1. 什麼是ELISA
ELISA即酶聯免疫吸附測定,指將可溶性的抗原或抗體結合到聚苯乙烯等固相載體上,利用抗原抗體結合專一性進行免疫反應的定性和定量檢測方法。
ELISA應用的范圍很廣,而且正在不斷地擴大,原則上ELISA可用於檢測一切抗原、抗體及半抗原,可以直接定量測定體液中的可溶性抗原。在實際應用方面可用於疾病的臨床診斷、疾病監察、疾病普查、法醫檢查、獸醫及農業上的植物病害的診斷檢定等。
(1)可用於檢測病毒抗體的方法有哪些擴展閱讀 :
ELISA操作步驟復雜,影響反應因素較多,特別是固相載體的包被難達到各個體之間的一致,因此在定量測定中,每批測試均須用一系列不同濃度的參考標准品在相同的條件下製作標准曲線。
測定大分子量物質的夾心法ELISA,標准曲線的范圍一般較寬,曲線最高點的吸光度可接近2.0,繪制時常用半對數值,以檢測物的濃度為橫坐標,以吸光度為縱坐標,將各濃度的值逐點連接,所得曲線一般呈S形,其頭、尾部曲線趨於平坦,中央較呈直線的部分是最理想的檢測區域。
ELISA也可應用於病毒抗體檢測:流感病毒、腮腺炎病毒、麻診、風疹、輪狀病毒、皰疹病毒、巨細胞病毒、EB病毒、腺病毒、腸道病毒、腦炎病毒、黃熱病毒、狂犬病毒和脊髓灰質炎病毒等,其敏感性都超過目前常用的檢測方法。此外,還可用於鑒定病毒型別,例如皰疹病毒。
參考資料:網路-ELISA
2. 常用的用於病毒感染的檢測方法有哪些
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3. hpv病毒的檢測方法常見的有哪些呢
常見的HPV病毒檢查方法有三種:
第一種,原位雜交法(ISH)。可以准確定位感染病毒的細胞位置,但由於每種類型的hpv都需要特定的探針和試劑,費用太高,臨床上並不能大面積開展使用。
第二種,聚合酶鏈反應檢測(PCR)。通過檢查hpv的DNA,來確定病毒的型號,也是醫院中常用的hpv分型檢測。缺點就是不能檢查病毒的量,只能查出分型。
第三種第二代雜交捕獲實驗檢測(HC-2)。在某些地區比較盛行,但是這種檢測法的缺點,就是只能檢測高危組和低危組這2組一共含有的病毒數量,無法看出病毒的分型和具體哪種型號的載量多少。
現在也有很多基因公司,研發出來HPV自取樣檢測,只要在家裡,使用特製采樣棒,5分鍾便可完成采樣,將樣品郵寄到實驗室,最後在手機上查看結果。比如知名度較高的華大基因SeqHPVHPV分型基因檢測,運用的就是HPV-DNA檢測技術,能夠精準分型檢測14種HPV癌症相關的高危型別和2種疾病相關的低危型別,做到了世衛組織推薦的級別。
另外宮頸癌還是目前唯一一個可以通過接種疫苗來預防的腫瘤疾病,但是接種疫苗之外,定期檢查身體還是必不可少的一步,只要檢測的足夠及時,宮頸癌就會被我們扼殺在搖籃之中。
4. 病毒鑒定常用方法有哪些
寨卡病毒病的檢測方法包括病毒核酸檢測、IgM抗體檢測、中和抗體檢測和病毒分離等。寨卡病毒與黃病毒屬其他病毒具有較強的血清學交叉反應,目前主要採用病毒核酸檢測。
開展蚊媒寨卡病毒檢測時,對捕獲的伊蚊成蚊或幼蟲進行病毒核酸檢測。
開展寨卡病毒實驗室檢測時,應同時考慮登革病毒和基孔肯亞病毒感染可能。登革病毒和基孔肯亞病毒實驗室檢測應按照相應的技術指南開展。
(一)臨床標本檢測。
1.病原學檢測
病原學檢測主要適用於急性期血液標本,一般認為發病7天內檢測陽性率高。
(1)核酸檢測:採用熒光定量RT-PCR方法,是目前早期診斷寨卡病毒病的主要檢測手段。
(2)病毒分離:將標本接種於蚊源細胞(C6/36)或哺乳動物細胞(BHK21、Vero)進行分離培養,出現病變以後,用檢測核酸的方法鑒定病毒。也可使用乳鼠腦內接種進行病毒分離。
2.血清學檢測
(1)血清特異性IgM抗體:發病3天後可檢出病毒特異性IgM抗體,但發病7天後檢出率高。可採用ELISA、免疫熒光等方法檢測。IgM抗體陽性,提示患者可能新近感染寨卡病毒,但寨卡病毒IgM抗體與登革病毒、黃熱病毒和西尼羅病毒等黃病毒有較強的交叉反應,易於產生假陽性。
(2)中和抗體:採用空斑減少中和試驗方法檢測。患者恢復期血清中和抗體陽轉或滴度較急性期呈4倍及以上升高,且排除登革、乙腦等其他常見黃病毒感染,可以確診。
(二)媒介標本檢測。
1.標本處理
將分類後的伊蚊成蚊或幼蟲,按照採集地點,每10~20隻為一份進行研磨處理。
2.病毒核酸檢測
用RT-PCR的方法進行寨卡病毒核酸檢測
3.病毒分離
病毒核酸陽性的標本進行病毒分離。
5. 血站是用什麼方法檢測HIV抗體的
HIV-抗體檢測方法
常見檢測方法
目前作為診斷手段使用的檢測主要包括抗HIV病毒抗體檢測、病毒培養、核酸檢測和抗原檢測。其中對病毒抗體的檢測是最常規使用的方法,這不但是由於這類檢測特異性、敏感性較高,方法相對簡便、成熟,更重要的原因是HIV抗體在病毒感染後除早期短暫的」窗口期」外的整個生命期間長期穩定地存在並可被檢測到。在一些特殊情況下,當抗體檢測無法滿足HIV感染診斷的需要時,病毒分離及測定、核酸檢測、抗原檢測可作為輔助手段使用,這包括對非典型血清學反應樣品的診斷、HIV感染的窗口期診斷、新生兒早期診斷和對特殊樣品的診斷。 一、 酶聯免疫吸附試驗(ELISA)
目前應用的ELISA法有8種之多。它們的特異性和敏感性超過99%。
二、 顆粒凝集法(PA)
PA為快速、簡便的一種篩選方法。如屬陽性,應經WB證實。PA不需任何特殊儀器,其結果用肉眼可判別。全過程僅需5分鍾。缺點有假陽性,且價格昂貴。
三、快速試劑
(一)人類免疫缺陷病毒(HIV)1+2型抗體診斷試劑(膠體硒法)
雅培人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑(膠體硒法)是用於體外,肉眼觀察,定性的免疫分析,檢測血清或血漿中的HIV-1和HIV-2抗體,用於幫助受感染個體的HIV-1和HIV-2抗體。本品僅用於無償獻血員現場初篩及臨床緊急情況的使用,本品檢測陽性者,需進行進一步篩查確認。
(二)InstantCHEKTM-HIVl+2金標快速診斷試劑
InstantCHEKTM-HIV1+2是一種快速、簡單、靈敏的檢驗方法, 用以檢測艾滋病病毒(HIV-1和HIV-2)的抗體。該方法適用於初篩檢測,凡由該試劑測定為陽性者,需用另一種方法檢測如ELISA或用蛋白印記法確定。
四、HIV-抗體確認實驗
免疫印跡試驗(WB)、條帶免疫試驗(LIATEK HIVⅢ)、放射免疫沉澱試驗(RIPA)及免疫熒光試驗(IFA)。國內常用的確認試驗方法是WB。
(一_免疫印跡實驗(westernblot,WB)是廣泛用於許多傳染病診斷的實驗方法,就HIV的病原學診斷而言,它是首選的用以確認HIV抗體的確認實驗方法,WB的檢測結果常常被作為鑒別其他檢驗方法優劣的「金標准」。
確認試驗流程:
有HIV-1/2混合型和單一的HIV-1或HIV-2型。先用HIV-1/2混合型試劑進行檢測,如果呈陰性反應,則報告HIV抗體陰性;如果呈陽性反應,則報告HIV-1抗體陽性;如果不滿足陽性標准,則判為HIV抗體檢測結果不確定。如果出現HIV-2型的特異性指示條帶,需用HIV-2型免疫印跡試劑再做HIV-2的抗體確認試驗,呈陰性反應,報告HIV-2抗體陰性;呈陽性反應則報告HIV-2抗體血清學陽性,並將樣品送國家參比實驗室進行核酸序列分析,
WB的敏感性一般不低於初篩實驗,但它的特異性很高,這主要是基於HIV不同抗原組分的分離以及濃縮和純化,能夠檢測針對不同抗原成分的抗體,因而能夠用WB方法鑒別初篩實驗的准確性。從WB確認試驗結果看出,初篩試驗盡管選擇質量較好的試劑,如第三代ELISA,仍會有假陽性出現,必須通過確認試驗才能得出准確結果。
(二)免疫熒光實驗(IFA)
IFA法經濟、簡便、快速,曾被FDA推薦用於WB不確定樣品的診斷。但需要昂貴的熒光顯微鏡,需要受過良好訓練的技術人員、觀察和解釋結果易受主觀因素的影響,結果不宜長期保存,IFA不宜在一般的實驗室開展和應用。
6. 病毒感染的血清學診斷方法
常用的血清學方法有中和試驗、補體結合試驗、血凝抑制試驗等傳統的方法,以及應用免疫學標記技術發展的酶聯免疫吸附試驗(ELISA)、放射免疫試驗(RIA)及免疫熒光試驗(IF)等特異、靈敏的微量血清學方法。
1.中和試驗(NT)是指病毒在活體內或細胞培養中,被特異性抗體中和而失去感染性的一種試驗。它既可用來檢查患病後或人工免疫後機體血清中抗體的增長情況,也可用來鑒定病毒或研究其抗原結構。中和抗體特異性高、持續時間較長,因此流行病學調查也常用此指征。
2.血凝抑制試驗許多病毒能凝集雞、豚鼠、人等的紅細胞,稱為血凝現象。這種現象能被相應抗體所抑制,稱血凝抑制試驗。其原理是相應抗體與病毒結合後,阻抑了病毒表面的血凝素與紅細胞的結合。
3.酶聯免疫吸附試驗(ELISA)、放射免疫試驗(RIA)及免疫熒光試驗(IF)參見第八節細菌感染的血清學診斷方法的介紹。
4.蛋白印跡試驗(Westernblot,WB)用於檢測HIV抗體,是HIV感染的確認試驗。應用WB也可檢測病毒抗原,但一般不常用。
5.檢測病毒核酸的分子生物學試驗檢測患者血清等標本或病毒培養物中病毒基因或核酸片段的技術有多種:①病毒核酸擴增試驗即聚合酶鏈反應(PCR);②核酸雜交技術,包括點雜交、原位雜交、DNA-DNA印跡雜交(Southernblot)及RNA-DNA印跡雜交(Northernblot)等;③基因晶元技術(genechip);④病毒基因測序等。目前,分子生物學技術日益廣泛地應用於對病毒及其感染的檢測和研究中。
7. 可以用於進行hiv抗體檢測的有哪些
1、人類免疫缺陷病毒(HIV)1+2型抗體診斷試劑(膠體硒法)
雅培人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑(膠體硒法)用於體外,肉眼觀察,定性的免疫分析,檢測血清或血漿中的HIV-1和HIV-2抗體,用於幫助受感染個體的HIV-1和HIV-2抗體。本品僅用於無償獻血員現場初篩及臨床緊急情況的使用,本品檢測陽性者,需進行進一步篩查確認。
2、InstantCHEKTM-HIVl+2金標快速診斷試劑
InstantCHEKTM-HIV1+2為一種快速、簡單、靈敏的檢驗方法,用以檢測艾滋病病毒(HIV-1和HIV-2)的抗體。該方法適用於初篩檢測,凡由該試劑測定為陽性者,需用另一種方法檢測如ELISA或用蛋白印記法確定。
(7)可用於檢測病毒抗體的方法有哪些擴展閱讀
HIV1/2抗體篩查方法包括ELISA法、化學發光法或免疫熒光試驗、快速檢測(斑點ELISA和斑點免疫膠體金或膠體硒快速試驗、明膠顆粒凝集試驗、免疫層析試驗)等,確證試驗常用的方法是免疫印跡法。
篩查試驗呈陰性反應可出具HIV1/2抗體陰性報告,見於未被HIV感染的個體,但處於窗口期的新近感染者篩查試驗也可呈陰性反應。
若呈陽性反應,應用原有試劑和另外一種不同原理或不同廠家的試劑進行重復檢測,或另外兩種不同原理或不同廠家的試劑進行重復檢測,如兩種試劑復測均呈陰性反應,則為HIV抗體陰性;如有一種或兩種試劑呈陽性反應,需進行HIV抗體確證試驗。確證試驗無HIV特異性條帶產生,報告HIV1/2抗體陰性。
8. 免疫學的檢測方法
免疫學檢測方法可分為體液免疫和細胞免疫。
9. 艾滋病抗體的檢查方法
艾滋病病毒抗體檢測
艾滋病病毒抗體檢測:檢測血液中的艾滋病病毒抗體是目前最常用的檢測艾滋病病毒感染的實驗室方法,一般要經過兩個步驟:首先做初篩試驗,如果為陽性,再做確認試驗,確認試驗陽性才可診斷為艾滋病病毒感染。
常用的方法有:
1病原檢測病原檢測主要指用病毒分離培養、電鏡形態觀察、病毒抗原檢測和基因測定等方法從宿主標本中直接檢測病毒或病毒基因。由於前兩種方法難度大,且需要特殊設備和專業技術人員。因此僅抗原檢測和RT-PCR(反轉錄-PCR)可用於臨床診斷。
2 抗體檢測血清中HIV抗體是判斷HIV感染的間接指標。根據其主要的適用范圍,可將現有HIV抗體檢測方法分為篩檢試驗和確證試驗。
3 確證試劑篩檢實驗陽性血清的確證最常用的是Western blot(WB),由於該法相對窗口期較長,靈敏度稍差,而且成本高昂,因此只適合作為確證實驗。隨著第三代和第四代HIV診斷試劑靈敏度的提高,WB已越來越滿足不了對其作為確證實驗的要求。FDA批準的另一類篩檢確證試劑是-免疫熒光-試驗(IFA)。IFA比WB的成本低,而且操作也相對簡單,整個過程在1-1.5小時內即可結束。此法的主要缺點是需要昂貴的熒光檢測儀和有經驗的專業人員來觀察評判結果,而且實驗結果無法長期保存。現在FDA推薦在向WB不能確定的供血員發布最終結果時以IFA的陰性或陽性為准,但不作為血液合格的標准。
4篩檢試驗篩檢試驗主要用於對供血員進行篩查,因此要求操作簡便,成本低廉,而且靈敏、特異。目前世界上主要的篩檢方法仍然是ELISA,還有少數的顆粒凝集試劑和快速ELISA試劑。ELISA有很高的靈敏度和特異性,操作簡單,僅需要實驗室配備酶標儀和洗板機即可應用,特別適合於試驗室大規模篩檢使用。顆粒凝集實驗是另一種操作簡單方便,成本低廉的檢測方法,該方法結果可通過肉眼判定,靈敏度很高,特別適合發展中國家或大量篩選供血員時使用,缺點是必須使用新鮮樣品,特異性較差。80年代後期發展起來的斑點印跡檢測(Dot-blot assay)是一種快速ELISA(Rapid ELISA)方法,這種方法操作極為簡便,過程短暫,整個過程多數在5-10分鍾內甚至3分鍾內即可結束,但該法比ELISA和顆粒凝集試劑昂貴得多。金免疫測定是以膠體金為標記物,以硝酸纖維素膜為載體的固相免疫測定,分為滲濾和層析兩種形式。用於HIV抗體檢體金試紙條屬於金免疫層析,且大多數為間接法及雙抗原夾心法,兩種方法各有優缺點,但都簡單而快速,數分鍾即可得出結論,不需儀器設備,操作人員不需特殊訓練,試劑穩定,適用於單份測定等。
10. 迄今為止,我國檢測新冠病毒有哪些方法
1、熒光PCR法。PCR法指的是聚合酶鏈式反應,能將微量的DNA大幅增加。熒光PCR檢測的原理為——隨著PCR的進行,反應產物不斷累積,熒光信號強度也等比例增加。最後通過熒光強度變化監測產物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。
2、聯合探針錨定聚合測序法。這種檢測主要是用專門的儀器檢測測序載片上DNA納米球攜帶的基因序列。這種檢測的靈敏度高,不容易漏診,但結果也容易受多種因素的影響而不準。
3、恆溫擴增晶元法。檢測原理是基於核酸之間的互補結合特性開發的一種檢測方式,能夠用於定性或定量測量存在於生物體內的核酸。
4、病毒抗體檢測。抗體檢測試劑是檢測血清中由病毒進入人體後刺激人體產生的IgM或IgG抗體,IgM抗體出現較早,IgG抗體出現較晚。
5、膠體金法。膠體金法是用膠體金試紙進行檢測,也就是常說的快速檢測試紙。這種試紙經過特殊標記,上面有孔,用於滴入受檢者的血清樣本。
6、磁微粒化學發光法。化學發光法是一種高度敏感的免疫檢測,凡具有抗原性的物質都可以用這種方法測定。