氫酶的活性測定——紫外吸收法
【原理】
H2O2在240nm波長下有強烈吸收,過氧化氫酶能分解過氧化氫,使反應溶液吸光度(A240)隨反應時間而降低.根據測量吸光率的變化速度即可測出過氧化氫酶的活性.
【儀器與用具】
紫外分光光度計；離心機；研缽；250ml容量瓶1個；0.5ml刻度吸管2支,2ml刻度吸管1支；10ml試管3支；恆溫水浴；
【試劑】
0.2mol/L pH7.8磷酸緩沖液（內含1%聚乙烯吡咯烷酮）；
0.1mol/L H2O2（用0.1mol/L高錳酸鉀標定）.
【方法】
1.酶液提取：稱取新鮮小麥葉片或其它植物組織0.5g置研缽中,加入2～3ml 4℃下預冷的pH7.0磷酸緩沖液和少量石英砂研磨成勻漿後,轉入25ml容量瓶中,並用緩沖液沖洗研缽數次,合並沖洗液,並定容到刻度.混合均勻將量瓶置5℃冰箱中靜置10min,取上部澄清液在4000rpm下離心15min,上清液即為過氧化氫酶粗提液.5℃下保存備用.
『叄』 除高錳酸鉀外，還有什麼方法可以測定過氧化氫的含量
過氧化氫(Hydrogen peroxide)
化學式： H2O2過氧化氫含量測定,過氧化氫含量,H2O2過氧化氫含量測定,過氧化氫含量,H2O
相對分子質量： 34.01
結構式:
說到過氧化氫，可能很多小夥伴會想就是實驗室里那種俗稱雙氧水，外觀為無色透明需要避光的液體。它是一種強氧化劑，其水溶液適用於醫用傷口消毒及環境消毒和食品消毒。然鵝，過氧化氫可沒這么簡單，它在生物體內廣泛存在，而且是一種關鍵的調節因子。過氧化氫含量與細胞狀態有密切關系呢。
可能有人不理解這種強氧化劑咋會在生物體內存在，我們就來說說：
過氧化氫是生物體內最常見的活性氧分子，是一種活性氧代謝的副產物，主要由 SOD 和 XOD 等催化產生，由 CAT 和 POD 等催化降解。過氧化氫不僅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互轉化的樞紐。一方面，H2O2 可以直接或間接地氧化細胞內核酸，蛋白質等生物大分子，並使細胞膜遭受損害，從而加速細胞的衰老和解體；另一方面 過氧化氫也是許多氧化應急反應中的關鍵調節因子。過氧化氫可以激活NF-κB等因子，這些過氧化氫相關的信號途徑和哮喘、炎症性關節炎、動脈硬化以及神經退行性疾病等許多疾病相關。過氧化氫也和細胞凋亡、細胞增殖等密切相關。
看來過氧化氫在生物體內確實發揮重要作用呢，所以過氧化氫含量的測定就有重要的意義。我們下面簡單介紹幾種常用的測定過氧化氫的方法：
一、二甲酚橙（xylenol orange）法
這種方法在國內應用比較廣泛，有明顯的優勢。
原理：過氧化氫氧化二價鐵離子產生三價鐵離子，二甲酚橙（xylenol orange）高選擇性的結合三價鐵離子形成有色（紫色）產物，可用比色法在580nm處測定。從而實現對過氧化氫濃度的測定。
由於二甲酚橙（xylenol orange）作為一種金屬離子絡合指示劑，與三價鐵離子的結合有很高的選擇性，也就是該方法有很好的特異性。同時該反應需要在酸性條件下進行，可以消除很多物質的干擾。
二、硫酸鈦比色法
這也是國內一種比較常見的方法。
原理：H2O2與硫酸鈦生成黃色的過氧化鈦復合物，在 415nm 有特徵吸收。
該方法原理簡單易懂，但樣本處理需要自備丙酮用來破碎細胞、勻漿組織和稀釋液體樣本。丙酮易揮發，而且易燃有毒，給操作帶來一定困難，需要做好防護措施。
三、探針法
這是目前國外一種常用的測定過氧化氫含量的方法。
原理：在辣根過氧化物酶（HRP）存在的條件下，特異的 探針與過氧化氫反應，生成有色產物在570nm有最大光吸收，也可產生紅色熒光（Ex/Em=535/587 nm）。比色法與熒光法靈敏度不同，需要配製不同的標准曲線。
該方法需要用到特異性的熒光探針，反應原理較前面2種復雜，但靈敏度很高，在熒光法中靈敏度可達40 nM。
四、過氧化物酶底物法
這是一種國外不太常見的方法。
原理：用一種獨特的過氧化物酶底物測定溶液和細胞提取物中的過氧化氫 ，在辣根過氧化物酶（HRP）存在的條件下，過氧化氫氧化無色的過氧化物酶底物，產生強烈的藍色。在 650nm有特徵吸收。
『肆』 測定過氧化氫酶活力的方法有哪些，原理各是什麼
過氧化氫酶的活性測定——紫外吸收法
【原理】
H2O2在240nm波長下有強烈吸收,過氧化氫酶能分解過氧化氫,使反應溶液吸光度(A240)隨反應時間而降低.根據測量吸光率的變化速度即可測出過氧化氫酶的活性.
【儀器與用具】
紫外分光光度計；離心機；研缽；250ml容量瓶1個；0.5ml刻度吸管2支,2ml刻度吸管1支；10ml試管3支；恆溫水浴；
【試劑】
0.2mol/L
pH7.8磷酸緩沖液（內含1%聚乙烯吡咯烷酮）；
0.1mol/L
H2O2（用0.1mol/L高錳酸鉀標定）.
【方法】
1.酶液提取：稱取新鮮小麥葉片或其它植物組織0.5g置研缽中,加入2～3ml
4℃下預冷的pH7.0磷酸緩沖液和少量石英砂研磨成勻漿後,轉入25ml容量瓶中,並用緩沖液沖洗研缽數次,合並沖洗液,並定容到刻度.混合均勻將量瓶置5℃冰箱中靜置10min,取上部澄清液在4000rpm下離心15min,上清液即為過氧化氫酶粗提液.5℃下保存備用.
2.測定：取10ml試管3支,其中2支為樣品測定管,1支為空白管,按表40-2順序加入試劑.
表40-2
紫外吸收法測定H2O2樣品液配置表
管
號
S1
S2
S3
粗酶液(ml)
0.2
0.2
0.2
pH7.8磷酸(ml)
1.5
1.5
1.5
蒸餾水(ml)
1.0
1.0
1.0
25℃預熱後,逐管加入0.3ml
0.1mol/L的H2O2,每加完一管立即記時,並迅速倒入石英比色杯中,240nm下測定吸光度,每隔1min讀數1次,共測4min,待3支管全部測定完後,按下式計算酶活性.
3.結果計算：
以1min內A240減少0.1的酶量為1個酶活單位（u）.
過氧化氫酶活性(u/gFW/min)=
式中
A240
=
AS0－
AS0—加入煮死酶液的對照管吸光值；
AS1,
AS2—樣品管吸光值；
Vt—粗酶提取液總體積（ml）；
V1—測定用粗酶液體積（ml）；
FW—樣品鮮重（g）；
0.1—A240每下降0.1為1個酶活單位（u）；
t—加過氧化氫到最後一次讀數時間（min）.
『伍』 過氧化氫酶活性測定
過氧化氫酶的活性測定——紫外吸收法
【原理】
H2O2在240nm波長下有強烈吸收，過氧化氫酶能分解過氧化氫，使反應溶液吸光度(A240)隨反應時間而降低。根據測量吸光率的變化速度即可測出過氧化氫酶的活性。
【儀器與用具】
紫外分光光度計；離心機；研缽；250ml容量瓶1個；0.5ml刻度吸管2支，2ml刻度吸管1支；10ml試管3支；恆溫水浴；
【試劑】
0.2mol/L
pH7.8磷酸緩沖液（內含1%聚乙烯吡咯烷酮）；
0.1mol/L
H2O2（用0.1mol/L高錳酸鉀標定）。
【方法】
1.酶液提取：稱取新鮮小麥葉片或其它植物組織0.5g置研缽中，加入2～3ml
4℃下預冷的pH7.0磷酸緩沖液和少量石英砂研磨成勻漿後，轉入25ml容量瓶中，並用緩沖液沖洗研缽數次，合並沖洗液，並定容到刻度。混合均勻將量瓶置5℃冰箱中靜置10min，取上部澄清液在4000rpm下離心15min，上清液即為過氧化氫酶粗提液。5℃下保存備用。
2.測定：取10ml試管3支，其中2支為樣品測定管，1支為空白管，按表40-2順序加入試劑。
表40-2
紫外吸收法測定H2O2樣品液配置表
管
號
S1
S2
S3
粗酶液(ml)
0.2
0.2
0.2
pH7.8磷酸(ml)
1.5
1.5
1.5
蒸餾水(ml)
1.0
1.0
1.0
25℃預熱後,逐管加入0.3ml
0.1mol/L的H2O2，每加完一管立即記時，並迅速倒入石英比色杯中，240nm下測定吸光度，每隔1min讀數1次，共測4min，待3支管全部測定完後，按下式計算酶活性。
3.結果計算：
以1min內A240減少0.1的酶量為1個酶活單位（u）。
過氧化氫酶活性(u/gFW/min)=
式中
A240
=
AS0－
AS0—加入煮死酶液的對照管吸光值；
AS1,
AS2—樣品管吸光值；
Vt—粗酶提取液總體積（ml）；
V1—測定用粗酶液體積（ml）；
FW—樣品鮮重（g）；
0.1—A240每下降0.1為1個酶活單位（u）；
t—加過氧化氫到最後一次讀數時間（min）。
『陸』 過氧化物酶活性測定的方法有哪些
實驗
48
過氧化物酶活性的測定（比色法）
過氧化物酶是植物體內普遍存在的、活性較高的一種酶，它與呼吸作用、光合作用及生長素的氧化等都有密切關系，在植物生長發育過程中，它的活性不斷發生變化，因此測量這種酶，可以反映某一時期植物體內代謝的變化。
一、原理
在有過氧化氫存在下，過氧化物酶能使愈創木酚氧化，生成茶褐色物質，該物質在
470
nm
處有最大吸收，可用分光光度計測量
470
nm
的吸光度變化測定過氧化物酶活性。
二、實驗材料、試劑與儀器設備
（一）實驗材料
馬鈴薯塊莖。
（二）試劑
1
．
100
mmol
／
L
磷酸緩沖液
pH6.0
（見附錄）。
2
．反應混合液：
100
mmol
／
L
磷酸緩沖液（
pH6.0
）
50
mL
於燒杯中，加入愈創木酚
28
μl
，於磁力攪拌器上加熱攪拌，直至愈創木酚溶解，待溶液冷卻後，加入
30
%
過氧化氫
19
μl
，混合均勻，保存於冰箱中。
（三）儀器設備
分光光度計，研缽，恆溫水浴鍋，
100
mL
容量瓶，吸管，
離心機。
三、實驗步驟
1
．稱取植物材料
1
g
，剪碎，放入研缽中，加適量的磷酸緩沖液研磨成勻漿，以
4000
r
／
min
離心
15
min
，上清液轉入
100
mL
容量瓶中，殘渣再用
5
mL
磷酸緩沖液提取一次，上清液並入容量瓶中，定容至刻度，貯於低溫下備用。
2
．取光徑
1
cm
比色杯
2
只，於
1
只中加入反應混合液
3
mL
和磷酸緩沖液
1mL
，作為對照，另
1
只中加入反應混合液
3
mL
和上述酶液
1mL
（如酶活性過高可稀釋之），立即開啟秒錶記錄時間，於分光光度計上測量波長
470
nm
下吸光度值，每隔
1min
讀數一次。
四、結果計算
以每分鍾吸光度變化值表示酶活性大小，即以
ΔA
470
/[min
•
g
（鮮重）
]
表示之。也可以用每
min
內
A
470
變化
0.01
為
1
個過氧化物酶活性單位（
u
）表示。
過氧化物酶活性
[u/
（
g
•
min
）
]=
式中：
Δ
A
470
——反應時間內吸光度的變化。
W
——植物鮮重，
g
。
V
T
——提取酶液總體積，
mL
。
V
s
——測定時取用酶液體積
,
mL
。
t
——反應時間，
min
。
『柒』 如何測定過氧化氫酶活性
一、目的
過氧化氫酶普遍存在於植物組織中，其活性與植物的代謝強度及抗寒、抗病能力均有關系，故常加以測定。通過實驗可了解過氧化氫酶的作用，並掌握測定過氧化氫酶活性的原理和方法。
二、原理
過氧化氫酶把過氧化氫分解為水和氧，其活性大小，以一定時間內分解的過氧化氫量來表示，當酶與底物（H2O2）反應結束後，用碘量法測定未分解的H2O2量。以鉬酸銨作催化劑，使H2O2與KI反應，放出遊離碘，然後用硫代硫酸鈉滴定碘，其反應式為：
H2O2 + 2KI + H2SO4 —→I2 + K2SO4 + 2H2O
I2 + 2Na2S2O3 —→2NaI + Na2S4O6
根據空白和測定二者硫代硫酸鈉滴定用量之差，即可求出過氧化氫酶分解H2O2的量。
四、實驗步驟
1. 過氧化氫酶的提取
選取甘蔗功能葉片，擦凈去主脈剪成碎片，混勻後迅速稱取1g放入經冷凍過的研缽中，加少量CaCO3粉末及石英砂，並加入3～4ml蒸餾水，在冰浴上研磨至勻漿，用蒸餾水將勻漿通過漏斗洗入100ml容量瓶中，加蒸餾水定容至刻度，搖勻後過濾。然後再取濾液10ml至100ml容量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻即為酶稀釋液。
2. 酶活性測定
2.1取100ml容量瓶4個，編號，向各瓶准確加入稀釋後的酶液10ml，立即向3、4號瓶中加入1.8mol·L－1H2SO4 5ml以終止酶活性，作為空白測定。
2.2將各瓶放在20℃水浴中保溫5～10min（若室溫超過20℃則以室溫為准）。保溫後向各瓶准確加入 0.018％H2O2 5ml, 搖勻並記錄酶促反應開始時間。
2.3將各瓶放在20℃水浴中讓酶與底物（H2O2）作用5min。時間到後迅速取出，立即在1、2號瓶中加入1.8mol·L－1H2SO4 5ml以終止酶活性。
2.4向4個瓶中各加入20％KI 1ml和3滴10％(NH4.)6MO7O4，搖勻，用0.02 mol·L－1 Na2S2O3
滴定至淡黃色後再加入5滴1％澱粉液作指示劑，再用0.02 mol·L－1 Na2S2O3滴定至藍色剛消失為滴定終點，記錄Na2S2O3用量。