種子組織培養方法有哪些

① 組織培養快速繁殖技術有哪些

由於植物細胞具有全能性，將植物體的器官組織細胞甚至原生質體，接種在人工配製的培養基上，在人為控制的環境條件下進行培養，使其增殖生長，分化再生成不定根植株，這種技術成為組織培養在花卉生產中應用組織培養技術主要有4個方面:

①快速繁殖利用一個微型的植物器官或組織在很短的周期內即能生產大量的植株，其繁殖系數比扦插嫁接等常規的營養繁殖要大很多

②去除病毒花卉植物長期利用扦插嫁接等營養繁殖感染病毒，造成觀賞品質退化若利用種胚莖尖微芽在試管內培養，即可以得到脫除病毒的植株，達到品種提純復壯目的

③提高育種效率，改良品種通過對花粉花葯及未授粉子房胚珠培養獲得單倍體，再加倍，一個世代即可獲得混合的二倍體，縮短了育種年限;利用幼胚培養可以挽救敗育的胚，用於克服遠緣雜交的不親和性和雜種胚的早期發育;通過胚乳培養，可以獲得大花型的三倍體植株

④種質保存透過組織培養方法將組培苗愈傷組織體細胞胚等放在低溫或超低溫條件下抑制其生長，可達到長期保存的目的

通常將用植物材料經試管中培養最後形成新植株的途徑分成3類:器官發生途徑通過愈傷組織分化成株途徑胚狀體途徑

② 植物組織培養一般方法

植物組織培養可以分為四個階段：
（1）建立無菌體系，即外植體及培養基的消毒、接種，獲得愈傷組織或器官。
（2）進行增殖，不斷分化產生新的植株，或直接產生不定芽及胚狀體，也可以根據需要反復進行繼代培養，以達到大量繁殖的目的。
（3）將植株轉移進行生根培養，可以轉入生根培養基，也可以直接切取進行扦插生根。
（4）試管苗過渡，即試管苗出瓶後進行一定時間對外界環境的適應過程。

③ 植物組織培養一般的的流程

植物組織培養的流程：

第一步，將采來的植物材料除去不用的部分，將需要的部分仔細洗干凈，如用適當的刷子等刷洗。把材料切割成適當大小，即滅菌容器能放入為宜。置自來水龍頭下流水沖洗幾分鍾至數小時，沖洗時間視材料清潔程度而宜。易漂浮或細小的材料，可裝入紗布袋內沖洗。

第二步是對材料的表面浸潤滅菌。要在超凈台或接種箱內完成，准備好消毒的燒杯、玻璃棒、70%酒精、消毒液、無菌水、手錶等。用70%酒精浸10～30秒。由於酒精具有使植物材料表面被浸濕的作用，加之70%酒精穿透力強，也很易殺傷植物細胞，所以浸潤時間不能過長。

第三步是用滅菌劑處理。表面滅菌劑的種類較多，可根據情況選取1～2種使用見表。第四步是用無菌水涮洗，涮洗要每次3min左右，視採用的消毒液種類，涮洗3～10次左右。

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組織培養技術是在人為創造的無菌條件下將生活的離體器官（如根、莖、葉、莖段、原生質體）、組織或細胞置於培養基內，並放在適宜的環境中，進行連續培養以獲得細胞、組織或個體的技術。

組織培養技術原理

植物組織培養的原理是細胞全能性。也就是說每個植物細胞里都含有一整套遺傳物質，只不過在特定條件下才會表達。

組織培養基於此原理就可以將已處於分化終端或正在分化的植物組織脫分化，誘導形成愈傷組織，再在愈傷組織上形成新的叢生芽。

組織培養技術的應用

（1）改良作物：增加遺傳變異性。

（2）繁殖植物：組織培養中從一個單細胞，一塊愈傷組織，一個芽（或其它器官）都可以獲得無性系。無性系就是用植物體細胞繁殖所獲得的後代。

（3）有用化合物：有用化合物包括葯物、橡膠、香精油、色素等。這些化合物許多都是高等植物的次生代謝物，有些化合物還不能大規模地人工合成，而靠植物產生這些化合物來源有限。因此，利用組織培養方法，培養植物的某些器官或愈傷組織，並篩選出高產、高合成能力、生長快的細胞株系，以進行工業化生產，是一條行之有效的途徑。

④ 植物組織培養的步驟有哪些

組織培養的方法和步驟

要根據培養目的適當選取材料，選擇原則：易於誘導、帶菌少。要選取植物組織內部無菌的材料。這一方面要從健壯的植株上取材料，不要取有傷口的或有病蟲的材料。另一方面要在晴天，最好是中午或下午取材料，決不要在雨天、陰天或露水未乾時取材料。因為健壯的植株和晴天光合呼吸旺盛的組織，有自身消毒作用，這種組織一般是無菌的。培養材料的消毒

從外界或室內選取的植物材料，都不同程度地帶有各種微生物。這些污染源一旦帶人培養基，便會造成培養基污染。因此，植物材料必須經嚴格的表面滅菌處理，再經無菌操作手續接到培養基上。

第一步，將采來的植物材料除去不用的部分，將需要的部分仔細洗干凈，如用適當的刷子等刷洗。把材料切割成適當大小，即滅菌容器能放人為宜。置自來水龍頭下流水沖洗幾分鍾至數小時，沖洗時間視材料清潔程度而宜。易漂浮或細小的材料，可裝入紗布袋內沖洗。流水沖洗在污染嚴重時特別有用。洗時可加入洗衣粉清洗，然後再用自來水沖凈洗衣粉水。洗衣粉可除去輕度附著在植物表面的污物，除去脂質性的物質，便於滅菌液的直接接觸。當然，最理想的清洗物質是表面活性物質—吐溫。

第二步是對材料的表面浸潤滅菌。要在超凈台或接種箱內完成，准備好消毒的燒杯、玻璃棒、70%酒精、消毒液、無菌水、手錶等。用70%酒精浸10～30s。由於酒精具有使植物材料表面被浸濕的作用，加之70%酒精穿透力強，也很易殺傷植物細胞，所以浸潤時間不能過長。有一些特殊的材料，如果實、花蕾、包有苞片、苞葉等的孕穗，多層鱗片的休眠芽等等，以及主要取用內部的材料，則可只用70%酒精處理稍長的時間。處理完的材料在無菌條件下，待酒精蒸發後再剝除外層，取用內部材料。

第三步是用滅菌劑處理。表面滅菌劑的種類較多，可根據情況選取1—2種使用見表。第四步是用無菌水涮洗，涮洗要每次3min左右，視採用的消毒液種類，涮洗3-l0次左右。無菌水涮洗作用是免除消毒劑殺傷植物細胞的副作用注意：①酒精滲透性強，幼嫩材料易在酒精中失綠，所以浸泡時間要短，防止酒精殺死植物細胞。②老熟材料，特別是種子等可以在酒精中浸泡時間長一些，如種子可以浸泡5分鍾。③升汞的滲透力弱，一般浸泡10分鍾左右，對植物材料的殺傷力不大。④漂白粉容易導致植物材料失綠，所以對於幼嫩材料要慎用。⑤在消毒液中加入濃度為0.08—0.12%的吐溫20或80（一種濕潤劑），可以降低植物材料表面的張力，達到更好的消毒效果。滅菌劑 使用濃度(%) 持續時間（min） 去除的難易 效果

次氯酸鈣 9~10 5~30 易 很好

次氯酸鈉 2 5~30 易 很好

氯化汞 0.1~1 5~8 較難 最好

抗菌素 4~50mg/L 30~60 中 較好

制備外植體

將已消毒的材料，用無菌刀、剪、鑷等，在無菌的環境下，剝去芽的鱗片、嫩枝的外皮和種皮胚乳等，葉片則不需剝皮。在操作中嚴禁用手觸動材料。

接種和培養 （一）接種

在無菌壞境下，將切好的外植體立即接在培養基上，每瓶接種1－2個，以防止交叉污染。（二）封口

接種後，瓶、管用無菌葯棉或蓋封口，培養皿用無菌膠帶封口。 （三）溫度

培養基大多應保持在25℃左右，但要因花卉種類及材料部位的不同而區別對待。

增殖

外植體的增殖是組培的關鍵階段，在新梢等形成後為了擴大繁殖系數，需要繼代培養。把材料分株或切段轉入增殖培養基中，增殖培養基一般在分化培養基上加以改良，以利於增殖率的提高。增殖1個月左右後，可視情況進行再增殖。

根的誘導

繼代培養形成的不定芽和側芽等一般沒有根，必須轉到生根培養基上進行生根培養。1個月後即可獲得鍵壯根系。

組培苗的煉苗移栽 試管苗從無菌到光、溫、濕穩定的環境進入自然環境，必須進行煉苗。一般移植前，先將培養容器打開，於室內自然光照下放3天，然後取出小苗，用自來水把根繫上的營養基沖洗干凈，再栽入已准備好的基質中，基質使用前最好消毒。移栽前要適當遮蔭，加強水分管理，保持較高的空氣濕度（相對濕度98％左右），但基質不宜過濕，以防爛苗。
植物組織培養方法 1 MS培養基的配製包括以下步驟.
培養基母液的配製和保存 MS培養基含有近30種營養成分,為了避免每次配製培養基都要對這幾十種成分進行稱量,可將培養基中的各種成分,按原量的20倍或200倍分別稱量,配成濃縮液,這種濃縮液叫做培養基母液.這樣每次使用時,取其總量的1/20（50 mL）或1/200（5 mL）,加水稀釋,製成培養液.現將制備培養基母液所需的各類物質的量列出,供配製時使用.
大量元素(母液Ⅰ) mg／L
NH4NO3 33 000
KNO3 38 000
CaCl2·2H2O 8 800
MgSO4·7H2O 7 400
KH2PO4 3 400
微量元素(母液Ⅱ)
KI 166
H3BO3 1 240
MnSO4·4H2O 4 460
ZnSO4·7H2O 1 720
Na2MoO4·2H2O 50
CuSO4·5H2O 5
CoCl2·6H2O 5
鐵鹽(母液Ⅲ)
FeSO4·7H2O 5 560
Na2-EDTA·2H2O 7 460
有機成分(母液Ⅳ)
ⅣA
肌醇 20 000
ⅣB
煙酸 100
鹽酸吡哆醇(維生素B6) 100
鹽酸硫胺素(維生素B1) 100
甘氨酸 400
以上各種營養成分的用量,除了母液Ⅰ為20倍濃縮液外,其餘的均為200倍濃縮液.
上述幾種母液都要單獨配成1 L的貯備液.其中,母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配製方法是：每種母液中的幾種成分稱量完畢後,分別用少量的蒸餾水徹底溶解,然後再將它們混溶,最後定容到1 L.
母液Ⅲ的配製方法是：將稱好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分別放到450 mL蒸餾水中,邊加熱邊不斷攪拌使它們溶解,然後將兩種溶液混合,並將pH調至5.5,最後定容到1 L,保存在棕色玻璃瓶中.
各種母液配完後,分別用玻璃瓶貯存,並且貼上標簽,註明母液號、配製倍數、日期等,保存在冰箱的冷藏室中.
MS培養基中還需要加入2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）、萘乙酸（NAA）、6-苄基嘌呤（6BA）等植物生長調節物質,並且分別配成母液（0.1 mg/mL）.其配製方法是：分別稱取這3種物質各10 mg,將2,4-D和NAA用少量（1 mL）無水乙醇預溶,將6BA用少量（1 mL）的物質的量濃度為0.1 mol/L的NaOH溶液溶解,溶解過程需要水浴加熱,最後分別定容至100 mL,即得質量濃度為0.1 mg/mL的母液.
配製培養液 用量筒或移液管從各種母液中分別取出所需的用量：母液Ⅰ為50 mL,母液Ⅱ、Ⅲ、ⅣA和ⅣB各5 mL.再取2,4-D 5 mL、NAA 1 mL,與各種母液一起放入燒杯中.
配製培養液時應注意：①在使用提前配製的母液時,應在量取各種母液之前,輕輕搖動盛放母液的瓶子,如果發現瓶中有沉澱、懸浮物或被微生物污染,應立即淘汰這種母液,重新進行配製；②用量筒或移液管量取培養基母液之前,必須用所量取的母液將量筒或移液管潤洗2次；③量取母液時,最好將各種母液按將要量取的順序寫在紙上,量取1種,劃掉1種,以免出錯.
溶化瓊脂 用粗天平分別稱取瓊脂9 g、蒸糖30 g,放入1 000 mL的搪瓷量杯中,再加入蒸餾水750 mL,用電爐加熱,邊加熱邊用玻璃棒攪拌,直到液體呈半透明狀.然後再將配好的混合培養液加入到煮沸的瓊脂中,最後加蒸餾水定容至1 000 mL,攪拌均勻.
調pH 用滴管吸取物質的量濃度為1 mol/L的NaOH溶液,逐滴滴入溶化的培養基中,邊滴邊攪拌,並隨時用精密的pH試紙（5.7.0）測培養基的pH,一直到培養基的pH為5.8為止（培養基的pH必須嚴格控制在5.8）.
2 BA為細胞分裂素 NAA 是萘乙酸,為生長素的一種
3 適於百合根的激素暫時沒找到
以下是葉片和胚的激素：對麝香百合 (LiliumlongiflorumThunb)葉片進行離體培養 ,可成功獲得無菌苗.試驗結果表明 :培養基MS +BA 0 1mg/L +NAA 1 0mg/L適於初代培養 ,有助於根和芽的分化 ;MS +BA 0 5mg/L +NAA1 5mg/L適於增殖培養 ,利於愈傷組織的產生 ,並促進芽的分化 ;生根培養基為 1/ 2MS +NAA 1 0mg/L +多效唑 10 0mg/L ;當試管苗根長 1cm時移栽易成活
在含有1 mg/ L IAA,1 m g/ L GA3,6 0 0 m g/ L CH的 MS培養基上培養 ,蔗糖含量為 6 8%時 ,百合幼胚胚性生長最好 ,培養 30 d後可以得到正常胚 .在含有 0 .1 m g/ L NAA,1 m g/ L BA的 MS培養基上可以形成淡綠色的愈傷組織 ,將這些愈傷組織轉移到 1 / 2 MS無激素的培養基上培養可以形成大量的不定芽 ,不定芽生根移栽後 ,其成活率可達90 %以上

⑤ 普亞鳳梨種子組織培養方法的步驟有哪些

①無菌材料獲得。取普亞鳳梨種子，輕輕搓去種子外的膜衣，直接在超凈工作台上挑選飽滿的種子，用0.1%HgCl2水溶液振盪消毒15min（加2滴吐溫），無菌水沖洗5～6次後，再用無菌紙吸干水分。

②種子萌發。種子萌發培養基：MS＋蔗糖30g/L＋卡拉膠5.8g/L，pH5.8～6.0。培養溫度25～29℃，光照時間10～12h/d，光照度20～30μmol/（m2穝）。

10d後，種子尖端部位開始膨大，纖維狀種皮下顯綠色。繼續在此培養基上培養40～60d，種子即可發育出胚根和子葉。3個月時，形成完整小植株。可將此植株直接移栽，也可以切掉根後利用芽進行增殖。

③不定芽增殖。不定芽增殖培養基：MS＋6-BA4.0～6.0mg/L＋NAA0.1mg/L＋蔗糖30g/L＋卡拉膠5.8g/L，pH5.8～6.0。培養溫度25～29℃，光照時間10～12h/d，光照度30～40μmol/（m2穝）。

將叢生芽切分成小塊，接種到繼代培養基上，光照培養，每隔30～40d繼代1次，增殖系數在3.0以上。

④壯苗培養。壯苗培養基：MS＋＋6-BA1.0＋NAA0.1mg/L蔗糖30g/L＋卡拉膠5.8g/L，pH5.8～6.0。培養溫度25～29℃，光照時間12～15h/d，光照度30～40μmol/（m2穝）。

把產生的叢生不定芽分成單株或切割成小塊後接種於培養基中。每瓶接種10株或叢生芽4塊。

⑤生根培養。生根培養基：MS＋NAA0.2mg/L＋蔗糖30g/L＋卡拉膠5.8g/L，pH5.8～6.0。培養溫度25～29℃，光照時間15～20h/d，光照度40μmol/（m2穝）。

當繼代增殖的叢生芽長高到3～4cm時，將叢生芽分成單株，接種到生根培養基上，每瓶10株。光照培養25d後，生根率達100%。生根苗葉片濃綠，植株粗壯。可置於蔭棚（70%～80%遮陰度）內煉苗，5～7d後可進行移栽。

⑥移栽。移栽時，用清水將黏附在根上的培養基洗凈，用0.2%～0.3%多菌靈水溶液浸泡10～15min，移栽到基質中，淋水定根。基質宜選疏鬆肥沃的表土並配以過篩的河沙及椰糠、泥炭為宜，並用土壤消毒劑消毒。移栽密度為每平方米100～120株。移栽後遮陰保濕10～15d，然後逐漸去掉保濕遮陰物。移栽成活率100%。

普亞鳳梨種子組織培養

A.種子萌動B.種子萌發出芽C.形成小植株D.不定芽增殖E.生根F.移栽成活。

⑥ 六種育種方法.名稱.原理.過程.優缺點

六種育種方法包括植物的四種（雜交育種、遠緣雜交、誘變育種、分子育種）和動物的兩種（雜交育種、基因工程育種）。

一、雜交育種：

1、原理：基因重組，通過基因重組產生新的基因型，從而產生新的優良性狀。

2、過程：

2.1雜交前的准備工作首先要熟悉各種魚類的生殖習性；

2.2選擇適當的受精方法進行雜交雜交前期在臨近性成熟和生殖季節到來之時，一定要將雌雄兩種魚分池飼養，避免自群交配；

2.3記載、掛牌和管理用不同品種(或種)的魚類進行雜交；

2.4加速育種進程從雜交到新品種育成推廣；

2.5雜交後代的選擇採用個體選擇法時，選擇一般從子二代開始，因子二代變異范圍最大，可望從中選出合意的變異體。

3、優點：可以將兩個或多個優良性狀集中在一起。

4、缺點：不會產生新基因，且雜交後代會出現性狀分離，育種過程緩慢，過程復雜。

二：遠緣雜交

1、原理：基因重組，通過基因重組產生新的基因型，從而產生新的優良性狀。

2、優缺點：可以把不同種、屬的特徵、特性結合起來，突破種屬界限，擴大遺傳變異，從而創造新的變異類型或新物種。產生的後代為遠緣雜種。由於遠緣雜交往往重演物種的進化的歷程，故也是研究生物進化的重要實驗手段。遠緣雜交一般不易結實，即使結實，雜種也通常不育或夭亡，雜種後代分離幅度大，分離世代長且不易穩定。

三：誘變育種

1、原理：在人為的條件下，利用物理、化學等因素，誘發生物體產生突變，從中選擇，培育成動植物和微生物的新品種。

2、優缺點：誘變育種存在的主要問題是有益突變頻率仍然較低，變異的方向和性質尚難控制。因此提高誘變效率，迅速鑒定和篩選突變體以及探索定向誘變的途徑，是當前研究的重要課題。

四：分子育種

1、原理：將基因工程應用於育種工作中，通過基因導入，從而培育出一定要求的新品種的育種方法。

2、優缺點：傳統育種方法屬於雜交育種，品種改良主要受種原變異之限制，而不同物種(species) 間之雜交頗為困難，育種成果難有大突破，「綠色革命」(green revolution) 很難再發生。利用基因工程技術進行作物品種改良，系指以遺傳工程(genetic engineering) 技術，將特定基因或性狀導入缺乏此基因或特性之目標作物(target crop) 的育種方法；因此利用基因工程技術進行作物品種改良，可以突破種原之限制及種間雜交之瓶頸，創造新性狀或新品種，亦即未來「基因革命」(gene revolution) 很可能迅速取代「綠色革命」。

五、基因工程育種

1、原理：基因重組(或異源DNA重組)。

2、優缺點：不受種屬限制，可根據人類的需要，有目的地進行。可能會引起生態危機，技術難度大。

⑦ 植物組織培養類型有哪些呢

（一）按外植體的來源分
外植體：是指在植物組織培養過程中，從植物母體上取來，用於離體培養的初始材料。
（1）植株培養
是指對具有完整植株形態的幼苗或較大的植株進行離體培養的方法。
（2）胚胎培養
是指對植物成熟或未成熟胚進行離體培養的方法。常用的胚胎培養材料有幼胚、成熟胚、胚乳、胚珠、子房。
（3）器官培養
是指對植物體各種器官及器官原基進行離體培養的方法。常用的器官培養材料有根（根尖，切段）、莖（莖尖、切段）、葉（葉原基、葉片、子葉）、花（花瓣、雄蕊）、果實、種子等。
（4）組織培養
是指對植物體各部位組織或已誘導的愈傷組織進行離體培養的方法。常用的組織培養材料有分生組織、形成層、表皮、皮層、薄壁細胞、髓部、木質部等。
（5）細胞培養
是指對植物的單個細胞或較小的細胞團進行離體培養的方法。常用的細胞培養材料有性細胞、葉肉細胞、根尖細胞、韌皮部細胞等。
（6）原生質體培養
是指對除去細胞壁的原生質體進行離體培養的方法。
（二）按培養過程分
（1）初代培養
將植物體上分離下來的外植體進行最初幾代培養的過程。其目的是建立無菌培養物，誘導腋芽或頂芽萌發，或產生不定芽、愈傷組織、原球莖。通常是植物組織培養中比較困難的階段，也稱啟動培養、誘導培養。
（2）繼代培養
將初代培養誘導產生的培養物重新分割，轉移到新鮮培養基上繼續培養的過程。其目的是使培養物得到大量繁殖，也稱為增殖培養。
（3）生根培養
誘導無根組培苗產生根，形成完整植株的過程。其目的是提高組培苗田間移栽後的成活率。
（三）根據培養基的類型分為:
1、固體培養: 瓊脂、卡拉膠等固化。
2、半液半固體培養：固液雙層。
3、液體培養：震盪、旋轉或靜置培養。
（四）根據再生途徑分為：
1、愈傷組織途徑；
2、芽增殖途徑：
3、原球莖途徑：
4、體胚發生途徑：

⑧ 如何進行組織培養

專家解答

組織培養繁殖法是利用細胞的全能性和組織的再生能力，切取草莓植株的部分組織或器官，在無菌條件下，接種到人工配置的培養基上，使之發育成完整的植株。草莓組織培養繁殖的優點是：

（1）植株健壯結果好任何植物在長期的無性繁殖過程中都容易感染病毒，受到病毒感染的植株生活力衰退，產量降低，品質變劣。而組織培養繁殖的整個過程是在無菌環境中進行的，對於做繁殖材料的莖尖也要進行脫毒處理，這樣所得的秧苗不含或少含病毒，比一般秧苗葉片大而厚，葉色濃綠；生長健壯且整齊一致；結果期延長3周，平均增產20%左右；果個大，品質優。

（2）繁殖速度快利用組織培養法繁殖草莓，一年內一個分生組織可獲得幾千株甚至幾萬株秧苗，這種繁殖方法對加速新品種推廣，特別是對抽生匍匐莖低的品種的繁殖更為有利。

（3）繁殖不受季節限制組織培養是在操作室和配套溫室中進行的，不受外界環境條件的影響，一年四季均可生產，在人工控制條件下，可進行工廠化育苗。

（4）節省土地，利於種質保存用組織培養法繁殖是在實驗室中進行的，對露地佔用少。所以，不僅節省土地，便於管理，而且對保存種質資源更加安全。

組織培養繁殖有以下幾個步驟：

（1）配製培養基常用的培養基是MS培養基、懷特培養基，其配方見表11。

①配製母液。將營養成分中大量元素擴大10倍，微量元素擴大100倍。把大量元素、微量元素、有機生長物質分別貼上標簽，放在3～5℃環境中待用。植物生長調節劑如6-苄基嘌呤、激動素用少量0.5摩爾/升的鹽酸溶解，萘乙酸用酒精溶解，溶解後加水稀釋。

②培養基配製。將所要用的瓊脂加熱溶解，加入蔗糖攪拌，配製成瓊脂-蔗糖液。然後按量把配製好的母液置入准備好的容器中，接著把瓊脂-蔗糖液也置入同一容器中，充分攪拌，定容到規定的體積。

③調整酸鹼度。瓊脂培養基加熱滅菌時，pH會降低0.1～0.3，所以在加熱前用0.1摩爾/升的鹽酸或氫氧化鈉液調整培養基的pH。

④高溫消毒。把培養基趁熱注入試管或三角瓶內，注入量為容器容積的1/3左右，塞上棉塞，縛緊，放入高壓蒸汽鍋內滅菌。蒸汽鍋壓力維持在78.5～98千帕，時間為10～20分鍾。

單位：毫克/升序號化合物MSWhite1硝酸鉀（KNO3）1900802硝酸銨（NH4NO3）1650-3四水硝酸鈣[Ca（NO3）2·4H2O]-3004硫酸鈉（Na2SO4）-2005七水硫酸鎂（MgSO4·7H2O）3707206七水磷酸二氫鈉（NaH2PO4·7H2O）-16.57磷酸二氫鉀（KH2PO4）170-8氯化鉀（KCl）-659一水氯化鉀（KCl·H2O）440-10四水硫酸錳（MnSO4·4H2O）22.37.011七水硫酸鋅（ZnSO4·7H2O）8.63.0表11營養基配方序號化合物MSWhite12硫酸鐵[Fe2（SO4）3]-2.513五水硫酸銅（CuSO4·5H2O）0.0250.00114氧化鉬（MoO3）-0.00115硼酸（H3PO3）6.21.516碘化鉀（KI）0.830.7517六水氯化亞鈷（CoCl2·6H2O）0.025-18二水鉬酸鈉（Na2MoO4·2H2O）0.25-19肌醇10010020煙酸0.50.321鹽酸硫胺素0.40.122鹽酸吡哆醇0.50.123甘氨酸2.0324蔗糖300002000025瓊脂100001000026pH5.85.6表11營養基配方（續）-1（2）選材與消毒選取健壯植株上充實、小葉尚未展開的匍匐莖先端3厘米左右的幼嫩組織作培養材料。將材料用潔凈流動的清水沖洗0.5～1個小時，然後用70%的酒精浸泡1分鍾，再用0.1%升汞水浸泡7分鍾，最後用無菌水沖洗2～3次。

（3）接種在無菌的超凈工作台上，用鑷子去掉莖尖組織的葉片，在解剖鏡下，用消過毒的刀片切取莖尖分生組織0.3～0.5毫米大小，放入備用的培養基上。

（4）初代培養將接過種的試管或三角瓶放置在溫度25～28℃，光照強度2000勒克斯，每天照射10小時的無菌條件下進行培養。10～15天接種物開始萌發，再經7～10天接種物產生很多小芽，形成芽叢；3個月後，無根苗長至3～4厘米。這時初代培養結束。

（5）繼代培養當初代培養的無根苗長到3～4厘米時，將其取出進行生根培養。把剩下沒達到3～4厘米的芽，按3～4個芽為一個芽叢重新分開，再重新植入同種培養基（初代培養基）上進行增殖培養，這種增殖培養稱繼代培養。1個月左右新的一批無根苗又繁殖出來，再用同種方法進行下一次繼代培養。

（6）生根培養將初代培養或繼代培養的高度已達到3～4厘米的無根苗，扦插到珍珠岩內進行生根培養。生根培養的苗床溫度保持在18～20℃，空氣濕度在80%以上，珍珠岩中要噴灑營養液和生根素。20天以後，當秧苗長出3～4條，長度達1.5～2.5厘米的根系時，可進行移栽鍛煉。目前國內比較常用的營養液配方見表12。

化合物名稱園試配方化合物用量毫克/升毫摩/升元素含量（毫克/升）大量元素總計（毫克/升）Ca（NO3）.7P41MgSO4.7H2O4932Mg48S64Na2Fe-EDTA20-Fe2.8H3BO32.86-B0.5MnSO4·4H2O2.13-Mn0.05ZnSO4·7H2O0.22-Zn0.05CuSO4·5H2O0.08-Cu0.02（NH4）6Mo7O24·4H2O0.02-Mo0.01N243P41K312Ca160Mg48S64表12營養液配方註：參引2001年張福墁主編《設施園藝學》。

（7）移栽當秧苗已長出3～4條1.5～2.5厘米長新根時，可移栽到室外進行土壤育苗。移栽後的前兩周應覆蓋薄膜與覆蓋遮陽網，保持土壤和空氣濕度，緩苗後撤除覆蓋物。

提示板

組織培養能培育優質的壯苗，但技術要求比較嚴謹，目前還只在科研院所進行。隨著科技的進步，大型繁育場將逐步得到推廣。無毒育苗將是草莓苗木繁育的主要手段。

⑨ 植物組培步驟

組織培養的步驟
一、培養基配製
配製培養基有兩種方法可以選擇，一是購買培養基中所有化學葯品，按照需要自己配製；二是購買商品的混合好的培養基基本成分粉劑，如MS、B5等。
自己配製可以節約費用，但浪費時間、人力、且有時由於葯品的質量問題，給實驗帶來麻煩。就目前國內的情況看，大部分還是自己配製。為了方便起見，現以MS培養基為例介紹配置培養基的主要過程。
1、配製幾種母液
（1）配製MS大量元素母液
一般將大量元素分別配製成100倍的母液，使用時再分別稀釋100倍。
分別稱取
NH4NO3 165g KH2PO4 17g
KNO3 190g CaCl2·2H2O 44g
MgSO4·7H2O 37g
各自配成1L的母液。倒入1L試劑瓶中，存放於冰箱中。
（2）配製MS微量元素母液
一般將微量元素配製成100倍母液。
依次稱取
KI 0.083g Na2MoO4·2H2O 0.025g
H3BO3 0.62g CuSO4·5H2O 0.0025g
MnSO4·H2O 1.69g CoCl2·6H2O 0.0025g
ZnSO4·7H2O 0.86g
配成1L母液，倒入1L試劑瓶中，存放於冰箱中。
CuSO4·5H2O和CoCl2·6H2O 由於稱取量很小，如果天平精確度沒有達到萬分之一，可先配成調整液。
分別稱取
CuSO4·5H2O 0.05g CoCl2·6H2O 0.05g
各自配成100ml的調整液，然後取5ml就還有0.0025g的量。
（3）配製MS有機母液
一般配製成100倍MS有機母液。
依次稱取
肌醇 10g 鹽酸硫胺素（VB1） 0.01g
煙酸 0.05g 甘氨酸 0.2g
鹽酸吡哆醇（VB6） 0.05g
配成1L母液，倒入1L試劑瓶中，存放於冰箱中。
（4）配製MS鐵鹽母液
一般配製成100倍MS鐵鹽母液。
依次稱取
EDTA二鈉 3.73g FeSO4·7H2O 2.78g
配成1L母液，倒入1L試劑瓶中，存放於冰箱中。
所以MS母液有5種大量元素母液，加上MS微量元素母液、MS有機母液和MS鐵鹽母液，共8種母液。
激素母液的配製
各種生長素和細胞分裂素要單獨配製，不能混合在一起，生長素類一般要先用少量95%的酒精或1當量的NaOH溶解，細胞分裂素一般要先用1當量的鹽酸溶解，然後再加蒸餾水定容。一般取100mg配成100ml母液。
2、配製培養基
以配置1L MS培養基為例，按順序進行如下操作：
（1）先在燒杯中放入一些蒸餾水。
（2）分別取上面八種母液10ml倒入。
（3）一般稱取30g蔗糖倒入，攪拌溶解。
（4）加蒸餾水用量筒定溶至1L。
（5）按設計好的方案添加各種激素，由於激素的用量很小，而且激素對組培植物的生長至關重要。所以有條件的話最好用微量可調移液器吸取，減少誤差。
（6）用精密試紙或酸度計調整PH至5.7-5.8。（有條件的話使用酸度計，比較精確） 可配1當量的HCL和1當量的NaOH用來調溶液PH值。
1當量HCL配製：用量筒量取8.3ml配成100ml溶液。
1當量NaOH配製：稱取NaOH 4g 配成100ml溶液。
（7）稱取5g左右瓊脂粉（質量好的瓊脂粉),倒入上面配好的溶液中，放在電爐上加熱至沸騰，直到瓊脂粉熔化。
（8）稍微冷卻後，分裝入培養容器中。無蓋的培養容器要用封口膜或牛皮紙封口，用橡皮筋或繩子扎緊。
（9）放入消毒滅菌鍋滅菌，滅菌20分鍾左右。
（10）滅菌後從滅菌鍋中取出培養基，平放在實驗台上令其冷卻凝固。