米氏常數的測定有哪些方法

❶ 除了雙倒數作圖法,還有哪些方法可求得米氏常數Km的值 急,

海涅斯-沃爾弗作圖法

❷ 請問米氏常數的求法。

你可以用吸光值代替反應速度，因為在一定范圍內，吸光值與物質濃度成線性關系，而生成物濃度又與反應速度成正比。米氏常數的定義是反應速度為最大反應速度一半時的底物濃度，而最大吸光值的一半時的底物濃度可以近似等於最大反應速度一半的底物濃度。因此你將反應速度一項換作吸光值即可

❸ 什麼是米氏方程其中的米氏常數有何意義米數常數如何測定

米氏方程表示一個酶促反應的起始速度與底物濃度關系的速度方程Km的意義及應用（1）、活性中心被底物占據一半時的底物濃度。當V=1/2Vmax時，Km=[S]。（2）、Km是特徵常數，一般只與酶的性質、底物種類及反應條件有關，與酶的濃度無關。（3）、Km可近似表示表示酶與底物的親和力Km=(K2+K3)/K1=Ks+K3/K1當K1、K2>>K3時，Km近似等於Ks，因此，1/Km可近似表示酶與底物的親和力大小（4）、Km與天然底物Km最小或最高Vm/Km比值的底物稱之為該酶的最適底物或天然底物。（5）、已知Km，可根據[S]推算V，或由V推算[S]（6）、了解酶的Km及[S]推知是否受[S]調節（7）、用於鑒別原級同工酶、次級同工酶。（8）、測定不同抑制劑對某個酶的Km值的影響判斷抑制類型（非競爭性抑制劑米氏常數不變，最大反應速度減小；競爭性抑制劑米氏常數增大，最大反應速度不變。）（9）、催化可逆反應的酶：測定Km和[S]推測催化反應的方向及程度。測定Km一般用作圖法求得。作圖法有很多，最常用的是Linewaver-Burk作圖法，該法是根據米氏方程的倒數形式，以1/v對1/[S]作圖，可得到一條直線。直線在橫軸上的截距為
-1/Km可求出Km

❹ 測定米氏常數採用雙倒數作圖法的依據是什麼

1）實驗應在初速度時間范圍內進行；

2)配置不同濃度的底物溶液濃度時應該用同一母液進行稀釋，以保證底物濃度的准確性；

3）各種試劑的加入時間，加入量應非常精確；

4）要嚴格控制酶促反應時間做到准確無誤；

5）要將酶液稀釋到恰當的濃度；

6）作圖要准確。

❺ 討論分光光度法測定蔗糖酶的米氏常數對米氏常數的測定結果與底物濃度、反應溫度和酸度的關系

在米氏常數測定試驗中採用底物濃度的倒數為x軸，吸光度的變化為一軸既反應速度的倒數。作圖。取y=0 x=-1/Km
分光光度法是通過測定被測物質在特定波長處或一定波長范圍內光的吸光度或發光強度，對該物質進行定性和定量分析的方法。

❻ 澱粉酶米氏常數測定實驗中用到的試劑：澱粉酶酶液、1％Nacl溶液、0.02％磷酸緩沖液、3，5-二

摘要 1. 酶液: 精確稱取酶制劑0. 1g(以大約2000 U/ g計) , 先用 少量40℃蒸餾水溶解、 浸提。 將上層液小心傾入

❼ 米氏常數

Michaelis&Menten於1913年推導出了上述矩形雙曲線的數學表達式，即米氏方程：ν=Vmax[S]/(Km+[S])。其中，Vmax為最大反應速度，Km為米氏常數。

傳統上，米氏方程動力學描述的是分子數量為1015的集體分子的行為，米氏方程在單分子水平上也是有效的。

⑶Km和Vmax的意義：

①當ν=Vmax/2時，Km=[S]。因此，Km等於酶促反應速度達最大值一半時的底物濃度。

②當k-1>>k+2時，Km=k-1/k+1=Ks。因此，Km可以反映酶與底物親和力的大小，即Km值越小，則酶與底物的親和力越大；反之，則越小。

③Km可用於判斷反應級數：當[S]<0.01Km時，ν=（Vmax/Km）[S]，反應為一級反應，即反應速度與底物濃度成正比；當[S]>100Km時，ν=Vmax，反應為零級反應，即反應速度與底物濃度無關；當0.01Km<[S]<100Km時，反應處於零級反應和一級反應之間，為混合級反應。

④Km是酶的特徵性常數：在一定條件下，某種酶的Km值是恆定的，因而可以通過測定不同酶（特別是一組同工酶）的Km值，來判斷是否為不同的酶。

⑤Km可用來判斷酶的最適底物：當酶有幾種不同的底物存在時，Km值最小者，為該酶的最適底物。

⑥Km可用來確定酶活性測定時所需的底物濃度：當[S]=10Km時，ν=91%Vmax，為最合適的測定酶活性所需的底物濃度。

⑦Vmax可用於酶的轉換數的計算：當酶的總濃度和最大速度已知時，可計算出酶的轉換數，即單位時間內每個酶分子催化底物轉變為產物的分子數。

⑷Km和Vmax的測定：主要採用Lineweaver-Burk雙倒數作圖法和Hanes作圖法。

❽ 測定米氏常數時的關鍵是什麼

反應時間的控制室最關鍵的。加入NAOH終止反應的時間過長，應在之前沸水浴1min終止反應而後再加入NAOH。

❾ 蔗糖酶米氏常數的測定本實驗操作的關鍵是什麼

關鍵點有以下三點：
（1）嚴格控制反應時間；
（2）反應溫度；
（3）pH值。
原因：
是保證酶活性相同,避免由時間,溫度,pH帶來的實驗誤差.

❿ 米氏常數km的意義是什麼

研究酶促反應動力學最重要的常數，數值等於酶促反應達到其最大速度Vm一半時的底物濃度〔S〕，可以表示酶和底物之間的親和能力，Km值越大，親和能力越弱，反之亦然。

判斷酶與底物親和力的大小。Km值小，表示用很低的底物濃度即可達到最大反應速度的一半，說明酶與底物親和力大。可用1／Km近似地表示親和力，1／Km愈大，酶與底物的親和力愈大，酶促反應愈易進行。

(10)米氏常數的測定有哪些方法擴展閱讀：

注意事項：

自然界中酶有千萬種，但並非所有的酶都遵循米氏方程，為了驗證酶是否遵循米氏方程，可以實驗測定在同一酶濃度條件下，不同的底物濃度對應的酶初始反應速率。然後畫出Lineweaver-Burk 雙倒數圖，也就是米氏方程的倒數改寫。

實驗的數據點無法均勻的分布在圖中。為了克服這一缺點，Eadie-Hofstee 做圖法以及Hanes 做圖法相繼被提出。值得一提的是盡管雙倒數法有這一缺陷，其仍然是學術界最普遍應用的測定米氏常數的方法。